"Временные методические указания по определению блазера в воде, почве, сое и зеленых листьях методом хроматографии в тонком слое" // Технорма.RU

Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

27 ноября 1984 г. N 3156-84

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ БЛАЗЕРА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, СОЕ И ЗЕЛЕНЫХ

ЛИСТЬЯХ МЕТОДОМ ХРОМАТОГРАФИИ В ТОНКОМ СЛОЕ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Краткая характеристика препарата

1.1. Химическое название - блазер (20%) селективный контактный гербицид.

Действующее вещество препарата - ацифлуорфен натрия - из группы дифенилэфиров. 5-[2-хлор-4(трифторметил)-фенокси]-2-нитробензоат натрия.

1.2. Структурная и эмпирическая формулы:

___ CO Na C H ClF NO Na

---Cl --- 2 14 6 3 5

F C-// \\-O-/ \-NO

3 \ ___ / \\ // 2 Мол. масса 383,65.

--- ---

1.3. Совместимость.

С другими гербицидами смешивать не рекомендуется. Дальнейшая борьба с сорняками может проводиться лишь через 7 дней после опрыскивания блазером.

1.4. Химически чистое соединение - белое кристаллическое вещество со слабым запахом. Точка плавления - 250 °С (с разложением).

Хорошо растворяется в воде (> 25%), этаноле, метаноле, ацетоне (больше 5 х 10 мг/л); практически не растворим в гидрофобных органических растворителях.

Выпускаются две препаративные формы (к.э.): блазер 2 L и блазер 2 S,

содержащие почти равное количество (20,4 и 21,4%) действующего вещества.

ЛД для крыс - 1300 мг/кг; для пчел ЛД - 271,26 мг/пчела.

50 50

1.5. Биологические свойства

Блазер - новый высокоэффективный селективный контактный послевсходовый гербицид, подавляющий широколистные сорняки, произрастающие на полях сои. Имеет широкий спектр действия и может использоваться в любой стадии развития сои. При проникновении блазера через листовую поверхность сорняки начинают погибать через 3 - 4 часа. Используется в дозе 2 л/га. ДОК не установлен.

2. Методика определения блазера

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода.

Методика основана на извлечении блазера из воды, почвы и растительных проб одним из растворителей с последующим хроматографированием в тонком слое стандартных пластинок "Силуфол".

2.1.2. Метрологическая характеристика метода.

┌────────┬──────────┬─────────────┬───────────┬───────────┬───────┬───────┐

│Объект │Среднее │Доверительный│Стандартное│Относитель-│Предел │Нижний │

│исследо-│значение │ интервал │отклонение,│ное стан- │обнару-│предел │

│вания │определе- │среднего при │ S (%) │дартное │жения, │обнару-│

│ │ _ │альфа - 0,95;│ │отклонение,│мг/кг; │жения, │

│ │ния, с (%)│ n - 6 (%) │ │S (%) │мг/л │мкг │

│ │ │ │ │ r │ │ │

├────────┼──────────┼─────────────┼───────────┼───────────┼───────┼───────┤

│Почва │84,5 │84,5 +/- 5 │3,62 │4,3 │0,10 │0,5 - 1│

│Вода │91,8 │91,8 +/- 3 │2,32 │2,5 │0,05 │ │

│Соя │80,0 │80,0 +/- 5 │3,75 │4,7 │0,10 │ │

│Зеленые │79,0 │79,0 +/- 7 │5,90 │7,5 │0,20 │ │

│листья │ │ │ │ │ │ │

└────────┴──────────┴─────────────┴───────────┴───────────┴───────┴───────┘

2.1.3. Избирательность метода

Метод специфичен, другие соединения типа мочевинопроизводных, симм-триазиновых в данных условиях хроматографирования определению не мешают.

2.2. Реактивы и растворы

Алюминия окись безводная, ТУ 6-09-426-83.

Аммония хлорид, х.ч., ГОСТ 3773-60.

Ацетон, х.ч., ГОСТ 2603-79; осч., ТУ-6-09-3513-82.

Вода дистиллированная.

н-Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.

Индиго - 5,5 - дисульфокислоты динатриевая соль (индиго-дисульфонат

натрия), ч.д.а., ТУ 711-31-70.

Натрия сульфат безводный, ч., ГОСТ 4166-76.

Серебро азотнокислое, х.ч., ГОСТ 1277-81.

Серная кислота, х.ч., ГОСТ 4204-77.

Стандартный раствор блазера в этаноле (200 мкг/мл. Хранить в холодильнике, срок годности 3 месяца).

Фосфорная кислота (орто), х.ч., ГОСТ 6552-80.

Этиловый спирт 96-процентный, ТУ 6-09-1710-77.

Этилацетат, х.ч., ТУ 6-09-6515-70.

Натр едкий, ч.д.а., ГОСТ 4328-77.

Проявляющие реактивы:

1) 0,1-процентный раствор индигокармина (0,1 г индигокармина растирают в ступке с 5-ю мл концентрированной серной кислоты, оставляют на ночь, после чего доводят дистиллированной водой до 100 мл);

Примечание: проявление хроматограмм можно производить как первым, так и

вторым способом. Для более четкой вырисовки пятен после AgNO и

УФ-облучения можно опрыснуть индигокармином. В первом случае препарат

проявляется в виде белых пятен на бежеватом фоне, во втором - синих пятен

на бледно-голубом фоне.

2) 1-процентный раствор азотнокислого серебра в этаноле;

3) Ультрафиолетовое облучение.

2.3. Приборы и посуда

Аппарат для встряхивания проб, АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73.

Вентилятор.

Весы равноплечие ручные (ВР-1, ВР-20, ВР-100), ГОСТ 359-54.

Весы аналитические АДВ-20.

Воронки химические, ГОСТ 8613-75.

Воронки делительные, ГОСТ 8613-75.

Воронки Бюхнера, ГОСТ 9147-81.

Испаритель ротационный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.

Камера для хроматографирования, ГОСТ 10565-75.

Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.

Колбы плоскодонные емкостью 150 - 250 мл, ГОСТ 1770-74.

Колбы мерные на 50 - 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Колбы Бунзена, ГОСТ 6514-75.

Лампа ртутно-кварцевая ПРК-2 или ПРК-4 (для УФ-облучения).

Мензурки на 25 - 50 мл.

Мельница.

Микропипетки для нанесения растворов на 0,1 - 0,2 мл, ГОСТ 20292-74.

Палочки стеклянные.

Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-74.

Сито с отверстиями 0,1 мм и 1 мм.

Фильтры бумажные, ТУ 6-09-1678-77.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Отбор, хранение и доставка проб.

Отбор, хранение и доставку проб производят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения пестицидов", утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР А.И. Заиченко за N 2051-79 от 21 августа 1979 г.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция препарата из анализируемой пробы.

Вода. 1) 100 мл анализируемой воды сразу помещают в колбу для ротационного испарителя и выпаривают досуха. Препарат извлекают небольшими порциями (0,1 - 0,3 мл) этилацетата и наносят на хроматографическую пластинку.

2) К 100 мл анализируемой воды прибавляют 50 мл этилацетата и ставят на аппарат для встряхивания на 20 - 30 минут. Этилацетат сливают, прибавляют его новую порцию (25 мл) к воде и снова встряхивают на качалке. Эту операцию повторяют еще раз и через делительную воронку отделяют этилацетатные экстракты. Последние проводят через безводный сернокислый натрий, переносят в колбу для отгонки растворителя, упаривают и хроматографируют.

Примечание: При работе вторым способом иногда при сильном встряхивании образуются стойкие эмульсии, которые можно устранить добавкой небольшого количества (до 1 мл) этилового спирта.

Почва. 100 г воздушно-сухой почвы, предварительно просеянной через сито, заливают водой (до покрытия пробы) и оставляют на ночь или ставят на аппарат для встряхивания на два часа. Воду отфильтровывают через бюхнеровскую воронку. Полученную водную вытяжку выпаривают досуха, а препарат извлекают небольшими порциями (по 0,3 мл) этилацетата и наносят на хроматографическую пластинку.

Соя. 1) К 5 г сои (грубый помол с частицами в 1 - 2 мм) добавляют оводненный ацетон (60%), оставляют на ночь или ставят на качалку на 30 минут. Отфильтровывают через бюхнеровскую воронку и ставят на выпаривание до маслянистого остатка. Остаток обмывают 10 - 15 мл 1% раствора NaOH. Эту манипуляцию проделывают еще 2 раза. Полученный щелочной раствор помещают в делительную воронку и дважды энергично встряхивают с гексаном. Гексан как ненужную фракцию отбрасывают, а раствор щелочи подкисляют соляной кислотой до нейтральной реакции. Из последнего препарата извлекают этилацетатом (20 мл) трижды. Этилацетатные экстракты объединяют, проводят через безводный сернокислый натрий и выпаривают досуха, затем наносят на пластинку.

2) К 5 г сои добавляют воду и равное количество коагулирующей смеси: 5 г хлорида аммония растворяют в 10 мл дистиллированной воды, приливают 10 мл 85% ортофосфорной кислоты и доводят дистиллированной водой до 1 литра, и ставят на качалку на 30 минут. Затеи отфильтровывают, доводят раствор до нейтральной реакции 10% раствором NaOH и извлекают этилацетатом по 25 мл трижды. Этилацетатные экстракты объединяют, высушивают безводным сернокислым натрием и выпаривают на роторном испарителе до 0,1 мл. Препарат извлекают небольшими порциями этилацетата и наносят на пластинку.

Зеленые листья. Растертые листья (10 г) заливают водой и оставляют на ночь или ставят на аппарат для встряхивания на 2 часа, затем извлекают этилацетатом (по 25 мл) трижды. Объединенные экстракты высушивают безводным сернокислым натрием, выпаривают на роторном испарителе и наносят на пластинку.

2.5.2. Хроматография в тонком слое сорбента.

Пробу количественно переносят на хроматографическую пластинку "Силуфол". Рядом наносят стандартный раствор с различным содержанием блазера (10 - 20 мкг). После этого пластинку помещают в камеру для хроматографирования, предварительно наполненную растворителем. Перед каждой хроматограммой растворитель следует менять на свежеприготовленный. Подвижной фазой для блазера является смесь гексана с ацетоном в соотношении 59:41 или изопропиловый спирт с бензолом - 25:75. После поднятия линии фронта на 12 - 13 см пластинку из камеры вынимают, высушивают на воздухе до полного удаления растворителя.

Проявление зон локализации блазера на хроматограмме производят одним из указанных проявителей.

Блазер на пластинках "Силуфол" проявляется в виде двух пятен:

R верхнего пятна - 0,45; нижнее - чуть отделяется от пятна.

Примечание. В случае проб сои иногда можно использовать многоступенчатую (3 - 4 раза) вытеснительную хроматографию (хроматограмму опускать в ту же подвижную фазу после просушивания и удлинения фронта разгонки), чтобы отгонять ближе к фронту нежелательные компоненты.

2.6. Обработка результатов

Содержание блазера в исследуемой пробе вычисляют по формуле:

Х = -,

где:

А - количество препарата, найденное на хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;

Р - навеска пробы, г или мл;

Х - содержание блазера в пробе, мг/кг или мг/л.

3. Техника безопасности

Необходимо соблюдать все общепринятые правила по технике безопасности, обычно рекомендуемые при работе с органическими растворителями и токсическими веществами.

4. Методика разработана

Ст.н.с, к.б.н. Н.В. Бажановой, мл.н.с., к.б.н. М.Г. Алтунян и мл.н.с. Ж.А. Арутюнян (Научно-исследовательский институт защиты растений, гор. Ереван).

5. Методика апробирована

а) В санитарно-гигиенической лаборатории при Республиканской санитарно-эпидемиологической станции МЗ Арм. ССР.

б) В контрольно-токсикологической лаборатории Республиканской станции защиты растений ПНО "Армсельхозхимия".