Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

27 ноября 1984 г. N 3155-84

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ РУБИГАНА В ВОДЕ,

ПОЧВЕ И РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ

1. Краткая характеристика препарата

Рубиган - (пиримидил-5)-(2-хлорофенил)-(4-хлорофенил)метанол.

          Cl

       ___│    OH   ___

       ---     │    ---

     /     \ --C--/     \--Cl                    Мол. масса 331,2.

     \\   //   │  \\   //

       ---    / \\  ---

             ││  │

             N\ //N

Рубиган выпускается в форме 12% к.э.

Точка плавления 117 - 119 °C; растворимость в воде 13,7 мг/л при 25 °C и pH 7.

Растворимость в органических растворителях: ацетоне - 250 мг/мл, хлороформе - 500 мг/мл, циклогексане - 500 мг/мл.

    По данным  фирмы, препарат малотоксичен для теплокровных животных. ЛД

                                                                         50

12%  э.к.  орально  для самцов крыс - 3,140 мг/кг, для самок - 2,920 мг/кг.

ЛД   технического продукта орально для крыс - 2500 мг/кг.

  50

Препарат рекомендуется для борьбы с мучнисторосяными грибами на различных культурах, эффективен против парши яблони.

2. Методика определения рубигана хроматографией

в тонком слое

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на извлечении рубигана из исследуемой пробы органическим растворителем, очистке экстракта и определении методом хроматографии в тонком слое.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

┌───────────────────────────────┬─────────────────────────────────────────┐

│   Метрологические параметры   │            Анализируемый объект         │

│                               ├──────────┬─────────┬──────────┬─────────┤

│                               │   вода   │  почва  │  огурцы  │  томаты │

├───────────────────────────────┼──────────┼─────────┼──────────┼─────────┤

│Число параллельных исследований│5         │5        │5         │5        │

│Диапазон определяемых          │          │         │          │         │

│концентраций, мг/л, мг/кг      │0,01 - 0,5│0,1 - 1,0│0,06 - 1,0│0,1 - 1,0│

│Предел обнаружения, мг/л, мг/кг│0,02      │0,1      │0,06      │0,1      │

│Среднее значение определения, %│90,0      │90,0     │83,0      │78,6     │

│Стандартное отклонение         │3,9       │5,0      │4,2       │3,9      │

│Относительное стандартное      │          │         │          │         │

│отклонение                     │4,3       │5,5      │5,06      │4,9      │

└───────────────────────────────┴──────────┴─────────┴──────────┴─────────┘

2.2. Реактивы и материалы

Ацетон хч, ГОСТ 2603-79.

Ацетонитрил ч, ТУ 6-09-3534-74.

Бензол чда, ГОСТ 5955-81.

н-Гексан хч, ТУ 6-09-3375-78.

Аммиак, ТУ 6-09-1709-77, хч.

Крахмал, ГОСТ 10163-76.

Калий марганцовокислый хч, ГОСТ 20490-75.

Калий иодистый осч, ТУ 6-09-3909-75.

Натрий сернокислый безводный чда, ГОСТ 4166-76.

Хлороформ хч, ТУ 6-09-4263-76.

Серебро азотнокислое хч, ГОСТ 1277-81.

Соляная кислота конц. хч, ГОСТ 3118-77.

Этиловый спирт хч, ТУ 6-09-1710-77.

Этилацетат хч, ГОСТ 22300-76.

Пластинки "Силуфол" UV-254.

Стандартный раствор рубигана в хлороформе или этиловом спирте 200 мкг/мл.

Проявляющие реагенты:

1) 0,5 г азотнокислого серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, добавляют 7 - 11 мл водного 25-процентного аммиака и разбавляют до 100 мл ацетоном;

2) А. 1% водный раствор иодистого калия.

Б. 3% раствор крахмала.

В. Этиловый спирт.

Перед опрыскиванием смешивают растворы "а", "б", "в" в соотношении 5:5:2.

Камера с хлором: смешивают равные части 1,5% раствора марганцовокислого калия и 10-процентной соляной кислоты.

2.3. Приборы и посуда

Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ-64-1-1081-73.

Испаритель ротационный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.

Воронки делительные, ГОСТ 8613-75.

Воронки химические, ГОСТ 8613-75.

Камера для хроматографирования, ГОСТ 10363-74.

Камера для опрыскивания, ГОСТ 11413-70.

Колбы плоскодонные емкостью 150 - 250 мл, ГОСТ 10091-72.

Колбы мерные на 50 - 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Лампа ртутно-кварцевая ПРК-4.

Микропипетки 0,1 мл, 0,2 мл, ГОСТ 20292-74.

Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-75.

Сито с отверстиями 0,1 мм и 1,0 мм.

Фильтры бумажные.

2.4. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР, N 2051-79, 21.08.1979.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция

Вода. 100 мл воды помещают в делительную воронку, трижды встряхивают н-гексаном (по 50 мл). Объединенные экстракты осушают безводным сульфатом натрия и упаривают досуха на ротационном испарителе.

Почва. 25 - 50 г воздушно-сухой почвы (растертой и просеянной через сито) помещают в коническую колбу и после увлажнения водой приливают 50 мл ацетона и встряхивают 1 час. Водно-ацетоновый раствор фильтруют и упаривают ацетон. Затем к водному остатку добавляют 5 - 7 мл ацетонитрила и 30 мл дистиллированной воды и экстрагируют в делительной воронке рубиган трижды по 50 мг н-гексана. Объединенный растворитель сушат безводным сульфатом натрия и концентрируют на ротационном испарителе до объема 0,2 мл. Остаток растворителя удаляют в токе воздуха.

Растительный материал. 25 - 50 г измельченных огурцов и томатов и 10 г мелко разрезанных листьев помещают в коническую колбу и заливают 50 мл н-гексана. Колбу встряхивают на аппарате для встряхивания 1 час. Экстракцию повторяют трижды. Объединенные экстракты фильтруют через бумажный фильтр, сушат безводным сульфатом натрия. Упаривают растворитель на ротационном испарителе.

2.5.2. Очистка экстракта

К сухому остатку прибавляют дважды по 5 мл ацетонитрила, каждый раз сливая растворитель с остатком в другую посуду. К общему объему растворителя добавляют 40 - 50 мл дистиллированной воды. Затем дважды производят переэкстракцию рубигана в н-гексан (30 мл), встряхивая в течение 3 - 5 мин. Объединенный гексановый экстракт высушивают безводным сернокислым натрием и концентрируют на ротационном испарителе.

2.5.3. Хроматографирование

Сухой остаток растворяют в 0,2 - 0,3 мл н-гексана и наносят на расстоянии 2 см от нижнего края на пластинку "Силуфол", рядом наносят стандартный раствор рубигана в количестве 5 - 10 мкг. Пластинку хроматографируют в системе подвижных растворителей гексан - ацетон (7:3 по объему) или бензол - этилацетат (7:3). После того как фронт подвижного растворителя поднимется на высоту 10 см, хроматограмму вынимают из камеры, подсушивают на воздухе и опрыскивают одним из проявляющих реагентов. После проявления реагентом N 1 пластинку облучают УФ-светом до четкого проявления коричневых пятен на бежевом фоне пластинки. При проявлении реагентом N 2 пластинку предварительно помещают в камеру хлора на 5 мин. После проветривания пластинки ее опрыскивают. Рубиган проявляется темно-фиолетовым пятном на бледно-сиреневом фоне.

    Величина R  в системе  гексан - ацетон  составляет  0,33  +/-  0,03,  в

              f

системе бензол - этилацетат - 0,4 +/- 0,02.

2.6. Обработка результатов анализа

Количественное определение производят путем сравнения площади пятна пробы с наиболее близкой к ней по величине площадью стандарта. Содержание препарата в анализируемой пробе, мг/кг, мг/л, рассчитывают по формуле:

                                      A

                                  X = -,

                                      P

где:

A - количество препарата, найденное путем сравнения размеров и интенсивности окраски пятен пробы и стандартного раствора, мкг;

P - масса или объем пробы, взятой для анализа, г, мл.

3. Требования безопасности

Соблюдать требования безопасности, обычно рекомендуемые для работы в химических лабораториях с органическими растворителями и УФ-светом.