"Временные методические указания по определению действующего вещества препарата А-1 методом ГЖХ в воде, почве и растительном материале" // Технорма.RU

Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

31 июля 1984 г. N 3073

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДЕЙСТВУЮЩЕГО ВЕЩЕСТВА ПРЕПАРАТА А-1

МЕТОДОМ ГЖХ В ВОДЕ, ПОЧВЕ И РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ

1. Краткая характеристика препарата

Натриевая соль бензоилмуравьиной кислоты д.э. препарата А-1 (92%).

В препарате содержится и натриевая соль бензойной кислоты (8%).

││

// \ -CCOONa

│ ││ C H O Na.

\\ / 8 5 3

Молекулярная масса 172.

А-1 - белое или слегка с желтоватым оттенком кристаллическое вещество, без запаха. Растворимость (г/100 мл при 20 °C): в воде - 41,0, в этаноле - 2,0, ксилоле - 0,05, ацетоне - 0,04, в хлороформе практически нерастворим.

МДУ и ПДК не установлены.

Препарат А-1 применяется в качестве стимулятора роста хлопчатника путем предпосевной замочки семян хлопчатника.

2. Методика определения действующего вещества

препарата А-1 в воде, почве, растительном материале

газохроматографическим методом

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении бензоилмуравьиной кислоты из анализируемого объекта диэтиловым эфиром и последующем определении в виде метилового эфира на газовом хроматографе с использованием пламенно-ионизационного детектора.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Диапазон определяемых концентраций: для воды - 0,05 - 4,0 мг/л; для почвы - 0,4 - 4,0 мг/кг; для растительного материала - 0,5 - 4,0 мг/кг.

Предел обнаружения в хроматографируемом объеме: для воды - 2,5 нг; для почвы - 4 нг; для растительного материала - 10 нг.

Среднее значение определения стандартных количеств (C) при n = 5 для

воды 90%, стандартное отклонение (S) - 8,04, относительное стандартное

отклонение (Sr) - 8,9%, доверительный интервал среднего при p = 0,95 и n =

5 (ЭПСИЛОН ) - +/- 9,9%, соответственно аналогичные характеристики

альфа,k

_ _

для почвы: C - 85%, S - 12,06, Sr - 14,1%, ЭПСИЛОН - +/- 14,9; для

_ _ альфа,k

растительного материала: C - 82%, S - 14,47, Sr - 17,6%, ЭПСИЛОН -

альфа,k

17,9%.

2.1.3. Избирательность метода

Иные стимуляторы роста, применяемые на хлопчатнике (пикс, тур), определению препарата А-1 не мешают.

2.2. Реактивы и материалы

Бензоилмуравьиная кислота хч.

Соляная кислота чда, ГОСТ 3118-77.

Диэтиловый эфир (медицин.) фарм.

Натрий сернокислый безводный чда, ГОСТ 4166-76.

Серная кислота чда, ГОСТ 4204-77.

Метиловый спирт чда, ГОСТ 6995-77.

Гидразин-гидрат чда, ГОСТ 5832-65.

Кали едкое осч, ОСТ 6-01-301-74.

Хлороформ хч, ГОСТ 215-74.

Фильтры беззольные, ТУ 6-09-1678-77.

Стандартные растворы метилового эфира бензоилмуравьиной кислоты в хлороформе с содержанием 0,5, 5, 10, 25, 50, 100 мкг/мл.

Наполнитель для хроматографической колонки: хроматон N-AW силанизированный ГМДС с 10% К-301.

2.3. Приборы, аппаратура и посуда

Хроматограф с пламенно-ионизационным детектором.

Стеклянная хроматографическая колонка 3 x 3000 мм.

Водяная баня, ТУ 46-22-587-75.

Цилиндры мерные на 250, 100, 25 мл, ГОСТ 1770-74.

Делительные воронки на 100 мл, ГОСТ 8613-75.

Колбы конические на 250 мл, ГОСТ 10394-72.

Аппарат Сокслета, ГОСТ 9777-74.

Колбы мерные на 100, 50, 25 мл, ГОСТ 1770-74.

Прибор для получения диазометана (рис. 1 - не приводится).

Колбы круглодонные для отгонки растворителей на 250 мл, ГОСТ 10394-72.

Прибор для отгонки растворителей, ТУ 25-11-917-74, тип ИР-1.

Микрошприц МШ-10.

2.4. Отбор проб производится в соответствии с Унифицированными правилами отбора проб, утвержденными Минздравом СССР 21.08.1979, N 2051-79.

2.5. Получение диазометана

В реакционную колбу прибора для получения диазометана (рис. 1) помещают 6 г едкого кали, 3 мл метанола и 3 мл гидразин-гидрата. В приемную колбу наливают 50 мл диэтилового эфира. Из капельницы подают хлороформ со скоростью 1 капля за секунды. Окончание реакции получения диазометана определяют по появлению красно-бурой окраски реакционной смеси или по выделению белых паров в реакционной колбе. Эфирный раствор диазометана интенсивно желтого цвета предпочтительно применять свежеполученным, но можно хранить 3 - 5 дней в темной склянке на холоде.

2.6. Проведение определения

2.6.1. Экстракция из воды

Пробу воды в 250 мл концентрируют на ротационном испарителе до 25 - 30 мл, к охлажденному раствору в делительной воронке добавляют 1 мл соляной кислоты и встряхивают 5 минут. Выделившуюся кислоту экстрагируют 100 мл (5 x 20 мл) диэтилового эфира. Объединенные эфирные вытяжки сушат над безводным сульфатом натрия и отгоняют растворитель на ротационном испарителе до объема 3 - 5 мл.

2.6.2. Экстракция из почвы

К навеске почвы в 50 г добавляют 50 мл диэтилового эфира, 1 мл разбавленной (1:1) серной кислоты и встряхивают 5 минут, экстракт фильтруют и повторяют извлечение еще 4 раза эфиром, порциями по 25 мл, и соответствующим количеством разбавленной серной кислоты. Собранные экстракты сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и отгоняют эфир до объема 3 - 5 мл.

2.6.3. Экстракция из семян хлопчатника

Навеску в 25 г измельчают и помещают в патрон из фильтровальной бумаги, который вкладывают в аппарат Сокслета и экстрагируют с 200 - 250 мл диэтилового эфира и 3 мл разбавленной (1:1) серной кислоты. Экстракцию продолжают 2 часа. Полученный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и отгоняют эфир до объема 3 - 5 мл.

2.6.4. Метилирование

К концентратам экстрактов добавляют 0,5 - 1 мл метанола и 3 - 5 мл эфирного раствора диазометана. Метилирование обычно длится 10 - 15 минут в колбочке с пришлифованной пробкой. По окончании метилирования избыток диазометана удаляют током азота и отгоняют растворитель. Полученный метиловый эфир разбавляют хлороформом до 5 мл в мерной посуде и далее хроматографируют.

2.6.5. Условия хроматографирования

-9

Хроматограф с ДИП, рабочая шкала электрометра - 10 x 10 А, скорость

протяжки ленты самописца - 720 мм/час, колонка стеклянная 3 x 3000 мм,

наполнитель колонки - хроматон N-AW, силанизированный ГМДС с 10% E-301

(размеры частиц 0,20 - 0,25 мм), температура испарителя - 300 °C,

температура термостата колонок - 140 °C, газ-носитель - азот, скорость

азота - 45 мл/мин., водорода - 55 мл/мин., воздуха - 360 мл/мин., вводимые

в испаритель объемы - 1 мкл, абсолютное время удерживания метилового эфира

бензойной кислоты - 3 мин., бензоилмуравьиной кислоты - 10 мин.

2.7. Обработка результатов анализа

Содержание д.в. препарата А-1 определяют методом соотношения со стандартом по площади пика.

Концентрацию д.в. препарата А-1 в анализируемой пробе (X, мг/л или мг/кг) вычисляют по формуле:

C x S x V

2 2

X = ----------- x K,

S x V x P

1 1

где:

C - количество метилового эфира бензоилмуравьиной кислоты в стандартном

растворе, введенном в хроматограф, мкг;

S - площадь пика стандартного раствора, введенного в хроматограф, кв.

мм;

S - площадь пика препарата в хроматографируемом объеме, кв. мм;

V - объем экстракта, введенного в хроматограф, мкл;

V - общий объем экстракта в хлороформе перед хроматографированием, мл;

P - навеска или объем анализируемой пробы, г/мл;

K - коэффициент пересчета метилового эфира в натриевую соль

бензоилмуравьиной кислоты (1,05).

3. Требования безопасности

Соблюдать правила предосторожности, необходимые при работе с ядовитыми и взрывоопасными веществами. Обратить особое внимание на стадию получения диазометана, обладающего высокой токсичностью и взрывоопасностью.