"Методические указания по определению витавакса в зерне и воде методом тонкослойной хроматографии" // Технорма.RU

Утверждены

Минздравом СССР

31 июля 1984 г. N 3064-84

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ВИТАВАКСА В ЗЕРНЕ И ВОДЕ

МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Краткая характеристика препарата. Витавакс - 2-метил-3-

фенилкарбамоил-5,6-дигидро-1,4-оксатиин. Белое кристаллическое

вещество, т. пл. 91,5 - 92,5 °C. Общепринятое название -

карбоксин. Брутто-формула C H NO S. Молекулярная масса 235,3.

12 13 2

Растворимость в воде 0,17 г в 100 г. Хорошо растворяется в

хлороформе, ацетоне, бензоле, метаноле и этаноле. Используется для

протравливания семян зерновых культур в борьбе с пыльной головней.

Эффективен также против ржавчинных грибов на различных культурах.

Выпускается в форме 75%-ного с.п. В растениях в течение 6 недель

витавакс подвергается окислению, образуя в основном сульфоксид

(5,6-дигидро-2-метил-1,4-оксатиин-3-карбоксанилид-4-оксид) и в

небольших количествах - сульфон (5,6-дигидро-2-метил-1,4-

оксатиин-3-карбоксанилид-4,4-диоксид). В воде при pH 2 и pH 4

через несколько недель обнаружены витавакс, сульфоксид и в

незначительных количествах - сульфон. В почве окисление витавакса

до сульфоксида полностью завершается за 2 недели. Окисление

витавакса до сульфоксида наблюдается в растворах некоторых

органических растворителей.

Принцип метода. I вариант. Суммарное определение витавакса и его метаболитов. Метод определения витавакса и его метаболитов основан на их экстракции органическим растворителем, окислении витавакса перманганатом калия до сульфоксида, очистке экстракта, реэкстракции в органический растворитель и дальнейшем определении в тонком слое адсорбента ("Силуфола" или силикагеля на пластинках). В качестве подвижной фазы используют смесь хлороформ - эфир (5:2). Зоны локализации витавакса и сульфоксида витавакса в тонком слое сорбента обнаруживают после разложения его УФ-светом до аминосоединения, диазотирования нитритом натрия в хлороводородной среде и азосочетания полученных солей фенилдиазония с N-(1-нафтилэтилендиамином) либо с 1-нафтолом, 1-нафтиламином.

II вариант. Определение витавакса. Метод основан на экстракции его из анализируемой пробы органическим растворителем, очистке экстракта перераспределением пестицида в системе органический растворитель - вода - органический растворитель с последующим определением в тонком слое силикагеля КСК-2,5 или "Силуфола". Подвижная фаза - смесь н-гексан - ацетон (3:2) или н-гексан - эфир (1:1). Обнаружение зон локализации пестицида проводят смесью реагентов: 0,05-процентного раствора бромфенолового синего в 50-процентном этаноле и 1-процентного нитрата серебра в воде с последующей обработкой пластинок 2-процентным раствором лимонной кислоты. Продукты окисления витавакса данным реагентом не обнаруживаются. Возможно обнаружение витавакса по реакции, описанной выше (УФ-разложение, диазотирование и азосочетание).

Метрологическая характеристика метода. Нижний предел обнаружения сульфоксида витавакса с помощью реакции азосочетания: азосоставляющая N-(1-нафтилэтилендиамин) - 0,5 - 1,0 мкг и азосоставляющие 1-нафтиламин, 1-нафтол - 1,0 - 1,5 мкг. Диапазон определяемых концентраций 1 - 30 мкг. Метрологическая характеристика метода представлена в таблице 146.

Таблица 146

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

┌────────────────┬─────────────┬────────────┬───────────────┬─────────────┐

│ Наименование │Нижний предел│ Среднее │ Стандартное │Доверительный│

│ анализируемого │ определения,│ значение │ отклонение, % │ интервал │

│ объекта │ мг/л или │определения,│ │среднего при │

│ │ мг/кг │ % │ │ p = 0,95, % │

├────────────────┼─────────────┼────────────┼───────────────┼─────────────┤

│Вода │0,02 │88,0 │+/- 2,6 │+/- 3,2 │

│(I, II варианты)│ │ │ │ │

│Зерно пшеницы │0,1 │85,0 │+/- 8,0 │+/- 8,7 │

│(I вариант) │ │ │ │ │

│Зерно пшеницы │0,1 │83,0 │+/- 4,0 │+/- 6,1 │

│(II вариант) │ │ │ │ │

└────────────────┴─────────────┴────────────┴───────────────┴─────────────┘

Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. н-Гексан ч. Гипс (сульфат кальция). В течение 2 сут. прокаливают при 180 °C и просеивают через сито 100 меш. Едкий кали ч.д.а. Перманганат калия ч.д.а., 0,1-процентный раствор. Крахмал водорастворимый ч. Хлороводородная кислота хч., концентрированная, 0,3-процентная. N-(1-нафтилэтилендиамин)дигидрохлорид ч. 1-Нафтиламин. 1-Нафтол. Гидроксид калия ч. Лимонная кислота. Щавелевая кислота 1 н. Сульфат натрия безводный х.ч. Нитрит натрия х.ч. Этиловый спирт-ректиф. 96-процентный. Нитрат серебра. Хлороформ х.ч. Эфир серный. Пластинки "Силуфол". Силикагель для хроматографии (КСК-2,5, Л - измельчают, просеивают через сито 100 меш). Проявляющие реагенты: N 1: а - к смеси, состоящей из 46 мл дистиллированной воды и 4 мл концентрированной хлороводородной кислоты, прибавляют 1 г нитрита натрия; б - N-(1-нафтилэтилендиамин)дигидрохлорид ч, 1-процентный раствор в этиловом спирте; в - 1-нафтиламин ч.д.а., 1-процентный раствор в этиловом спирте; г - 1-нафтол ч.д.а. (3 г гидроксида калия растворяют в 50 мл дистиллированной воды, затем прибавляют 0,5 г 1-нафтола). Реагенты готовят непосредственно перед употреблением. Расход реагентов 4 - 5 мл на одну пластинку; N 2: а - 0,05-процентный раствор бромфенолового синего ч.д.а. в 50-процентном этаноле; б - 1-процентный водный раствор нитрата серебра ч.д.а. Растворы а и б смешивают в соотношении 1:1; в - 2-процентный водный раствор лимонной кислоты х.ч. Растворы хранят в темной посуде в течение месяца. Стандартный раствор витавакса (200 мкг/мл) готовят, растворяя 10 мг препарата в 50 мл ацетона. Раствор устойчив при хранении в холодильнике в течение 3 мес.

Приборы и посуда. Аппарат для встряхивания. Баня водяная. Воронки делительные на 250, 500 мл. Камера для опрыскивания. Камера для хроматографирования размером 150 x 200 мм. Колбы: мерные вместимостью 50, 100 мл; круглодонные со шлифами вместимостью 150, 200 мл. Лампа кварцевая ПРК-4 или ПРК-7. Микропипетка для нанесения стандартного раствора. Пластинки стеклянные размером 90 x 120 мм. Пипетки на 1, 5, 10 мл. Прибор для отгонки растворителя. Пульверизатор стеклянный. Цилиндры мерные на 25, 50, 100, 250 мл.

Подготовка к определению. Приготовление пластинок. Силикагель марки Л (40 г) либо КСК-2,5 растирают в фарфоровой ступке с 2 г гипса. Прибавляют небольшими порциями 90 мл воды и размешивают до образования однородной массы. На пластинку размером 9 x 12 см наносят 5 г массы, равномерно распределяют ее по поверхности. Пластинки сушат на воздухе в течение суток при комнатной температуре. Приготовление "свидетеля". В колбочку вносят 0,025 - 0,05 мл стандартного раствора витавакса (200 мкг/мл), что соответствует 5 - 10 мкг препарата. Упаривают в токе теплого воздуха, прибавляют 10 мл 0,1%-ного раствора перманганата калия. Раствор оставляют на 1 мин. Затем прибавляют 10 мл 0,3%-ного раствора хлороводородной кислоты и 5 мл 1 н щавелевой кислоты и после обесцвечивания раствора трижды экстрагируют хлороформом порциями по 50 мл в течение 3 - 5 мин. каждый раз. Экстракты объединяют, сушат безводным сульфатом натрия и упаривают до небольшого объема. Сконцентрированную пробу количественно наносят на пластинку.

Ход анализа. Экстракция. Анализируемую пробу воды (200 мл) помещают в делительную воронку и трижды экстрагируют хлороформом порциями по 50 мл в течение 5 мин. каждый раз. Экстракты объединяют и фильтруют через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на ротационном испарителе. При необходимости определения в воде суммы витавакса и его метаболитов (I вариант) к сухому остатку прибавляют 10 мл 0,1%-ного раствора перманганата калия и определяют так, как описано в приготовлении "свидетеля". При определении только метаболитов витавакса растворы перманганата калия и щавелевой кислоты не прибавляют. Для определения витавакса в воде по II варианту сконцентрированный хлороформный экстракт наносят на пластинку, покрытую тонким слоем адсорбента, и хроматографируют.

Пробу зерна пшеницы (50 - 100 г) помещают в коническую колбу, прибавляют 60 - 120 мл хлороформа и экстрагируют 2 ч на аппарате для встряхивания. Экстракцию повторяют еще раз в течение 30 мин. Экстракты объединяют, сушат безводным сульфатом натрия, фильтруют через бумажный фильтр "синяя лента" и упаривают досуха на ротационном испарителе. При определении в зерне суммы витавакса и его метаболитов (I вариант) к сухому остатку добавляют 10 мл 0,1%-ного раствора перманганата калия. Оставляют раствор на 15 мин. Затем прибавляют 10 мл 0,3%-ного раствора хлороводородной кислоты и 5 мл 1 н раствора щавелевой кислоты. После обесцвечивания раствора прибавляют 20 мл ацетона и ставят в морозильную камеру на 60 мин. Фильтруют раствор через плотный бумажный фильтр "синяя лента". Экстрагируют трижды хлороформом по 50 мл в течение 3 - 5 мин. каждый раз. Экстракты объединяют, сушат безводным сульфатом натрия и упаривают до небольшого объема. Сконцентрированную пробу количественно наносят на пластинку. В случае определения в пробе только метаболитов в ходе анализа перманганат калия и щавелевую кислоту не прибавляют.

Для определения в зерне витавакса по II варианту к сухому остатку, полученному после упаривания сконцентрированного хлороформного экстракта, добавляют дистиллированную воду (30 - 35 мл), раствор тщательно перемешивают стеклянной палочкой и оставляют на 2 ч, периодически перемешивая. Водный экстракт переносят в делительную воронку на 250 мл через бумажный фильтр "синяя лента". Экстракцию витавакса повторяют еще 2 раза в течение 30 мин. и переносят экстракт в ту же воронку. В воронку прибавляют 0,1 г хлорида натрия, 15 мл хлороформа и встряхивают содержимое в течение 5 мин. Хлороформенный слой отделяют. Экстракцию витавакса из водного раствора повторяют еще 3 раза. Экстракты объединяют, сушат безводным сульфатом натрия и упаривают на ротационном испарителе до небольшого объема (0,1 мл). Остаток наносят на хроматографическую пластинку.

Хроматографирование. При определении в анализируемых пробах

суммы витавакса и его метаболитов (I вариант) используют подвижную

фазу хлороформ - серный эфир (5:2). В качестве "свидетеля" наносят

стандартные растворы витавакса, обработанные перманганатом калия,

как описано выше. После хроматографирования пластинку сушат и

облучают УФ-светом в течение 20 мин. Зоны локализации сульфоксида

витавакса обнаруживают путем последовательной обработки пластинки

раствором нитрита натрия в солянокислой среде и раствором

N-(1-нафтилэтилендиамина) либо 1-нафтиламина (1-нафтола). При

наличии витавакса или метаболитов появляются пятна фиолетового или

розового цвета. Величина R сульфоксида 0,38 ("Силуфол") и 0,65

(силикагель).

При определении витавакса по II варианту в качестве подвижной

фазы используют смесь н-гексан - ацетон (3:2) или н-гексан - эфир

(1:1). В качестве "свидетеля" наносят стандартный раствор

витавакса (200 мкг/мл) в количестве 0,005 - 0,05 мл, что

соответствует 1 - 10 мкг пестицида. После хроматографирования

пластинку сушат и обрабатывают смесью растворов бромфенолового

синего в ацетоне и нитрата серебра в воде в соотношении 1:1. Для

обесцвечивания фона пластинку обрабатывают 2%-ным раствором

лимонной кислоты. Витавакс проявляется в виде синих пятен на

светло-желтом фоне. Величина R витавакса 0,50 (н-гексан - ацетон

в соотношении 3:2) на силикагеле и 0,38; 0,65 (н-гексан - эфир в

соотношении 1:1) на "Силуфоле" и силикагеле соответственно. Зоны

локализации витавакса можно также обнаружить по реакции

азосочетания (I вариант).

Обработка результатов анализа. Количественно препарат определяют путем сравнения интенсивности окраски и размера пятен пробы и стандартных растворов. Содержание препарата в пробе (X, мг/л или мг/кг) рассчитывают по формуле:

X = ---,

где:

A - содержание препарата в стандартном растворе, мкг;

P - объем или масса пробы, взятой на анализ, мл или г;

S и S - площади соответственно стандартного раствора и

1 2

анализируемой пробы, кв. мм.

Требования безопасности. Необходимо соблюдать правила работы с токсичными веществами и органическими растворителями.