Утверждены

Минздравом СССР

31 июля 1984 г. N 3061-84

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ БОТРАНА В ПОЧВЕ, ВОДЕ, РАСТИТЕЛЬНОЙ

ПРОДУКЦИИ МЕТОДАМИ ТОНКОСЛОЙНОЙ И ГАЗОЖИДКОСТНОЙ

ХРОМАТОГРАФИИ <*>

--------------------------------

<*> Разработаны А.А. Красных, М.Ф. Зелениной, В.Ф. Логачевым, А.А. Меланьиной (ВНИИЗР).

    Ботран - 2,6-дихлор-4-нитроанилин.       Брутто-формула    C H O N Cl .

                                                                6 4 2 2  2

Молекулярная  масса  207,0.   Общепринятое  название - дихлоран.  Химически

Чистое  вещество  ботрана - кристаллы желтого цвета  с т. пл. 192 - 194 °C.

Ботран практически нерастворим в воде, растворим в большинстве органических

растворителей.   Устойчив  к  гидролизу  и  окислению,  не  воспламеняется.

Выпускается в виде  75-процентного смачивающегося порошка.  Ботран обладает

хорошим профилактическим действием против возбудителей болезней, вызываемых

грибами: ботридис, ризопус и склеротиния. ДСД 0,03 мг/кг.

Принцип метода. Метод основан на извлечении ботрана из исследуемой пробы органическим растворителем (ацетон, хлороформ), очистке экстракта путем перераспределения между двумя несмешивающимися жидкостями с последующим определением ТСХ или ГЖХ.

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 48.

Таблица 48

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БОТРАНА

┌──────────────────────────────────────────────┬─────────────────┐

│                   Параметры                  │      Метод      │

│                                              ├─────────┬───────┤

│                                              │   ТСХ   │  ГЖХ  │

├──────────────────────────────────────────────┼─────────┼───────┤

│Минимально детектируемое количество препарата │1 - 3 мкг│1 нг   │

│Нижний предел определения, мг/кг:             │         │       │

│  в воде                                      │0,01     │0,005  │

│  в почве                                     │0,02     │0,001  │

│  в растениях                                 │0,08     │0,004  │

│Среднее значение определения (n = 15), %:     │         │       │

│  в растениях                                 │78,6     │82,5   │

│  в почве                                     │88,0     │92,5   │

│  в воде                                      │92,5     │92,5   │

│Стандартные отклонения, %:                    │         │       │

│  в растениях                                 │+/- 9,0  │+/- 5,0│

│  в почве                                     │+/- 8,7  │+/- 3,3│

│  в воде                                      │+/- 7,8  │+/- 7,9│

│Доверительный интервал среднего               │         │       │

│(p = 0,95 и n = 5), %:                        │         │       │

│  в растениях                                 │+/- 5,6  │+/- 4,0│

│  в почве                                     │+/- 8,7  │+/- 6,8│

│  в воде                                      │+/- 4,5  │+/- 5,0│

└──────────────────────────────────────────────┴─────────┴───────┘

Избирательность метода. Метод специфичен в присутствии ароматических аминов растительного происхождения. Другие препараты, имеющие ароматическую аминогруппу (пирамин, азулокс и др.), в данных условиях хроматографирования определению не мешают.

    Реактивы   и   растворы.  Ацетон  х.ч.  н-Гексан  х.ч.  Хлороформ  х.ч.

Ацетонитрил   ч.   Сульфат  натрия  безводный  ч.д.а.  Нитрит  натрия  х.ч.

Хлороводородная  кислота  х.ч.  Этилацетат  ч.д.а.  Этанол  х.ч.  Пластинки

"Силуфол" УФ   .  Азот особой чистоты.  Хроматон N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 мм)

            254

с  5%  SE-30.  Хроматон  N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 мм) с 5% XE-60. Проявляющий

реагент - 1-процентный раствор 1-нафтиламина в этаноле.  Раствор  хранят  в

холодильнике  не дольше 15 дней. Стандартный раствор ботрана (1 и 100 мкг в

1 мл ацетона) хранят в холодильнике не дольше 30 дней.

Приборы и посуда. Аппарат для встряхивания. Испаритель ротационный. Воронки: делительные на 250 мл; химические. Хроматографическая камера. Камера для опрыскивания. Пульверизатор стеклянный. Колбы: конические нормального шлифа; остродонные; мерные на 100 мл. Микропипетки на 0,1 мл. Камера для диазотирования. Газовый хроматограф "Цвет-106" или другой марки с ДПР. Микрошприц на 10 мкл. Колонка хроматографическая стеклянная длиной 1 м с внутренним диаметром 3 мм. Баллоны газовые. Секундомер. Холодильник.

Ход анализа. Экстракция. Анализируемую пробу воды помещают в делительную воронку, препарат экстрагируют трижды хлороформом порциями по 40 мл в течение 5 мин. Объединенный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют на ротационном испарителе до объема 0,3 мл при температуре воды в бане не выше 50 °C. Остаток удаляют в токе воздуха.

Свежеотобранную пробу почвы (100 г) заливают 70 мл ацетона. Ботран экстрагируют, встряхивая в течение 1 ч. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр со слоем безводного сульфата натрия, колбу и фильтр промывают тремя порциями того же растворителя по 10 мл. Объединенный экстракт отгоняют на ротационном испарителе до объема 0,2 - 0,3 мл. Остаток удаляют в токе воздуха.

Из 25 г измельченной пробы растительного материала (зеленая масса, капуста, морковь, лук-репка) ботран экстрагируют 50 мл хлороформа или этилацетата путем встряхивания в течение 1 ч. Измельченные клубни картофеля (25 г) заливают до покрытия поверхности хлороформом и оставляют на ночь, экстракты отфильтровывают, сушат над безводным сульфатом натрия и отгоняют до небольшого объема на ротационном испарителе. Остаток удаляют в токе воздуха.

Очистка экстракта. Сухой остаток из почвы и растительного материала растворяют в 5 мл ацетонитрила, добавляют 50 мл дистиллированной воды и отфильтровывают через плотный бумажный фильтр. Из водно-ацетонитрильного раствора ботран экстрагируют н-гексаном трижды порциями по 40 мл в течение 3 мин. Экстракт объединяют, сушат над безводным сульфатом натрия и отгоняют досуха на ротационном испарителе.

    Условия  определения  методом  ГЖХ. Хроматограф "Цвет-106" с ДПР. Сухой

остаток  растворяют  в  точно  известном  количестве ацетона (5 - 10 мл). С

помощью  микрошприца  в  испаритель  хроматографа  вводят  аликвотную часть

исследуемого раствора (2 - 4 мкл). Используют стеклянную колонку длиной 1 м

с  внутренним диаметром 3 мм, заполненную хроматоном N-AW-DMCS (0,16 - 0,20

мм)  с  5%  SE-30.  Температура  (°C): термостата колонки - 130, термостата

детектора  -  190, испарителя - 240. Скорость тока азота (газа-носителя) 60

                                   -12

мл/мин.  Шкала электрометра 20 x 10    А. Скорость движения ленты самописца

200 мм/ч. Время удерживания 4 мин. 25 с.

    Можно  использовать  альтернативную  колонку  длиной  1  м с внутренним

диаметром  3  мм,  которую  заполняют  хроматоном  N-AW-DMCS  с  5%  XE-60.

Температура  (°C):  термостата  колонки - 150; испарителя - 240; термостата

детектора  -  210.  Скорость    тока   азота 60 мл/мин. Шкала  электрометра

       -12

20 x 10     А.    Скорость   движения   ленты   самописца   200 мм/ч. Время

удерживания 6 мин. 30 с.

Условия определения методом ТСХ. Сухой остаток растворяют в 0,2 - 0,3 мл ацетона (хлороформа) и переносят на хроматографическую пластинку. Стенки колбы обмывают несколькими каплями того же растворителя, который переносят в центр пятна. Справа наносят стандартные растворы препарата. Пластинки помещают в камеру с системой растворителей гексан-ацетон в соотношении 5:1 по объему. После подъема фронта растворителей на высоту 10 см пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе и помещают на 20 мин. в камеру (эксикатор), насыщенную парами оксидов азота. Пары оксидов азота получают следующим образом: на дно помещают стаканчик с 1 - 2 г нитрита натрия, осторожно приливают 10 - 15 мл 20-процентной хлороводородной кислоты и закрывают крышкой.

    Пластинку  вынимают из камеры  и  обрабатывают  1-процентным  раствором

альфа-нафтиламина в этаноле. Препарат проявляется в виде ярко-красных пятен

на  светлом  фоне  с  величиной  R  0,45 - 0,47. Количественное определение

                                  f

проводят  путем  сравнения  интенсивности  окраски  и  площади пятен проб и

стандартных растворов.

    Обработка  результатов  анализа.  Содержание препарата (X, мг/кг, мг/л)

при определении методом ГЖХ рассчитывают по формуле:

                                   A  H  V

                                    ст пр к

                               X = --------,

                                    H  V P

                                     ст х

    где:

    A   - количество препарата в стандартном растворе, нг;

     ст

    H     -   высота  пика  соответственно  стандартного  и  анализируемого

     пр

растворов, мм;

    V  - объем экстракта, введенного в хроматограф, мкл;

     х

    V  - объем конечного экстракта, в котором растворен сухой остаток, мл;

     к

    P - масса или объем пробы, г, мл.

    Содержание ботрана при определении методом ТСХ рассчитывают по формуле:

                                   AS

                                     2

                               X = ---,

                                   PS

                                     1

    где:

    A - содержание препарата в стандартном растворе, мкг;

    S   и  S  - площадь пятна соответственно стандартного раствора и пробы,

     1      2

кв. мм;

    P - масса или объем анализируемой пробы, г, мл.

Требования безопасности. Следует соблюдать все требования безопасности, обычно рекомендуемые для работы с органическими растворителями.