Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

31 июля 1984 г. N 3059

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТЕКТО В ОВОЩАХ И ФРУКТАХ (ЯБЛОКИ,

ЛИМОНЫ, АПЕЛЬСИНЫ, ТОМАТЫ, МОРКОВЬ, ЛУК, КАПУСТА)

ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ

1. Краткая характеристика препарата

Текто - системный фунгицид широкого спектра действия. Действующее начало препарата - 2-(4-тиазолил)бензимидазол - тиабендазол.

    // \────┬┐N                                  C  H N S.

    │  ││   ││                                    10 7 3

    \\ /\ N /├────┐

          │  │────│                              Мол. масса 201,3.

          H  N    S

              \\ /

В чистом виде - кристаллы белого цвета с Т пл. 296 - 304 °C, хорошо растворим в ацетоне (2,8 мг/мл), этилацетате (1,7 мг/мл). Растворимость в воде при 25 °C меняется в зависимости от pH. При pH 5 - 12 составляет 0,05 мг/л, ниже pH 5 она возрастает и при pH 2 составляет 1 мг/мл.

    ЛД    текто  для  теплокровных  животных  3330  -  3850 мг/кг. Препарат

      50

малотоксичен. МДУ  в  картофеле - 10  мг/кг, для других овощей и фруктов не

установлены.

2. Методика определения текто в овощах и фруктах

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении тиабендазола из овощей и фруктов этилацетатом, перераспределении в соляную кислоту, а затем, после подщелачивания раствора, в этилацетат, насыщенный водой, с последующим определением тонкослойной хроматографией.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Предел обнаружения в хроматографируемой пробе:

в УФ-свете - 1 мкг;

реактивом Драгендорфа - 2 мкг.

Предел обнаружения в объектах на УФ-пластинках - 0,07 мг/кг, реактивом Драгендорфа - 0,14 мг/кг.

Дальнейшую метрологическую характеристику по методу см. в табл. 1.

Таблица 1

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

┌─────────┬─────────────────────┬─────────────┬─────────────┬─────────────┐

│ Объекты │   Сред. значение    │ Стандартное │Доверительный│   Размах    │

│         │     определения     │ отклонение  │   интерв.   │варьирования,│

│         │стандартных количеств│S при n = 15,│  среднего   │    %, R     │

│         │              _      │    +/- %    │при p = 0,95 │             │

│         │ тиабендазола C при  │             │ и n = 5, %  │             │

│         │      n = 15, %      │             │             │             │

├─────────┼─────────────────────┼─────────────┼─────────────┼─────────────┤

│Яблоки   │78,7                 │7,4          │78,7 +/- 9,2 │70 - 90      │

│Лимоны   │78,0                 │9,0          │78,0 +/- 11,2│70 - 100     │

│Апельсины│82,7                 │12,2         │82,7 +/- 15,1│70 - 100     │

│Томаты   │86,0                 │8,1          │86,0 +/- 10,0│75 - 100     │

│Морковь  │95,3                 │5,2          │95,3 +/- 5,9 │90 - 100     │

│Лук      │93,3                 │7,2          │93,3 +/- 8,3 │80 - 100     │

│Капуста  │96,7                 │5,9          │96,7 +/- 5,9 │90 - 100     │

└─────────┴─────────────────────┴─────────────┴─────────────┴─────────────┘

2.1.3. Избирательность метода

Метод селективен. Беномил, БМК, ФОП и ХОП определению не мешают.

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон хч, ГОСТ 2603-79.

Этилацетат хч, ГОСТ 22300-76.

Гексан чда, ТУ 6-09-3375-78.

Хлороформ чда, ГОСТ 20015-74.

Спирт этиловый 96-процентный, ГОСТ 5963-67.

Аммиак водный чда, ГОСТ 3760-64.

Соляная кислота (фиксанал), ТУ 6-09-2540-72, 0,1 н.

Кали едкое чда, ГОСТ 4203-65, 4 н.

Сульфат натрия безводный чда, ГОСТ 42-66-76.

Уксусная кислота чда, ГОСТ 62-75.

Калий иодистый хч, ГОСТ 4232-74.

Висмут основной азотнокислый чда, ГОСТ 10217-62.

Реактив Драгендорфа. Растворяют 850 мл основного азотнокислого висмута в 40 мл дистиллированной воды, добавляют 10 мл уксусной кислоты в раствор, содержащий 8 г КУ в 20 мл воды (основной раствор). Для проявления хроматограмм 1 мл полученного раствора разбавляют 2 мл уксусной кислоты и 10 мл дистиллированной воды (рабочий раствор). На обработку хроматограммы идет 2 - 3 мл раствора. Основной раствор стабилен при хранении в темном месте в течение длительного времени. Рабочий раствор готовят перед обработкой хроматограмм.

Стандартные растворы тиабендазола в ацетоне с содержанием 100 мкг/мл (раствор А) и 10 мкг/мл (раствор Б). Растворы стабильны при хранении в холодильнике 2 года, а при комнатной температуре - 6 месяцев.

2.3. Приборы, аппаратура и посуда

Хроматоскоп или другой источник УФ-света длиной волны 250 - 260 нм.

Хроматографическая камера, ГОСТ 10565-74.

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1 или аналогичный с набором колб, ТУ 25-11-917-76.

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73.

Вакуумный водоструйный насос, ГОСТ 10396-75.

Колбы плоскодонные, ГОСТ 9737-70, на 500 мл.

Колбы конические, ГОСТ 9737-70, на 500 мл.

Колбы грушевидные, ГОСТ 9737-70, на 50 мл.

Мерные колбы, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.

Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, на 100 мл, 10 мл.

Пробирки с оттянутым концом, ГОСТ 10515-75, на 5 мл.

Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 1 мл, 2 мл, 5 мл.

Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-74.

    Пластинка "Силуфол" УФ   .

                          254

Делительные воронки, ГОСТ 8613-75, на 500 мл, 250 мл.

2.4. Подготовка к определению

Хроматографические камеры за один час до начала хроматографирования заполняют смесью подвижных растворителей: хлороформ:этиловый спирт:аммиак (100:10:0,2) и гексан:ацетон:аммиак (80:80:0,1) для насыщения камеры парами подвижных растворителей. Объем подвижного растворителя в камере должен по высоте находиться не выше чем на 0,7 - 1 см от уровня дна камеры.

2.5. Отбор проб

Отбор проб проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом СССР 21 августе 1979 г., N 2051-79.

2.6. Проведение определения

    Измельченную  с помощью ножа пробу (15 г) помещают в плоскодонную колбу

емкостью  500  мл,  заливают  50  мл  этилацетата и экстрагируют фунгицид в

течение  30  мин.  с  помощью  механического  встряхивания  колбы. Экстракт

фильтруют  через  бумажный  фильтр  в  делительную воронку емкостью 500 мл.

Экстракцию   тиабендазола   повторяют  еще  два  раза  тем  же  количеством

этилацетата. Из  объединенного экстракта извлекают фунгицид 0,1 н раствором

соляной   кислоты   три   раза,  порциями  по  30  мл.  Этилацетатный  слой

отбрасывают.  Солянокислотную фракцию собирают в другой делительной воронке

емкостью  250  мл. К  объединенному раствору приливают 3,5 мл 4 н KOH до pH

среды  10  и экстрагируют тиабендазол 5 раз этилацетатом, насыщенным водой,

порциями по 30 мл. Объединенный в конической колбе на 500 мл экстракт сушат

над  безводным сульфатом натрия (25 - 30 г), затем порциями фильтруют через

бумажный  фильтр  в  грушевидную  колбочку  на  50 мл и каждый раз отгоняют

растворитель  с  помощью ротационного вакуумного испарителя до объема 1 - 2

мл.  Последнюю  порцию  растворителя  отгоняют  до объема ~ 0,1 мл. Остаток

экстракта   с   помощью  стеклянного  капилляра  количественно  наносят  на

пластинку "Силуфол"  УФ   .  Справа  и  слева  от  пробы капилляром наносят

                       254

стандартные  растворы тиабендазола, содержащие 1, 2, 3, 4, 5 мкг препарата.

Стандартные растворы готовят следующим обрезом: в серию конических пробирок

пипеткой  помещают  0,1;  0,2;  0,3; 0,4 и 0,5 мл стандартного раствора Б и

концентрируют растворы, нагревая пробирки на водяной бане, до объема  ~ 0,1

мл. Хроматограмму развивают в системе  подвижных  растворителей  хлороформ:

этиловый  спирт:аммиак  (100:10:02)  или  гексан:ацетон:аммиак (80:80:0,1).

После  развития  хроматограмм  и  высушивания  пластинок  на  воздухе пятна

тиабендазола  проявляют  под  лампой  УФ-света  типа  "Хроматоскоп".   Зоны

локализации препарата обнаруживаются в виде фиолетовых пятен на зеленоватом

фосфоресцирующем  фоне  с  R   0,57  +/-  0,02  в  первой системе подвижных

                            f

растворителей  и 0,49 +/- 0,02 - во второй. Пятна можно наблюдать в течение

нескольких   месяцев.   При   необходимости  для  обнаружения  пятен  можно

использовать   реактив   Драгендорфа.   При   обработке  хроматограмм  этим

проявителем тиабендазол проявляется на пластинках в виде оранжевых пятен на

белом фоне. Пятна стабильны на хроматограммах в течение 7 - 8 мин.

2.7. Обработка результатов анализа

Количественное определение тиабендазола проводят путем сравнения площадей и интенсивности окраски пятен рабочей пробы и серии стандартов. При большом содержании тиабендазола на пластинку наносят аликвотную часть раствора.

Содержание тиабендазола в анализируемой пробе (X) в мг/кг вычисляют по формуле:

                                 A x V

                             X = ------ мг/кг,

                                 Va x P

где:

A - содержание тиабендазола в хроматографируемой пробе, мкг;

V - общий объем раствора, из которого отбирают аликвоту для хроматографирования, мл;

Va - объем аликвоты, отобранной для хроматографирования, мл (при нанесении всей пробы V = Va);

P - навеска анализируемой пробы, г.

3. Требования безопасности

Соблюдать требования техники безопасности, принятые для работы с легковоспламеняющимися жидкостями.