"Методические указания по определению этафоса в молоке и мясопродуктах методом газожидкостной хроматографии" // Технорма.RU

Утверждены

Минздравом СССР

27 апреля 1984 г. N 3020-84

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЭТАФОСА В МОЛОКЕ И МЯСОПРОДУКТАХ

МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

--------------------------------

<*> Разработаны В.Р. Хаитовым, Т.Б. Баймуратовым (УзНИВИ).

Краткая характеристика препарата приведена в Унифицированной методике.

Принцип метода. Метод основан на извлечении этафоса из молока в присутствии безводного сульфата натрия смесью органических растворителей - этанола и ацетона (1:3), а из молока и тканей - хлороформом, с последующей очисткой путем перераспределения пестицида из спиртово-ацетонового раствора в гексан. Количественное определение проводят методом ГЖХ.

Метрологическая характеристика метода. Минимально детектируемое количество 0,2 нг. Нижний предел обнаружения этафоса в молоке 0,02 мг/кг. Среднее значение определения препарата в молоке и мясопродуктах 80 - 75%. Доверительный интервал среднего (при p = 0,95 и n = 15) составляет для молока +/- 2,23%, для мясопродуктов +/- 2,24%.

Избирательность метода. Метод специфичен, другие фосфорорганические соединения в данных условиях хроматографирования определению не мешают.

Реактивы и растворы. Основной стандартный раствор этафоса в этиловом спирте, содержание д.в. 100 мкг/мл. Из этого раствора путем соответствующего разбавления готовят рабочие стандартные растворы, содержащие 10,0; 5,0 и 1,0 мкг/мл.

Для экстракции. Ацетон х.ч. Спирт этиловый 96-процентный. Хлороформ х.ч. н-Гексан х.ч. Сульфат натрия безводный. Вода дистиллированная, не содержащая хлоридов. Фильтры бумажные.

Для ГЖХ. Стационарная фаза 3% OV-101 на инертоне-супер (0,16 - 0,20 мм). Стационарная фаза 5% QF-1 на инертоне-супер (0,16 - 0,20 мм). Азот в баллонах с редуктором. Водород в баллонах с редуктором. Стекловата.

Приборы и посуда. Для экстракции. Ротационный вакуумный испаритель. Гомогенизатор или измельчитель тканей. Аппарат для встряхивания. Баня водяная. Весы лабораторные рычажные. Колбы конические плоскодонные на шлифах вместимостью 250 и 100 мл. Делительные воронки. Цилиндры мерные на 100; 50; 25 и 10 мл. Пробирки мерные на шлифах вместимостью 5 - 10 мл. Пипетки на 1; 5 и 10 мл. Воронки химические. Ступка фарфоровая, пестик.

Для ГЖХ. Хроматограф марки "Цвет-106" с ТИД или аналогичный прибор. Компрессор для нагнетания воздуха. Колонки стеклянные длиной 1 м, диаметром 2 мм. Микрошприцы на 10 мкл.

Подготовка к определению. Подготовка хроматографической колонки для ГЖХ. Колонку заполняют общепринятым в хроматографии способом, предварительно в течение 24 - 72 ч ее продувают азотом при температуре 240 °C.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. 10 мл среднего образца молока переносят в колбу с притертой пробкой, добавляют 30 г безводного сульфата натрия, залипают 40 мл смеси этанола и ацетона (1:3) и помещают на 1 ч в холодильник. Затем экстракт фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку. Добавляют 40 мл 2-процентного раствора сульфата натрия и трижды экстрагируют гексаном порциями по 30 мл в течение 2 - 3 мин., каждый раз сливая гексановый слой через фильтр с безводным сульфатом натрия в колбу прибора для отгонки растворителей. Упаривают растворитель досуха под вакуумом на ротационном испарителе при температуре бани не более 45 °C.

20 г гомогенизированного образца мясопродуктов (органов и тканей) переносят в колбу с притертой пробкой, добавляют 30 г безводного сульфата натрия, 50 мл хлороформа и встряхивают на аппарате в течение 1 ч. Затем экстракт фильтруют в колбу прибора для отгонки растворителей. Колбу с образцом промывают 20 мл хлороформа и сливают в отгонную колбу. Затем растворитель упаривают досуха под вакуумом на ротационном испарителе при температуре бани не более 45 °C. Сухой остаток растворяют в 40 мл смеси этанола с ацетоном и фильтруют в делительную воронку. Дальнейшую очистку проводят так же, как пробу молока.

Условия определения методом ГЖХ. Сухой остаток растворяют в 5 - 10 мл этилового спирта, добавляют 2 г безводного сульфата натрия и хроматографируют аликвоту 2 - 5 мкл.

Условия хроматографирования. Хроматограф "Цвет-106" или аналогичный

прибор с ТИД. Температурный режим термостата колонки 180 °C, испарителя -

220 - 225 °C. Скорость потока газа-носителя (азота) 22 - 24 мл/мин.,

воздуха - 200 мл/мин., водорода - 14 - 18 мл/мин. Рабочая шкала

-10

электрометра 2 x 10 А. Скорость диаграммной ленты 10 мм/мин. Стеклянная

хроматографическая колонка длиной 1 м, диаметром 3 мм с OV-101, нанесенной

в количестве 3% на инертон-супер. Линейность детектирования на OV-101

соблюдается в пределах 0,2 - 1 нг. Время удерживания этафоса на OV-101 -

1,75 - 1,8 мин.

В качестве альтернативной колонки для идентификации этафоса в органах и тканях, а также в молоке служит колонка с инертоном-супер с 5% QF-1. При соблюдении названных условий хроматографирования время удерживания этафоса на QF-1 - 1,7 мин.

Обработка результатов анализа. Содержание препарата в пробе (X, мг/л или мг/кг) определяют методом соотношения со стандартом по площади (высоте) пика по формуле:

CS V K

2 2

X = ------

S V P

1 1

или

CH V K

2 2

X = ------,

H V P

1 1

где:

C - концентрация стандартного раствора, введенного в хроматограф, нг;

S , H - площадь и высота пика стандартного раствора, введенного в

1 1

хроматограф, кв. мм, мм;

S , H - соответственно площадь и высота пика препарата в пробе,

2 2

кв. мм, мм;

V - объем экстракта, введенного в хроматограф, мкл;

V - общий объем экстракта после упаривания, мл;

P - масса или объем анализируемой пробы, г или мл;

K - поправочный коэффициент (для молока 1,25, для мясопродуктов 1,33).

Требования безопасности. Следует соблюдать правила предосторожности, необходимые при работе с токсичными, взрывоопасными и легковоспламеняющимися веществами.