Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

27 апреля 1984 г. N 3012-84

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ РОНСТАРА В ПОЧВЕ,

РАСТЕНИЯХ И ЭФИРНЫХ МАСЛАХ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ

1. Краткая характеристика препарата

1.1. Ронстар - гербицид для борьбы с сорняками в посадках риса, лаванды, шалфея, герани, мяты. Действующее начало препарата - 2-трет-бутил-4/5-изопропокси-2,4-дихлорфенил/1,3,4-оксадиазолин-5.

                        O

                    O  / \  C(CH )               C  H  Cl N O .

    (CH ) -CHO      \\/   \/    3 2               15 18  2 2 3

       3 2  \_____    │   │

            //   \\__N└───┘N                     Мол. масса 345,2.

         Cl-\_____/

             -----\

                   Cl

    1.2. Название ИСО - оксадиазон.

    1.3.  В  чистом  виде  -  белое  кристаллическое  вещество, температура

плавления 90 °C. Растворимость в воде 0,7 мг/л, хорошо растворим в этаноле,

                                                              -6

ацетоне,  хлороформе,  бензоле.  Давление  насыщенного пара 10   мм рт. ст.

Выпускается  в  виде  смачивающегося  порошка  и гранул. ЛД   для крыс 8000

                                                           50

мг/кг.

2. Методика определения ронстара в почве, растениях

и эфирных маслах газожидкостной хроматографией

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении ронстара из почвы и растений ацетоном, очистке экстрактов перераспределением в системе двух несмешивающихся жидкостей, дополнительной очистке растительных экстрактов на колонке с окисью алюминия и газохроматографическом определении с помощью детекторов: с постоянной скоростью рекомбинации и термоионного. Из эфирных масел ронстар извлекают диметилсульфоксидом, промывают н-гексаном и определяют методом газожидкостной хроматографии с термоионным детектором.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Минимально детектируемое количество ронстара:

- с детектором постоянной скорости рекомбинации - 0,1 н;

- с термоионным детектором - 0,5 нг.

Нижний предел определения, мг/кг:

- почва: с ДПР - 0,002, с ТИД - 0,01;

- эфиромасличные растения: с ДПР - 0,004, с ТИД - 0,02;

- эфирные масла - 0,1.

                                          _

    Среднее значение процента определения C при n = 5, %:

- почва - 88,3;

- эфиромасличные растения - 70,7;

- эфирные масла - 73,9.

    Стандартное отклонение S , %:

                            x

- почва - 18,6;

- эфиромасличные растения - 13,1;

- эфирные масла - 19,4.

    Относительное стандартное отклонение S_, %:

                                          x

- почва - 8,3;

- эфиромасличные растения - 5,9;

- эфирные масла - 8,7.

Доверительный интервал среднего при P = 0,95 и n = 5, %:

- почва - 23,1;

- эфиромасличные растения - 16,3;

- эфирные масла - 24,2.

Размах варьирования R:

- почва - 77,4 - 96,8;

- эфиромасличные растения - 62,4 - 82,7;

- эфирные масла - 62,1 - 84,4.

2.1.3. Избирательность метода

Метод не селективен в присутствии гербицидов нитрохлора и дактала при использовании для хроматографического определения ронстара детектора постоянной скорости рекомбинации, поэтому в качестве дополнительного способа идентификации необходимо использовать газожидкостную хроматографию с термоионным детектором.

2.2. Реактивы и растворы

Диметилсульфоксид, МРТУ 6-09-5097-68, хч.

Ацетон, ГОСТ 2603-79, осч.

н-Гексан, ТУ 6-09-3375-78, ч, свежеперегнанный.

Ацетонитрил, МРТУ 6-09-3534-74, ч.

Окись алюминия для хроматографирования, МРТУ 6-09-5296-68, ч, II ст. активности.

Сульфат натрия безводный, ГОСТ 4166-76, хч.

Диэтиловый эфир (для наркоза), фармакопея СССР.

Хроматон N-AW-DMCS (0,20 - 0,25 мм) с 5% XE-60, ЧССР.

Хроматон N-AW-DMCS (0,20 - 0,25 мм) с 5% SE-30, ЧССР.

Стандартные растворы ронстара в ацетоне с содержанием 100, 10 мкг/мл. Для приготовления стандартного раствора берут на аналитических весах навеску ронстара 10 мг +/- 0,0002 г, помещают ее в мерную колбу емкостью 100 мл. Навеску растворяют в 10 - 15 мл ацетона и доводят до метки тем же растворителем. Раствор содержит 100 мкг/мл ронстара. Из раствора пипеткой переносят в мерную колбу на 100 мл 10 мл раствора и доводят до метки ацетоном. Раствор содержит 10 мкг/мл ронстара, растворы стабильны при хранении в холодильнике в течение 6 месяцев.

2.3. Приборы и посуда

Хроматограф "Цвет-106" с детектором термоионным, ТУ 1.550.003.

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73.

Ротационный вакуумный испаритель, RV 0-64, ЧССР.

Делительные воронки на 250 мл, 500 мл, ГОСТ 10054-75.

Колбы плоскодонные, конические на 250 мл, ГОСТ 10394-72.

Колбы круглодонные на 100 мл, ГОСТ 10394-72.

Мерные цилиндры на 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Микрошприцы на 1 мкл (МШ-1) и 10 мкл (МШ-10).

Пипетки на 1 и 10 мл, ГОСТ 1770-74.

Мерные колбы на 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Колонки для хроматографирования 100 x 15 мм.

2.4. Подготовка к определению

Органические растворители (ацетон, н-гексан) перед началом работы необходимо перегнать, сульфат натрия прокалить при температуре 300 - 400 °C. Хроматографическую колонку и детектор кондиционируют в режимных условиях в течение 2-х часов.

Отбор проб для анализа проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР N 2051-79 от 21.08.79. Для анализа отбирают среднюю пробу почвы - 100 г, растений эфиромасличных культур - 50 г, эфирного масла - 10 г.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Почва

100 г измельченной и просеянной через сито почвы помещают в плоскодонную колбу на 250 мл, заливают 150 мл ацетона и встряхивают 1 час с помощью механического встряхивателя, оставляют на ночь. Экстракты фильтруют через бумажный фильтр в плоскодонную колбу на 250 мл. Остаток на фильтре промывают ацетоном 2 x 30 мл. Фильтрат упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани 50 °C до 10 мл. Остаток количественно с 30 мл н-гексана переносят в делительную воронку емкостью 500 мл, прибавляют 200 мл дистиллированной воды и реэкстрагируют ронстар н-гексаном, 3 x 30. Объединенный гексановый экстракт сушат, пропуская через 35 г безводного сульфата натрия, и концентрируют на ротационном испарителе досуха. К сухому остатку по стенкам колбы прибавляют 1 мл ацетона, закрывают и вращают колбу. В испаритель хроматографа вводят 2 мкл раствора. Хроматографируют с ТИД и ДПР.

2.5.2. Эфиромасличные растения

    50 г свежесрезанных растений гомогенизируют со 150 мл ацетона в течение

15 - 20 мин. со скоростью 8000 об./мин., встряхивают 30 - 40 мин. Экстракты

фильтруют   через   бумажный  фильтр   в  колбу  емкостью  250  мл.  Стакан

гомогенизатора  промывают  3  x  20 мл ацетоном и через фильтр присоединяют

смыв  к  основному фильтрату. Упаривают ацетон на ротационном испарителе до

10 мл  при  температуре  бани  50  °C.  Остаток   количественно   с  50  мл

ацетонитрила переносят в делительную  воронку  емкостью  250  мл  с  50  мл

н-гексана.  Встряхивают   1  -  2  мин. и  отделяют  верхний слой. Операцию

проводят еще дважды. Нижний слой  переносят на делительную воронку емкостью

500  мл  10%  Na SO  и реэкстрагируют ронстар 3 x 50 мл н-гексана. Собирают

                2  4

верхний слой, объединяют, высушивают, пропуская  через   безводный  сульфат

натрия,  и  упаривают до 5 мл на ротационном  испарителе. Остаток переносят

на колонку  с  6 г  окиси  алюминия, промытую 12 мл смеси н-гексан - ацетон

(9:1).  После  того  как раствор полностью  впитается  в  слой  адсорбента,

отгонную колбу смывают 5  мл  смеси  гексан - ацетон (9:1)  и переносят  на

колонку, операцию проводят 3 раза. Ронстар элюируют 100 мл смеси н-гексан -

ацетон (9:1). Элюат упаривают  на  ротационном  испарителе  досуха. Остаток

растворяют  в  1  мл  ацетона  и 2 мкл вводят  в  испаритель  хроматографа,

хроматографируют с ТИД в ДПР.

    2.5.3. Эфирные масла

    Навеску  10  г  эфирного масла мяты, лаванды, шалфея, герани помещают в

делительную воронку емкостью 250 мл с 50 мл диметилсульфоксида, выдерживают

20  мин. для  растворения. Прибавляют 50 мл н-гексана, встряхивает 2 мин. и

отделяют  верхний  слой.  Операцию  повторяют  дважды.  Оставшийся  раствор

переносят  в  делительную  воронку  емкостью  500  мл  с 200 мл 10% Na SO ,

                                                                      2  4

предварительно  насыщенного  15  мл серного эфира, и реэкстрагируют ронстар

серным  эфиром 3 x 30 мл. Объединенные экстракты собирают, сушат, пропуская

через  безводный  сульфат  натрия, и  концентрируют  досуха  на ротационном

испарителе при температуре водяной бани 30 °C. К сухому остатку  прибавляют

1 мл  ацетона, встряхивают  и  2  мкл  вводят  в  испаритель  хроматографа.

Хроматографирование проводят с ТИД.

УСЛОВИЯ ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЯ

┌─────────────────────────────────────────────┬─────────────┬─────────────┐

│                                             │  5% SE-30   │  5% XE-60   │

├─────────────────────────────────────────────┼─────────────┼─────────────┤

│Размер колонки, мм                           │100 x 3      │100 x 3      │

│Материал колонки                             │стекло       │стекло       │

│Форма колонки                                │спираль      │спираль      │

│Расход газа-носителя, мл/мин., при работе с  │40           │40           │

│ТИД при работе с ДПР                         │60           │60           │

│Расход воздуха, мл/мин.                      │400          │400          │

│Расход водорода, мл/мин.                     │16           │16           │

│Температура испарителя, °C                   │230          │230          │

│Температура термостата колонок, °C           │190          │190          │

│Хроматографируемый объем, мкл                │2            │2            │

│Время удерживания ронстара, мин.:            │             │             │

│при работе с ТИД                             │8,2          │11,5         │

│при работе с ДПР                             │17,5         │24,2         │

│Число теоретических тарелок:                 │             │             │

│при работе с ТИД                             │697          │681          │

│при работе с ДПР                             │784          │767          │

│ВЭТТ:                                        │             │             │

│при работе с ТИД                             │1,4          │1,4          │

│при работе с ДПР                             │1,3          │1,3          │

│Линейный динамический диапазон, нг:          │             │             │

│при работе с ТИД                             │0,5 - 500    │0,5 - 500    │

│при работе с ДПР                             │0,1 - 10     │0,1 - 10     │

│Рабочая шкала электрометра:                  │             │             │

│                                             │        -12  │        -12  │

│при работе с ТИД                             │100 x 10    А│100 x 10    А│

│                                             │       -12   │       -12   │

│при работе с ДПР                             │20 x 10    А │20 x 10    А │

└─────────────────────────────────────────────┴─────────────┴─────────────┘

2.6. Обработка результатов анализа

Количественный расчет препарата в анализируемой пробе проводят по следующей формуле:

                                  H x V

                                       1

                              X = ------ x A,

                                  K x V

                                       2

    где:

    X - количество ронстара в пробе, мг/кг;

    H - высота пика препарата в анализируемой пробе, мл;

    V  - объем анализируемой пробы, мл;

     1

    V  - объем инъектируемой пробы, мкл;

     2

    A - навеска, г;

    K  -  калибровочный  коэффициент,  который  определяется  по  следующей

формуле:

                           H        H              H

                    1       1        2              n

                K = - x [------ + ------ + ... + ------],

                    n    C x V    C x V          C x V

                              1        2              n

    где:

    H , H , H  - высоты пиков стандартного раствора ронстара, мм;

     1   2   n

    V , V , V   -   объемы  стандартного  раствора   ронстара,  вводимые  в

     1   2   n

хроматограф, мкл;

C - концентрация стандартного раствора ронстара, 10 мкг/мл.

Содержание микроколичеств ронстара в пробах вычисляют как среднее из трех параллельных определений.

3. Требования безопасности

При выполнении операций по определению ронстара следует руководствоваться требованиями безопасности при работе с соединениями 3-го класса токсичности (ронстар), а также с легколетучими растворителями.