"Временные методические указания по определению плантвакса в зерне и воде хроматографией в тонком слое" // Технорма.RU

Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

27 апреля 1984 г. N 3001-84

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПЛАНТВАКСА В ЗЕРНЕ И ВОДЕ

ХРОМАТОГРАФИЕЙ В ТОНКОМ СЛОЕ

1. Краткая характеристика препарата

Плантвакс (оксикарбоксин) - 2-метил-5,6-дигидро-1,4-оксатиин-4,4-диоксид-5-карбоновой кислоты анилид.

Структурная формула:

----

/ \

O SO

\ ____ / 2

/ ---- \

H C CONHC H

3 6 5

Эмпирическая формула: C H NO S.

12 13 4

Молекулярная масса: 267,3.

Температура плавления: 127,5 - 130 °C.

В 1 л растворителя растворяется (г плантвакса): в воде 1, в бензоле 34, в ацетоне 360, в метаноле 70, в этаноле 30.

Выпускается в виде 20-процентного к.э., 10-процентного дуста и 5-процентных гранул.

ЛД для крыс - 2000 мг/кг.

Плантвакс - системный фунгицид, рекомендуемый для борьбы с ржавчиной пшеницы.

2. Методика определения плантвакса в зерне и воде

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении пестицида из исследуемой пробы хлороформом и дальнейшем определении методом хроматографии в тонком слое адсорбента ("Силуфол", силикагель).

В качестве подвижного растворителя использовали смесь хлороформа и эфира в соотношении = 5:2.

Обнаружение зон локализации пестицида в тонком слое сорбента основано на термическом либо УФ-разложении препарата до аминосоединения, диазотировании его нитритом натрия в солянокислой среде и азосочетании полученных солей фенилдиазония с N-(1-нафтилэтилендиамином) либо альфа-нафтиламином, альфа-нафтолом.

Возможно обнаружение зон локализации плантвакса другим способом: УФ-разложение препарата, N-галогенирование с последующим проявлением образующихся продуктов о-толидином (или йод-крахмальным реактивом).

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Нижний предел обнаружения плантвакса с помощью реакции диазотирования и азосочетания - 0,2 мкг (N-1-нафтилэтилендиамин), 0,5 мкг (альфа-нафтиламин), 1,0 мкг (альфа-нафтол), с помощью реакции N-галогенирования - 0,5 - 1,0 мкг.

Чувствительность определения плантвакса в зерне - 0,07 мг/кг, в воде - 0,015 мг/л.

Средний процент определения заданных количеств пестицида (0,1 мг/л или мг/кг) - 68,0 (в зерне), 35,0 (в воде), стандартное отклонение 17,6% (зерно), 5% (вода).

Диапазон определяемых концентраций - 0,5 - 10 мкг.

Доверительный интервал среднего при P = 0,95 и n = 5 85,0 - +/- 4,9% (для воды) и 68,0 +/- 14,0% (для зерна).

2.2. Реактивы и растворы

Алюминия окись II степени активности, МРТУ 6-09-5296-68.

Ацетон хч, ГОСТ 2603-71.

Гипс (кальций сернокислый CaSO x 2H O). В течение 2 суток прокаливают

4 2

при 180 °C и просеивают через сито 100 меш.

Калия йодид хч, ГОСТ 4232-74.

Кислота соляная хч, ГОСТ 3116-77.

Калий едкий чда, ГОСТ 9286-78.

Крахмал водорастворимый ч, ГОСТ 10163-76.

Метилен хлористый, ТУ 6-09-3716-74, хч.

Натрий азотистокислый хч, ГОСТ 4197-75.

Пластинки "Силуфол" (ЧССР).

Натрий сернокислый безводный, ГОСТ 4166-76, хч.

Калия перманганат, ГОСТ 20490-75, хч.

альфа-Нафтиламин чда, ГОСТ 8827-74.

альфа-Нафтол чда, ГОСТ 5838-70.

N-(1-нафтилэтилендиамин)дигидрохлорид ч, ТУ 6-09-2544-72.

о-Толидин, МРТУ 6-09-6337-69.

Силикагель "Л" (5 - 40 мк), ЧССР.

Хлороформ хч, ГОСТ 200-15-74.

Эфир для наркоза, Госфармакопея СССР.

Проявляющие реагенты (готовят непосредственно перед проявлением): N 1: а) <*> К смеси, состоящей из 46 мл дистиллированной воды и 4 мл концентрированной соляной кислоты, прибавляют 1 г азотистокислого натрия;

--------------------------------

<*> Расход реагентов на одну пластинку - 5 мл.

б) N-(1-нафтилэтилендиамин)дигидрохлорид, 1-процентный раствор в этиловом спирте;

в) альфа-нафтиламин, 10-процентный раствор в этиловом спирте;

г) альфа-нафтол (3 г едкого калия растворяют в 50 мл дистиллированной воды, прибавляют 0,5 г альфа-нафтола).

N 2. Хлорирующий реагент. Готовят смесь равных объемов 1,5-процентного раствора перманганата калия и 12-процентного раствора соляной кислоты.

о-Толидиновый реагент: а) 0,1 г о-толидина растворяют в 0,1 мл уксусной кислоты; б) 0,4 г йодистого калия растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды.

Растворы "а" и "б" объединяют и разбавляют водой до 100 мл.

Йод-крахмальный реагент. Готовят 1-процентный раствор йодистого калия и 2-процентный водный раствор крахмала, последний заваривают. Смешивают эти растворы в соотношении 1:1.

Стандартный раствор плантвакса готовят растворением 10 мг препарата в ацетоне (50 мл). Раствор содержит 200 мкг/мл.

2.3. Приборы и посуда

Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76.

Воронки химические, диаметр 6 см, ГОСТ 26-13-64.

Воронки делительные, емк. 250, 500 мл, ГОСТ 10054-75.

Камера для опрыскивания, ТУ 11-430-70.

Камера для хроматографирования размером 150 - 200 мм.

Колбы мерные емк. 50, 100 мл, ГОСТ 1776-74.

Колбы круглодонные, н/ш, емк. 150, 200 мл, ГОСТ 10-394-63.

Лампа кварцевая ПРК-4 или ПРК-7.

Микропипетка, ГОСТ 1770-74 (для нанесения стандартного раствора).

Пластинки стеклянные размером 90 x 120 мм.

Пипетки емк. 1, 5, 10 мл, ГОСТ 1770-74.

Прибор для отгонки растворителя.

Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-74.

Цилиндры мерные, емк. 25, 50, 100, 250 мл, ГОСТ 1770-74.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Приготовление пластинок

1,5 г растворимого крахмала заваривают в 15 мл воды, прибавляют 110 мл воды и 40 г силикагеля "Л" (или 60 г окиси алюминия), размешивают до образования однородной массы и по 5 г наносят на стеклянные пластинки, равномерно распределяя ее по поверхности. Сушат пластинки на воздухе в течение суток при комнатной температуре.

2.4.2. Отбор проб

Пробы для проведения анализа отбираются согласно "Унифицированным правилам отбора сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденным зам. Главного государственного санитарного врача СССР, N 2051-79.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция, очистка экстракта

Зерно. 25 - 50 г зерна (пшеница, овес) помещают в коническую колбу, приливают хлороформ в таком количестве (~ 50 мл), чтобы проба была полностью покрыта им, и экстрагируют в течение 1 часа, периодически перемешивая пробу.

Экстракцию повторяют еще дважды по 50 мл растворителя, проводя экстракцию в течение 30 мин. каждый раз. Экстракты объединяют и фильтруют через бумажный фильтр ("синяя лента"). Упаривают на ротационном испарителе досуха. Колбы охлаждают. Прибавляют 20 мл смеси воды и ацетона в соотношении 3:1. Помещают колбы в морозильную камеру холодильника на 1,5 - 2 часа. Производят фильтрование растворов через плотный бумажный фильтр ("синяя лента"). Прибавляют несколько капель соляной кислоты (конц.) до pH = 1 и производят экстракцию хлороформом трижды по 20 мл каждый раз в течение 5 мин. Экстракты объединяют и пропускают через воронку, заполненную б/в сернокислым натрием. Упаривают на ротационном испарителе до небольшого объема (0,05 мл) и наносят на хроматографическую пластинку. В качестве свидетеля наносят стандартный раствор плантвакса (200 мкг/мл) в количестве 5 - 10 мкг.

Вода. 200 мл анализируемой воды помещают в делительную воронку, подкисляют соляной кислотой до pH = 1 и экстрагируют хлороформом или хлористым метиленом трижды по 50 мл. Экстракты объединяют и фильтруют через слой безводного сернокислого натрия и упаривают до небольшого объема (0,05 мл). Сконцентрированную пробу количественно наносят на хроматографическую пластинку.

2.5.2. Хроматографирование

Производят хроматографирование экстрактов в системе растворителей

хлороформ + эфир = 5:2 <*>. Когда фронт растворителя поднимется на высоту

10 см, пластинку вынимают, сушат на воздухе и облучает УФ-светом в течение

30 мин. на расстоянии 25 см от источника. Обрабатывают пластинку

проявляющим реактивом N 1 (вначале реактивом "а"), через 1 мин. - реактивом

"б" или "в", "г". При наличии плантвакса появляются пятна сиреневого

(N -1-нафтилэтилендиамин) или розового цвета (альфа-нафтиламин,

альфа-нафтол). Величина R плантвакса 0,38 - 0,40 ("Силуфол"), 0,77

(силикагель) и 0,70 (окись алюминия).

--------------------------------

<*> Объем подвижной фазы на камеру размером h = 20 см, d = 14 см составляет 50 мл.

Другой метод обнаружения плантвакса состоит в следующем. После УФ-разложения препарата производят хлорирование, поместив пластинку в эксикатор, на дне которого находится хлорирующий реактив, в течение 3-х минут. Пластинку вынимают из эксикатора и оставляют в вытяжном шкафу в течение 1 часа для удаления избытка хлора. Обрабатывают пластинку о-толидиновым или йод-крахмальным реактивом. Сушат пластинку на воздухе и облучают УФ-светом в течение 5 мин. При наличии плантвакса появляются пятна сине-фиолетового цвета.

2.6. Обработка результатов анализа

Количественное определение производится путем сравнения интенсивности окраски и размера пятен пробы и стандартных растворов.

Пропорциональная зависимость между площадью пятна и концентрацией препарата наблюдается до 10 мкг. При большем содержании на пластинку наносят часть раствора.

Содержание препарата в анализируемой пробе рассчитывают по формуле:

A x S

X = ------,

P x S

где:

X - содержание препарата в анализируемой пробе, мг/кг;

A - содержание препарата в стандартном растворе, мкг;

S - площадь пятна стандартного раствора, кв. мм;

S - площадь пятна пробы, кв. мм;

P - масса пробы, взятой на анализ, г.

2.7. Требования техники безопасности

Соблюдать требования техники безопасности, обычно рекомендуемые для работы с органическими растворителями, УФ-светом.