"Временные методические указания по определению микроколичеств лассо в почве и зеленой массе кукурузы методом хроматографии в тонком слое" // Технорма.RU

Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.ЗАИЧЕНКО

27 апреля 1984 г. N 2997-84

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ЛАССО В ПОЧВЕ И ЗЕЛЕНОЙ

МАССЕ КУКУРУЗЫ МЕТОДОМ ХРОМАТОГРАФИИ В ТОНКОМ СЛОЕ

1. Характеристика анализируемого гербицида

1.1. 2-Хлор-2',6'-диэтил-N-метоксиметил-ациланилид.

1.2. Структурная формула (не приводится).

1.3. Молекулярная масса - 269,77.

1.4. Синонимы - лассо, алахлор.

1.5. Химически чистое действующее вещество лассо представляет собой белый кристаллический порошок с температурой плавления 40 - 41 °C. Трудно растворим в воде, хорошо - в ацетоне, бензоле, спирте, хлороформе, этилацетате.

Разрушается в сильных кислотах и щелочах. Относится к малотоксичным

соединениям. ЛД для крыс - 1200 мг/кг при оральном введении.

Выпускается в виде концентратов эмульсий и гранулятов.

2. Методика определения лассо

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на выделении лассо из почвы в растения ацетоном, гидролитическом расщеплении сначала в кислой среде с отщеплением метоксиметильной группы, а затем в щелочной среде с выделением 2,6-диэтиланилина, который перегоняется с водяным паром из щелочной среды.

Количественное определение проводится методом хроматографии в тонком слое (ТСХ) с использованием реакции диазосочетания с 1-нафтолом.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Минимально детектируемое количество - 1 мкг лассо.

Нижний предел обнаружения лассо в почве - 0,005 мг/кг, в зеленой массе кукурузы - 0,01 мг/кг.

Размах варьирования, R, %: в почве - 87 - 92%, растениях - 81 - 89%.

Среднее значение определения, c, %: в почве - 89,5%; в растениях -

85%.

Стандартное отклонение, S, %: в почве и растениях соответственно 2,5 и 4%.

Доверительный интервал среднего при P = 0,95 и n = 5 в почве составляет 89,5 +/- 2,5%, в зеленой массе кукурузы - 85 +/- 4%.

2.1.3. Избирательность метода

Метод специфичен в присутствии других препаратов группы ациланилидов.

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон хч, ГОСТ 2603-79.

Гексан ч, ТУ 6-09-3375-78.

Серная кислота ч, ГОСТ 4204-77.

Натрия гидроксид хч, ГОСТ 4328-77.

Натрия сульфат безводный чда, ГОСТ 4166-76.

Натрия нитрит хч, ТУ 38-10274-79.

1-Нафтол.

Соляная кислота хч, ГОСТ 3118-77.

12 н раствор серной кислоты.

2 н раствор серной кислоты.

50% раствор натрия гидроксида.

Проявляющий реактив: N 1: в смеси 46 мл дистиллированной воды и 4 мл конц. соляной кислоты растворяют 1 г нитрита натрия.

N 2: в 50 мл дистиллированной воды растворяют 2,8 г KOH и 0,1 г 1-нафтола.

Стандартный раствор 2,6-диэтиланилина - 100 мкг/мл в ацетоне.

Стандартный раствор лассо - 100 мкг/мл в ацетоне.

Пластинки "Силуфол" 15 x 15 см.

2.3. Приборы и посуда

Прибор для гидролиза и перегонки с водяным паром (рис. - не приводится).

Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.

Хроматографическая камера, ГОСТ 10565-74.

Камера для опрыскивания, ГОСТ 11413-70.

Пульверизатор, ГОСТ 10391-74.

Микропипетки 0,1 - 0,2 мл, ГОСТ 1770-74.

Колбы конические на шлифах КШ-500 29/32 ТС, ГОСТ 10394-72.

Колбы грушевидные ОКТ 14/23 ТС, ГОСТ 10394-72.

Делительные воронки ВД 3-500, ГОСТ 8613-75.

Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73.

2.4. Ход анализа

2.4.1. Отбор проб

Отбор проб почвы и зеленой массы кукурузы производят в соответствии с требованиями, изложенными в "Унифицированных правилах отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", М.: Минздрав СССР, 1980.

Для анализа отбирают среднюю пробу почвы (100 г) и зеленой массы кукурузы (50 г).

2.4.2. Анализируемые навески помещают в конические колбы емкостью 500 мл, заливают их 200 мл ацетона и помещают на аппарат для встряхивания на 2 часа. После встряхивания пробы отфильтровывают через бумажный складчатый фильтр, предварительно смоченный ацетоном. Остаток в колбах и на фильтре промывают дважды по 50 мл ацетона. Объединенный ацетоновый экстракт помещают в колбу и отгоняют ацетон на ротационном испарителе при температуре 40 °C и остаточном давлении - 1 кгс/кв. см до объема 2 - 3 мл.

2.4.3. Гидролитическое расщепление

Колбу с остатком ацетонового экстракта присоединяют к прибору для гидролиза и перегонки с водяным паром. В приемную колбу приливают 10 мл 12 н серной кислоты. Конец холодильника II должен быть опущен в кислоту. В воронку III приливают 25 мл 2 н серной кислоты. Включают воду через оба холодильника. Кислоту из воронки III медленно приливают в колбу с экстрактом. Затем включают нагрев и кипятят пробу в течение 30 мин.

По истечении времени кипячения нагрев отключают и охлаждают колбу при комнатной температуре в течение 20 - 30 мин. Прибавляют в колбу 50 мл 50% едкого натра, используя воронку III. Раствор щелочи прибавляют медленно, по каплям. После добавления всей щелочи пробу нагревают до кипения и выдерживают при этих условиях 30 мин.

По окончании нагрева отключают воду от холодильника I и перегоняют с водяным паром, собирая 50 мл дистиллята (общий объем 60 мл).

Дистиллят оставляют при комнатной температуре на 1 час, после чего экстрагируют трижды гексаном по 30 мл. Гексановый экстракт отбрасывают. Доводят pH дистиллята с помощью 50% едкого натра до щелочной реакции. Охлаждают щелочной дистиллят на льду в течение 15 мин. и оставляют при комнатной температуре еще на 15 мин. Охлажденный щелочной дистиллят экстрагируют трижды гексаном по 5 мл. Объединенный гексановый экстракт осушают над безводным сульфатом натрия и упаривают на ротационном испарителе до объема 0,1 - 0,2 мл.

2.4.4. Хроматографирование

Остаток после отгона гексана наносят на хроматографическую пластинку "Силуфол" на расстоянии 1,5 - 2 см от нижнего края. Стенки колбочки тщательно омывают несколькими каплями гексана и также наносят в то же стартовое пятно. Справа и слева от пятна пробы наносят стандартные растворы 2,6-диэтиланилина.

Хроматографирование проводят в системе подвижных растворителей гексан - ацетон (2:1).

После того как фронт подвижного растворителя поднимется на высоту 10 см, пластинку вынимают из камеры, подсушивают на воздухе и опрыскивают последовательно проявляющими реактивами N 1 и N 2. После обработки проявляющим реактивом N 1 пластинку подсушивают на воздухе и обрабатывают реактивом N 2 сухую пластинку.

Лассо (точнее продукт его гидролитического расщепления

2,6-диэтиланилин) проявляется в виде оранжево-красных пятен с R = 0,6.

2.5. Обработка результатов анализа

Количественное определение производят путем сравнения площадей пятен проб и стандартных растворов.

Содержание препарата в анализируемой пробе рассчитывают по формуле:

m x S

X = -------------- мг/кг,

A x S x 0,553

где:

X - искомое количество лассо в пробе, мг/кг;

m - количество стандартного раствора 2,6-диэтиланилина, мкг;

S - площадь пятна стандартного раствора, кв. мм;

S - площадь пятна пробы, кв. мм;

A - навеска пробы, г;

0,553 - пересчетный коэффициент на лассо.

2.6. Требования безопасности

Необходимо соблюдать требования безопасности, принятые для работы в химических лабораториях.