Утверждена

Главным управлением

ветеринарии Министерства

сельского хозяйства СССР

20 октября 1983 года

Министерством

здравоохранения СССР

10 ноября 1983 года

Согласована

с Министерством

рыбного хозяйства СССР

28 июля 1983 года

ИНСТРУКЦИЯ

ПО САНИТАРНО-ГЕЛЬМИНТОЛОГИЧЕСКОЙ ОЦЕНКЕ РЫБЫ,

ЗАРАЖЕННОЙ ЛИЧИНКАМИ ДИФИЛЛОБОТРИИД (ВОЗБУДИТЕЛЯМИ

ДИФИЛЛОБОТРИОЗОВ) И ЛИЧИНКАМИ ОПИСТОРХИСА (ВОЗБУДИТЕЛЕМ

ОПИСТОРХОЗА), И ЕЕ ТЕХНОЛОГИЧЕСКОЙ ОБРАБОТКЕ

В целях охраны населения и животных от заболеваний дифиллоботриозами (возбудители - Diphyllobothrium latum, D. dendriticum, D. ditremum) и описторхозом (возбудитель Opisthorchis felineus) через рыб, инвазированных личинками дифиллоботриид и описторхисов, вылавливаемых из водоемов на территориях, неблагополучных по этим гельминтозам, следует руководствоваться следующим.

1. В областях, краях, автономных республиках, особенно в районах, эндемичных по дифиллоботриозу и описторхозу, где на пресноводных водоемах производится промысловый и любительский лов щуки, налима, окуня, ерша, пеляди, сига, хариуса, омуля, ряпушки, гольца и др., а также рыб семейства карповых: язя, леща, плотвы, ельца, красноперки, усача, подуста, жереха, уклеи, линя, густеры, синца, гольяна - необходимо проводить гельминтологические исследования этих рыб на зараженность личинками дифиллоботриид и описторхиса.

2. Организация и проведение исследований рыбы из естественных водоемов и водохранилищ на зараженность личинками дифиллоботриид и описторхиса осуществляются территориальными санэпидстанциями и ветеринарными лабораториями 1 раз в 3 года. Заключение о порядке использования и обработки рыбы выдается территориальными СЭС. При этом рыбохозяйственные организации представляют необходимое (в соответствии с п. 3 настоящей Инструкции) количество рыбы за свой счет и своим транспортом.

В случае исследования рыбы из вышеуказанных водоемов специалистами ихтиопатологической службы и других учреждений они должны сообщить о результатах исследований в соответствующие территориальные санэпидстанции и главному ветеринарному врачу района.

Рыба из водоемов, где проводится ее лов членами рыболовных любительских обществ, представляется для исследования за счет районных отделений этих обществ и их транспортом. Срок доставки рыбы устанавливается на местах областными (краевыми, АССР) санитарно-эпидемиологическими станциями и ветеринарными лабораториями совместно с областными (или другими соответственно) управлениями рыбохозяйственных организаций.

3. На зараженность личинками дифиллоботриид исследуются: щука, налим, окунь, ерш, пелядь, омуль, сиг, хариус, ряпушка, голец, муксун, лосось, форель озерная, чир, тугун, нельма, кета, нерка, кумжа, таймень, корюшка по методике, изложенной в Приложении 1 настоящей Инструкции. На зараженность личинками описторхиса исследуются рыба семейства карповых, язь, лещ, плотва различных подвидов (чебак, сорога, вобла и др.), елец, красноперка, усач, подуст, жерех, уклея, линь, густера, синец, гольян по методике, изложенной в Приложении 2 настоящей Инструкции.

Исследуют по 15 экземпляров каждого вида рыб, обитающего в данном водоеме.

4. При обнаружении в водоеме рыбы, зараженной личинками дифиллоботриид и описторхиса, всю рыбу соответствующих видов независимо от степени зараженности ее следует считать условно годной и допускать к использованию в пищу только после обработки в соответствии с действующими инструкциями по технологической обработке рыбы и п. п. 7 - 10 настоящей Инструкции.

5. Реализация населению свежей и охлажденной необеззараженной условно годной рыбы через предприятия общественного питания и торговли запрещается. В случае отсутствия возможности обработки условно годной рыбы на местах лова допускается ее транспортировка к ближайшему пункту обработки в пределах района, области.

6. Использование условно годной рыбы в пищевых целях допускается в зависимости от ее вида после обработки путем засолки, замораживания, копчения, вяления, специальной кулинарной обработки или консервирования.

7. Посол условно годной рыбы осуществляется рыбообрабатывающими предприятиями:

а) при зараженности личинками дифиллоботриид: смешанным крепким и средним посолом до содержания соли в мясе рыбы крепкосоленой свыше 14%, среднесоленой от 10 до 14% с плотностью тузлуков 1,18 - 1,20 в течение 14 сут.; смешанным слабым посолом до содержания соли в мясе рыбы 8% при плотности тузлуков 1,15 - 1,16 в течение 16 сут.;

б) при зараженности личинками описторхиса: только смешанным крепким посолом до содержания соли в мясе рыбы 14% и выше при плотности тузлука 1,2 в течение 14 сут.

8. При посоле икры в качестве самостоятельного продукта обеззараживание личинок лентецов осуществляется следующими методами:

теплый посол (15 - 16 °С) проводится при количестве соли (в % к массе икры) в 12% - 30 мин.; 10% - 1 ч; 8% - 2 ч; 6% - 6 ч;

охлажденный посол (5 - 6 °С) при тех же количествах соли проводится вдвое дольше.

9. Рыба холодного копчения при зараженности ее личинками описторхиса изготовляется только из обезвреженного соленого полуфабриката с содержанием соли в мясе рыбы не ниже 14% с последующим отмачиванием в соответствии с действующими технологическими инструкциями.

10. На рыбообрабатывающих предприятиях необходимо обеспечить проведение мер профилактики заражения личинками лентецов и описторхиса работающих. Лица, занятые переработкой условно годной рыбы, должны соблюдать меры личной профилактики, в частности не допускать пробования сырого рыбного фарша и других полуфабрикатов рыбных блюд и икры, своевременно обеззараживать отходы, получаемые при разделке рыбы, согласно п. 12 настоящей Инструкции.

11. Запрещается сбрасывать в водоемы, на мусорные свалки и скармливать сырую рыбу и ее отходы домашним плотоядным и всеядным животным и пушным зверям клеточного содержания. Отходы, получаемые при обработке рыбы, направляются для переработки на кормовую рыбную муку, а в случае отсутствия жиромучных установок провариваются в котлах в течение 30 мин. с начала закипания воды.

12. На рынках, в помещениях баз рыболовных обществ, в рыбодобывающих предприятиях и рыбоприемных пунктах в районах, эндемичных по дифиллоботриозу и описторхозу, вывешивают плакаты с перечнем местных видов рыб, от которых можно заразиться дифиллоботриозом и описторхозом. В плакатах необходимо указать методы обеззараживания рыбы, в частности режимы термической обработки рыбы.

Термически обработанная рыба считается обеззараженной при поджаривании в пластованном виде с величиной куска до 100 г. Куски рыбы, приготовленные для жарения, вначале укладывают на сковородку кожей вниз. Общее время жарения кусков мелкой рыбы и котлет из рыбного фарша массой до 100 г не менее 25 мин. Варка такой рыбы и фарша проводится в течение 20 мин. после закипания.

Особенно важно проводить санитарно-просветительную работу на территориях с наличием неблагополучных водоемов, не имеющих рыбопромыслового значения.

13. Ответственность за выполнение настоящих положений по обработке рыбы, зараженной личинками дифиллоботриид и описторхисов, возлагается на руководителей рыбообрабатывающих предприятий.

Лица, виновные в выпуске для питания населения необеззараженной условно годной рыбы, зараженной личинками дифиллоботриид и описторхисов, с нарушением данных правил привлекаются к ответственности.

14. Контроль за выполнением мероприятий возлагается на санитарно-эпидемиологические станции, органы государственного ветеринарного контроля, а также ведомственные санитарную и ихтиопатологическую службы Минрыбхоза СССР.

* * *

С утверждением настоящей Инструкции отменяются "Временные правила санитарно-гельминтологической оценки рыбы, зараженной плероцеркоидами широкого лентеца, направляемой в предприятия рыбной промышленности и общественного питания", утвержденные Министерством здравоохранения СССР 17 мая 1960 г. N 326-60.

Приложение 1

ИССЛЕДОВАНИЕ РЫБЫ НА ЗАРАЖЕННОСТЬ ПЛЕРОЦЕРКОИДАМИ

ДИФИЛЛОБОТРИИД (ВОЗБУДИТЕЛЯМИ ДИФИЛЛОБОТРИОЗОВ)

И ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ ЛИЧИНОК

Диагностические признаки плероцеркоидов

Плероцеркоиды лентеца широкого (D. latum) локализуются в полости тела, икре, внутренних органах, мышцах обычно без капсул (в основном у щуки, налима, окуня, ерша). Длина живых плероцеркоидов от 1 мм до 2,5 см и более. Личинки беловато-молочного цвета. Характерно наличие на теле личинок глубоких складок (ложная сегментация), которые сохраняются даже после расслабления в воде. Сколекс у плероцеркоидов, только что извлеченных из рыбы, обычно втянут (инвагинирован), и личинка имеет булавовидную форму, но при помещении ее в теплую воду сколекс вскоре вытягивается (при этом становятся хорошо заметны и присасывательные щели) и перистальтически сокращается. Личинка активно движется, то сокращаясь, то сильно вытягиваясь. Сколекс при этом приобретает вид удлиненного, заостренного на конце конуса.

Установить наличие сколекса у личинок очень важно, так как иногда за плероцеркоидов могут быть приняты фрагменты их или других цестод. Исследование живых плероцеркоидов проводят с помощью лупы и микроскопа.

Плероцеркоида помещают на предметное стекло в каплю воды или физиологического раствора, накрывают покровным стеклом и исследуют вначале под малым, а затем под большим увеличением микроскопа.

Для личинок лентеца широкого характерна толстая (до 22 мкм) кутикула, лишенная ворсинок на теле и сколексе. Субкутикулярная "светлая" зона (пространство между кутикулой и зоной сплошного расположения известковых телец) у личинок лентеца широкого узкая, не шире толщины кутикулы. Характерно также наличие желез проникновения не только в сколексе, но и в теле личинки; субкутикулярная мускулатура однослойная (что хорошо выявляется на поперечных срезах).

При установлении видовой принадлежности плероцеркоидов используют также способность личинок к осморегуляции. Для этого извлеченного из физиологического раствора плероцеркоида быстро промывают в воде и помещают в чашку Петри с водой. Плероцеркоиды лентеца широкого выживают в воде около суток. Продолжительность жизни плероцеркоидов других видов короче (см. ниже).

Плероцеркоиды лентеца чаечного (D. dendriticum) обычно располагаются в капсулах диаметром 3 - 10 мм на стенках и в толще стенок пищевода и желудка, иногда на других органах и в мышечной ткани (в основном у сиговых и лососевых рыб). Не образуется анатомически выраженных капсул при локализации личинок в икре, а у рыб некоторых видов (например, у сибирской ряпушки) наряду с плероцеркоидами в капсулах встречаются личинки, свободно залегающие в полости тела. Личинки кремового или желтоватого цвета. Развитые плероцеркоиды длиной 1 - 10 см, а отдельные особи - до 25 см. Тело имеет глубокие складки, которые при расслаблении личинок исчезают. У живых сокращенных плероцеркоидов сколекс втянут, выступающие вперед участки тела образуют у головного конца подобие "плечей". В теплом физиологическом растворе личинки столь же активны, как и плероцеркоиды лентеца широкого. По краям ботридиальных листков заметны характерные втяжения, т.е. эти края приобретают фестончатый вид. При микроскопировании живых личинок на кутикуле видны редкие короткие ворсинки, которые на сколексе едва заметны.

Субкутикулярная зона широкая, в 1,5 - 3 раза шире кутикулы. Из гистологических признаков характерны:

а) субкутикулярная мускулатура представлена 1 - 2 (редко 3) слоями;

б) железы проникновения не распространяются за пределы сколекса. В воде личинки лентеца чаечного выживают до 2,5 ч, молодые плероцеркоиды - не более 1 ч. У расслабленных личинок тело лишается складок, сколекс приобретает миндалевидную форму, ботридиальные щели широко раскрываются, тело становится полупрозрачным.

Кроме описанных плероцеркоидов, у рыб встречаются личинки других видов лентецов, не имеющих эпидемиологического значения, но похожих на первых. Из них наиболее распространены плероцеркоиды D. ditremum. Они встречаются преимущественно у лососевых (ряпушка и др.), у корюшковых рыб, в мелких (1 - 3 мм диаметром) капсулах на пищеводе и желудке. В воде выживают не более 5 - 7 мин.

Методика исследования рыбы

Санитарно-гельминтологической экспертизе подлежат виды рыб, являющиеся дополнительными хозяевами дифиллоботриид.

На зараженность исследуют щук, налимов, окуней, ершей, также лососевых, хариусовых, корюшковых рыб (лосось, озерная форель, омуль, пелядь, чир, сиг, муксун, тугун, нельма, кета, нерка, кумжа, таймень, голец, хариус, корюшка).

Рыбу исследуют свежевыловленную. Перед вскрытием рыбу отмывают от слизи, протирают, взвешивают и измеряют ее длину. Для определения возраста берут: у щук - чешую впереди от спинного плавника выше боковой линии; у окуней, кроме того, - жаберные крышки, у налимов - только оттолиты. Очищенную чешую помещают в чешуйную книжку из бумаги - от каждой рыбы на отдельный лист, на котором отмечают номер рыбы, вид, время, место отлова и число найденных плероцеркоидов.

Рыбу можно вскрывать в большой эмалированной кювете, но лучше это делать на широкой гладкой доске. При вскрытии рыбы рекомендуется придерживаться определенной последовательности. Сначала делают короткий надрез вперед от анального отверстия, в надрез вводят тупой конец ножниц и разрезают рыбу вдоль по средней линии брюшка. Разрез продолжают до угла нижней челюсти. Затем делают дугообразный разрез, вырезают левую брюшную стенку, отделяют ее, после чего полость тела и внутренние органы внимательно осматривают, извлекая свободно лежащих плероцеркоидов.

Накладывают лигатуры на кишечник близ анального отверстия и на пищевод в его начальном отделе, чтобы не повредить пищеварительный тракт. Извлекают затем внутренние органы. Вырезают яичники и семенники, помещая их в отдельные чашки Петри. Так же поступают и с другими исследуемыми органами. Кровь из полости тела собирают в чашку Петри и просматривают. Плавательный пузырь осматривают снаружи, затем изнутри. Почки, лежащие вдоль позвоночника, соскабливают тупым инструментом, собирают в чашку Петри и исследуют компрессорным методом. Вырезают и осматривают сердце, делая при необходимости разрезы. Осматривают также сердечную полость. Содержимое, оставшееся в полости тела, собирают и исследуют компрессионно. Полость тела протирают марлевой салфеткой, одновременно соскабливают париетальную брюшину.

Затем приступают к исследованию извлеченных внутренних органов. Сначала отделяют печень и исследуют ее. Особое внимание уделяют осмотру жировой ткани, окружающей желудочно-кишечный тракт и другие органы. Жировую ткань отделяют от органов, одновременно осматривая ее и удаляя плероцеркоидов. Освобожденный от жировой ткани пищеварительный тракт осматривают, отыскивая плероцеркоидов, просвечивающих через серозные покровы.

Пилорические придатки (развитые у лососевых, налима и др.) расслаивают и осматривают снаружи. Стенку желудка и пищевода после наружного осмотра исследуют послойно. Мелких плероцеркоидов обычно находят под бинокуляром (МБС-1, 2, 9).

Жировую ткань исследуют компрессионно между двумя стеклами на темном фоне или в полупроходящем свете. Поджелудочную железу сначала разрезают на тонкие пластинки. Селезенку режут на тонкие пласты и исследуют компрессионным методом. Также исследуют сердце.

Печень осматривают снаружи, затем косые разрезы. Исследовать печень следует особенно внимательно у налима, так как молочно-белый цвет печени затрудняет обнаружение личинок.

Яичник разрезают, содержимое соскабливают и компрессируют. При исследовании крупных икринок применять компрессию необязательно, достаточно их разъединить.

После просмотра внутренних органов приступают к исследованию мускулатуры. С рыбы снимают кожу и осматривают ее внутреннюю сторону, а часть мышц, отделившихся с кожей, разрезают на пластинки или соскабливают и компрессируют. Мышцы исследуют полностью, разрезая их в косом направлении на пластинки толщиной не более 3 - 5 мм.

Определение жизнеспособности плероцеркоидов

Определение жизнеспособности плероцеркоидов проводят при оценке эффективности обеззараживания рыбы. Извлеченные из органов и тканей рыбы плероцеркоиды могут быть неподвижными. Их помещают в подогретый физиологический раствор или желудочный сок, осторожно раздражая личинку препаровальной иглой. Даже слабые движения плероцеркоидов свидетельствуют о жизнеспособности личинок. Изменение цвета плероцеркоидов, отслоение кутикулы, деструктивные изменения тела указывают на нежизнеспособность личинок.

При проверке эффективности обеззараживания рыбы можно применять метод окрашивания живых плероцеркоидов водным раствором нейтральрота в разведении 1:20000 - 1:50000 в течение 30 - 40 мин. Затем рыбу с плероцеркоидами обеззараживают одним из указанных в Инструкции методов, проверяя через определенное время жизнеспособность личинок. Обесцвечивание личинок, ранее окрашенных нейтральротом в розовый цвет, является одним из показателей их гибели.

Оборудование, необходимое для вскрытия рыбы

и определения жизнеспособности плероцеркоидов

Столы лабораторные, табуреты, лампа настольная, шнур-удлинитель, клеенка простая, клеенка полиэтиленовая, весы с гирями и разновесами, доски разделочные, стекло толстое, кюветы и лотки эмалированные, линейка или лента сантиметровая, микроскопы МБИ, бинокулярные лупы (МБС-1, 2 или 9), лупа ручная, микрометр, ножи, брусок для заточки ножей, ножницы большие и малые, скальпели, пинцеты анатомические, чашки Петри, стекла предметные и покровные, стекла для компрессии 9 х 12 и 6 х 9 см, пипетки глазные, воронки, мерная посуда (мензурки, стаканы), банки большие с притертыми пробками, пробирки и пенициллиновые флаконы с корковыми или резиновыми пробками, соль поваренная, формалин, физиологический раствор, желудочный сок, нейтральрот, бумага черная, вата, марля, фартуки клеенчатые, перчатки резиновые, полотенца для рук и посуды, мыло туалетное и хозяйственное, порошок стиральный, тазы, ведра, дезинфицирующие растворы.

Учет результатов

При учете результатов исследований рыбы на зараженность плероцеркоидами лентецов в лабораторном журнале должны быть отражены следующие данные и показатели: административная территория (АССР, край, область, район, населенный пункт), водоем, какой организацией доставлена рыба для исследований, дата, вид рыбы, длина, масса, возраст, число обнаруженных плероцеркоидов (в полости тела и внутренних органах, кроме яичников; в яичниках, в мускулатуре, всего), вид плероцеркоидов (в необходимых случаях - описание личинок).

Приложение 2

ИССЛЕДОВАНИЕ РЫБЫ НА ЗАРАЖЕННОСТЬ МЕТАЦЕРКАРИЯМИ

ОПИСТОРХИСА (ВОЗБУДИТЕЛЕМ ОПИСТОРХОЗА) И ОПРЕДЕЛЕНИЕ

ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ ЛИЧИНОК

Диагностические признаки метацеркариев

В организме дополнительного хозяина описторхиса - рыб семейства карповых - развиваются личинки гельминта - метацеркарии, которые локализуются в подкожной клетчатке и мышцах рыбы, преимущественно вдоль ее средней линии на спинной стороне. Значительно реже метацеркарии паразита обнаруживаются в плавниках, жабрах, глазах, чешуе.

Зрелые метацеркарии описторхиса представляют собой цисту овальной формы, внутри которой находится в согнутом состоянии личинка гельминта. Оболочка цисты двойная: наружная - соединительнотканная, образована за счет тканей хозяина, внутренняя - тонкая, образована секретом паразита.

Внутри цисты личинка описторхиса подвижна и периодически совершает маятникообразные или "переливающиеся" движения, хорошо заметные при наблюдении под бинокуляром или обычным световым микроскопом в течение 1 - 2 мин.

Личинка гельминта покрыта шипиками, снабжена ротовой и брюшной присосками. В задней части ее тела расположен экскреторный пузырь темного цвета, хорошо видимый под бинокуляром МБС при увеличении в 16 раз. Циста имеет размеры 0,23 - 0,37 х 0,18 - 0,28 мм; длина личинки (без цисты) - 0,44 - 0,63 мм, размеры присосок - 0,07 - 0,08 х 0,06 - 0,07 мм.

Перечисленные в Инструкции (см. п. 3) виды рыб семейства карповых могут являться дополнительными хозяевами для других видов трематод, не имеющих эпидемиологического значения, метацеркарии которых следует отличать от метацеркариев описторхиса (см. "Методику определения возбудителей гельминтозоонозов в пресноводных рыбах", утвержденную Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 21.03.83 N 115-6а).

Методы исследования рыбы

Для обнаружения метацеркариев в тканях рыбы используют компрессионный метод или метод переваривания. Более точные результаты будут получены при исследовании всей поверхностной мышечной ткани рыбы, которая тщательно отделяется вместе с подкожно-жировой клетчаткой от кожи и плавников.

Компрессионный метод. Для компрессионного исследования с целью экономии времени допустимо исследовать по 5 проб мышц с подкожной клетчаткой с обеих сторон рыбы: по 3 пробы из спинной и 2 из брюшной части мышц с каждой стороны. Каждая проба мышц берется с площади 1 - 2 кв. см на глубине 2 - 3 мм.

Мышечную ткань, подлежащую исследованию, измельчают и порциями по 1 - 1,5 г раскладывают либо в компрессории, либо между двумя стеклами размером 6 - 8 х 12 - 15 см. При исследовании вяленой, соленой, копченой рыбы рекомендуется ее предварительно сутки вымачивать в воде.

Готовые компрессионные препараты просматривают под бинокуляром при увеличении в 16 раз. Число найденных метацеркариев подсчитывают. При необходимости метацеркариев выделяют из окружающей ткани с помощью препаровальных игл.

Методы переваривания. Для метода переваривания вся поверхностная мышечная ткань (до 0,5 см) отделяется от кожи, тщательно измельчается ножом или в мясорубке.

Мышечную ткань рыбы заливают в соотношении 1:10 искусственным желудочным соком (11 мл концентрированной соляной кислоты, 7 г пепсина, 9 г поваренной соли на 1 л дистиллированной воды). Пробу помещают в термостат на 3 ч при температуре 36 - 37 °С, после чего содержимое фильтруют в стеклянные цилиндры через металлический фильтр с размером ячеек 1 х 1 мм. Через 15 - 20 мин. верхний слой желудочного сока с переваренной мышечной тканью сливают, а осадок переносят в чашку Петри или на часовое стекло, где метацеркариев подсчитывают.

Для лучшего отделения личинок в чашку Петри наливают физиологический раствор, делают несколько круговых движений, в результате которых метацеркарии концентрируются в центре чашки Петри, а излишки физраствора с остатками мышечной ткани удаляют пипеткой.

Метод выделения метацеркариев в искусственном желудочном соке применим в полевых условиях. При этом вместо термостата можно использовать стерилизатор для кипячения медицинских инструментов, в который помешают банки с пробами, наливают воду температурой 36 - 37 °С и поддерживают такую температуру в течение 3 ч. Для приготовления искусственного желудочного сока в полевых условиях реактивы разводят дождевой водой. При использовании речной воды ее сначала отстаивают, а затем фильтруют.

Эффективность метода переваривания (в сравнении с компрессионным) в 1,5 раза выше. Метацеркарии, выделенные методом переваривания из свежей рыбы, сохраняют свою структуру и жизнеспособность. Кроме рыбы промысловых размеров, в ряде случаев с целью эпидемиологического изучения территории возникает необходимость исследования на пораженность метацеркариями описторхиса мальков (сеголетков) карповых рыб. При этом применяют компрессирование мальков целиком.

Учет результатов. Пораженность рыбы метацеркариями описторхисов (экстенсивность инвазии) вычисляют по формуле:

                                   n

                               P = - х 100%,

                                   N

где:

P - общая пораженность в процентах;

N - число зараженных экземпляров рыб;

n - число исследованных экземпляров рыб.

Интенсивность инвазии (среднее число метацеркариев в 1 экз.) определяют по формуле:

                                       m

                                 J   = --,

                                  ср   N

                                        1

    где:

    J   - средняя интенсивность инвазии на одну инвазированную рыбу;

     ср

    m - общее число найденных  метацеркариев;

    N  - число инвазированных экземпляров рыб.

     1

Количество метацеркариев в весовой единице исследованных проб (J) определяют делением числа всех найденных в пробе личинок (m) на массу пробы (M), т.е. по формуле:

                                       m

                                   J = -.

                                       M

Для облегчения подсчета большого количества личинок можно использовать кювету из оргстекла размером 60 х 60 х 15 мм, дно которой разделено на 900 квадратов величиной 2 х 2 мм. Выделенных метацеркариев (с небольшим количеством физиологического раствора) переносят в кювету и равномерно распределяют по поверхности дна. После этого производят их подсчет, при этом метацеркарии учитываются только в квадратах, расположенных по диагонали, затем производится пересчет на общее число клеток кюветы. Ошибка этого способа не превышает 4%.

Определение жизнеспособности метацеркариев

Дня определения жизнеспособности метацеркариев описторхиса имеется ряд методов.

Морфологический метод. Выделенные из ткани рыбы метацеркарии переносятся в каплю физраствора на предметное стекло, осторожно накрывают покровным стеклом и исследуют сначала под малым, а затем под большим увеличением микроскопа. Признаком гибели личинок являются только грубые изменения структуры, явное нарушение целостности оболочек цисты, зернистый распад ее содержимого; разрушение экскреторного пузыря. Менее выраженные признаки деструкции (изменение формы цисты, изменение цвета и т.д.) не могут служить основанием для признания метацеркариев мертвыми.

Метод определения подвижности личинки. Метацеркарии описторхиса обладают способностью двигаться внутри цисты. Движения усиливаются при механическом (надавливание) или термическом (подогревание) раздражении личинки. Наличие даже самых слабых самостоятельных движений свидетельствует о жизнеспособности метацеркария, в то же время их отсутствие еще не говорит о гибели личинки.

Для провокации двигательной активности метацеркариев используют химические раздражители. На выделенных из окружающих тканей метацеркариев наслаивают несколько капель (так, чтобы полностью покрыть личинок) химического реагента. Для ускорения эксцистирования личинки можно подогреть над пламенем спиртовки или же подогреть до 36 °С жидкость перед наслаиванием:

а) воздействие желчью. Метод воздействия дуоденальным содержимым или желчью, полученной при зондировании человека, приводит к эксцистированию 87% всех личинок;

б) воздействие трипсином. При воздействии 0,5-процентным раствором трипсина, приготовленного на физрастворе, уже через 10 - 15 с начинается выход личинок и их активное движение, которое сохраняется при температуре 36 - 37 °С от нескольких минут до нескольких часов. При этом эксцистируется до 97% всех личинок.

Объективным критерием жизнеспособности личинок при применении химических раздражителей являются те или другие проявления двигательной активности личинок. Отсутствие в течение 10 - 15 мин. всякой двигательной реакции и пожелтение метацеркариев свидетельствует о нежизнеспособности личинок.

Перечень необходимого оборудования. Лабораторные столы, табуреты, микроскоп световой, микроскоп стереоскопический (бинокуляр) МБС-1, 2 или 9, термостат, лабораторные весы с разновесами, скальпели, пинцеты, ножницы, иглы препаровальные, компрессории или стекла для компрессии (8 - 9 х 10 - 12 см), стекла предметные, стекла покровные, мерная посуда (мензурки, цилиндры, стаканы), пипетки химические, пипетки глазные, вата, марля, кюветы эмалированные, банки или ведра для отходов, дезинфицирующие средства, сетка металлическая, воронки, чашки Петри, часовые стекла, спиртовка, искусственный желудочный сок, 0,5-процентный раствор трипсина, физиологический раствор.

При учете результатов исследования рыбы на зараженность метацеркариями описторхиса в лабораторном журнале должны быть отражены следующие данные и показатели: место, откуда доставлена рыба для исследования, дата поступления, организация, доставившая рыбу, вид рыбы, возраст, длина, общая масса, масса мышечной ткани и средней пробы, число обнаруженных метацеркариев описторхиса, их жизнеспособность.