Утверждены

Минздравом СССР

24 августа 1983 г. N 2867-83

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ ЗООКУМАРИНА В ВОЗДУХЕ

РАБОЧЕЙ ЗОНЫ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

    Краткая   характеристика  препарата.  Зоокумарин  -  3-(альфа-

ацетонилбензил)-4-гидроксикумарин.     Брутто-формула    C  H  O .

                                                          19 16 4

Молекулярная    масса    308,33.   Синоним   -   варфарин.   Белое

кристаллическое  вещество  с  т.  пл.  161  °C. Хорошо растворим в

ацетоне,  диоксане;  почти  нерастворим  в  95-процентном этиловом

спирте,  эфире.  Не  растворяется  в воде,  бензоле.  Малолетуч. В

воздухе  может  находиться в виде аэрозоля. В воздухе рабочей зоны

ПДК 0,1 мг/куб. м.

Принцип метода. Метод основан на хроматографировании зоокумарина в тонком слое силикагеля с последующим обнаружением зоны локализации препарата путем использования реакции взаимодействия с диазотированной сульфаниловой кислотой. Отбор проб проводят с концентрированием (фильтр "синяя лента").

Метрологическая характеристика метода. Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы 5 мкг; в воздухе - 0,05 мг/куб. м (при отборе 100 л воздуха). Диапазон измеряемых концентраций 0,05 - 0,4 мг/куб. м. Граница суммарной погрешности измерения +/- 13%.

Избирательность метода. Определению не мешают другие гетероциклические соединения.

Реактивы, растворы, материалы. Зоокумарин 92-процентный. Диэтиловый эфир х.ч. Ацетон х.ч. Этиловый спирт 96-процентный. Бензол х.ч. Сульфаниловая кислота ч.д.а. Гидроксид калия х.ч. Нитрит натрия ч.д.а. Хлороводородная кислота х.ч. Карбонат натрия х.ч. Фильтры бумажные "синяя лента". Подвижная фаза бензол - ацетон (2:1).

Проявляющий реагент: раствор 0,1 г диазотированной сульфаниловой кислоты в 20 мл 10-процентного раствора карбоната натрия. Реагент готовят непосредственно перед анализом. Диазотированную сульфаниловую кислоту получают следующим образом. Сульфаниловую кислоту (25 г) растворяют в 125 мл 10-процентного раствора гидроксида калия. После охлаждения раствора добавляют 100 мл 10-процентного раствора нитрита натрия. Затем полученный раствор по каплям прибавляют к охлажденной льдом хлороводородной кислоте (40 мл хлороводородной кислоты, уд. в. = 1,19 в 20 мл воды) так, чтобы температура раствора не поднималась выше 8 °C. Полученную диазотированную сульфаниловую кислоту отфильтровывают, промывают ледяной водой, этиловым спиртом, эфиром и сушат на воздухе. Реагент хранят в темной склянке.

Стандартный раствор зоокумарина в ацетоне концентрации 200 мкг/мл. Готовят, растворяя соответствующую навеску препарата (с учетом действующего начала) в ацетоне в мерной колбе. Стандартный раствор устойчив в течение месяца.

Приборы, посуда. Аспирационное устройство. Фильтродержатели. Чашки фарфоровые диаметром 4 - 5 см. Микропипетки вместимостью 0,1; 0,2 мл с оттянутыми концами. Хроматографические пластинки "Силуфол" размером 150 x 150 мм. Камера для хроматографирования. Пульверизаторы стеклянные.

Условия отбора проб воздуха. Воздух со скоростью 10 л/мин. аспирируют через фильтр "синяя лента". Для определения 1/2 ПДК необходимо отобрать 100 л воздуха. Срок хранения отобранных проб в сухом и темном месте неограничен.

    Ход  анализа.  Фильтр  переносят в стаканчик, трижды промывают

небольшими   порциями  ацетона  (6  -  10  мл).  Фильтры  отжимают

стеклянной   палочкой.   Раствор  сливают  в  фарфоровую  чашку  и

упаривают  на  водяной  бане при температуре 50 °C до объема 0,1 -

0,2   мл,  который  количественно  наносят  на  хроматографическую

пластинку.  На  эту  же пластинку наносят 0,025; 0,05; 0,1; 0,2 мл

стандартного раствора зоокумарина, что соответствует 5, 10, 20, 40

мкг  препарата.  Затем  пластинку  помещают  в  хроматографическую

камеру,  в  которую  за 20 мин. до хроматографирования была налита

подвижная  фаза  бензол  -  ацетон  (2:1).  После  подъема  фронта

подвижной  фазы  на  высоту  10  см  пластинку вынимают из камеры,

оставляют  на  воздухе  до полного испарения следов растворителя и

затем  обрабатывают  проявляющим  реагентом.  При  наличии в пробе

зоокумарина  на  пластинке  проявляются  желто-оранжевые  пятна  с

величиной R  0,86 +/- 0,1. Окраска пятен устойчива в течение 24 ч.

           f

Количество  препарата  определяют  путем  измерения  площади пятен

стандартных растворов и пробы.

Обработка результатов анализа. Концентрацию зоокумарина в воздухе (X, мг/куб. м) вычисляют по формуле:

                                 GS

                                   1

                            X = -----,

                                V  S

                                 20 2

    где:

    G - количество препарата, найденное в пробе, мкг;

    S ,  S   - площади пятен пробы и стандарта соответственно, кв.

     1    2

мм;

    V    -  объем  воздуха, отобранный для анализа и приведенный к

     20

стандартным условиям, л.

Требования безопасности. Соблюдать все требования по технике безопасности при работе в химических лабораториях.