Утверждены

Минздравом СССР

24 августа 1983 г. N 2827-83

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТАЧИГАРЕНА В ПОЧВЕ

МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

--------------------------------

<*> Разработаны В.Д. Чмилем, Л.А. Соломко (ВНИИГИНТОКС).

    Краткая   характеристика   препарата.   Действующее   начало  препарата

тачигарен   -   3-гидрокси-5-метил-изоксазол.  Брутто - формула    C H O N.

                                                                    4 5 2

Молекулярная  масса  99,08.  Общепринятое  название  -  гимексазол.  Чистое

вещество  - бесцветные игольчатые кристаллы, т. пл. 86 - 87 °C. Стабильно к

действию  кислот  и щелочей. Растворимость в воде при 25 °C 8,5 г в 100 мл,

хорошо   растворим   в   метаноле,   ацетоне.  Препарат  рекомендуется  для

протравливания  семян  сахарной  свеклы.  Применяется в виде 70-процентного

с.п.

Принцип метода. Метод основан на извлечении тачигарена из пробы дистиллированной водой с последующим определением методом ТСХ. Оценка содержания тачигарена на хроматограммах проводится сравнением площади и окраски пятен стандарта с пятнами пробы. Для этих целей можно также использовать денситометр.

Метрологическая характеристика метода. Предел определения в почве 0,07 мг/кг. Для определения концентраций больших, чем 1,0 мг/кг, берется аликвотная часть. Среднее значение определения стандарта тачигарена 80%. Относительное стандартное отклонение +/- 5,6%. Минимально открываемое количество на тонкослойных хроматограммах 1 мкг.

Реактивы и растворы. Аммиак водный, ч.д.а. Ацетон х.ч. Бензол ч.д.а. н-Гексан ч. Диэтиловый эфир х.ч. Сульфат натрия безводный, ч.д.а. Нитрит натрия ч.д.а. Нитропруссид натрия ч.д.а, 0,5-процентный водный раствор. Бромфеноловый синий ч.д.а. Хлороводородная кислота ч. Ледяная уксусная кислота х.ч. Нитрат серебра ч.д.а. Силикагель КСК, N 2. Силикагель ЛС 5/40 мю для тонкослойной хроматографии с 13% гипса. Сульфат кальция ч.д.а. Хлорид кальция ч. Хлороформ х.ч. Вода дистиллированная. Проявляющие реагенты: N 1 (пластинку последовательно обрабатывают 0,5-процентным водным раствором нитропруссида натрия, 10-процентным водным раствором нитрита натрия, ледяной уксусной кислотой и затем помещают на 5 - 10 мин. в эксикатор, на дно которого налит 25-процентный водный раствор аммиака). Необходимо использовать свежеприготовленный реактив; N 2 - в мерную колбу на 100 мл помещают 0,05 г бромфенолового синего, 10 мл ацетона и доводят до метки 0,5-процентным водно-ацетоновым раствором азотнокислого серебра (0,5 г азотнокислого серебра растворяют в смеси 24 мл ацетона и 76 мл дистиллированной воды). Годен для употребления в течение месяца при хранении в темной склянке с притертой пробкой. Стандартный раствор тачигарена в н-гексане 0,5 мг/мл. Годен для употребления в течение 6 мес. при хранении в холодильнике.

Приборы и посуда. Ротационный испаритель. Вакуумный водоструйный стеклянный насос. Колбы: мерные на 100 мл; круглодонные на 250 мл со шлифом. Делительные воронки на 1 л. Водяная баня. Микропипетки. Электроплитки. Сушильный шкаф. Стеклянный лабораторный холодильник ХПТ. Аппарат для встряхивания. Центрифуга лабораторная стационарная. Стеклянные пластинки размером 150 x 150 мм. Пластинки "Силуфол". Сито капроновое 100/120 меш. Пульверизатор стеклянный для обработки пластинок. Камера для обработки пластинок. Камера хроматографическая. Эксикатор.

Приготовление хроматографических пластинок. Силикагель (14 г) и сернокислый кальций (1 г) смешивают в 50 мл дистиллированной воды в течение 10 мин. Сорбционную массу (5 - 7 г) равномерно наносят на 1 одну пластинку и сушат при комнатной температуре 12 ч. Затем пластинки активируют в сушильном шкафу при 120 °C в течение 1 ч и хранят в эксикаторе над слоем хлорида кальция.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстракта. При разработке методических указаний использована серая суглинистая почва с содержанием гумуса 1,5 - 2,0%. Навеску воздушно-сухой почвы (100 г), растертой и просеянной через сито с размером отверстий 1 мм, помещают в плоскодонную колбу с пришлифованной пробкой на 500 мл, приливают 100 мл дистиллированной воды с pH 10 (водный раствор аммиака) и экстрагируют тачигарен на аппарате для встряхивания в течение 15 мин. Затем содержимое колбы переносят в центрифужный стакан и центрифугируют 5 мин. Водный раствор сливают, к остатку в стакане добавляют 50 мл дистиллированной воды с pH 10, перемешивают и снова центрифугируют. Эту операцию повторяют еще 2 раза. Объединенный водный экстракт переносят в делительную воронку, доводят pH до 2 - 3 концентрированной хлороводородной кислотой, насыщают хлоридом натрия из расчета 33 г на 100 мл экстракта и экстрагируют тачигарен диэтиловым эфиром (100; 50 и 50 мл). Объединенный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (5 - 10 г) и упаривают на ротационном испарителе (температура водяной бани 30 °C) до объема 0,5 - 1,0 мл. Экстракцию из почвы можно также провести 100 мл смеси растворителей н-гексан-ацетон (4:2). После экстракции смесь растворителей сливают через бумажный фильтр с безводным сульфатом натрия, а остаток в колбе дважды промывают этой же смесью растворителей порциями по 50 мл и фильтруют. Объединенный фильтрат упаривают на ротационном испарителе до объема 1,0 мл, прибавляют 10 мл диэтилового эфира и фильтруют через бумажный фильтр с безводным сульфатом натрия. Колбу дважды ополаскивают эфиром порциями по 10 мл, сливая растворитель через тот же фильтр. Объединенный фильтрат упаривают до объема 0,5 - 1,0 мл.

    Идентификация  и  количественное  определение тачигарена. Остаток после

упаривания  эфирного  экстракта количественно наносят на хроматографическую

пластинку  с  тонким  слоем  силикагеля (могут быть использованы пластинки,

приготовленные  в  лабораторных условиях, и пластинки "Силуфол"). На эту же

пластинку наносят 2; 5 и 10 мкг тачигарена и проводят хроматографирование в

системе  растворителей  бензол-уксусная  кислота (4:1) в хроматографической

камере,  насыщенной  в  течение  2  ч  парами  подвижных растворителей. Для

насыщения  стенки  камеры  обкладываются  фильтровальной  бумагой,  которая

пропитывается  смесью  подвижных  растворителей.  После  окончания процесса

хроматографирования  пластинку  извлекают  из  камеры  и сушат на воздухе в

вытяжном   шкафу.  Для  обнаружения  тачигарена  пластинку  последовательно

обрабатывают  0,5-процентным   водным   раствором   нитропруссида   натрия,

10-процентным  водным раствором нитрита натрия, ледяной уксусной кислотой и

затем  помещают  на  5 - 10  мин.  в  эксикатор,  на  дно  которого   налит

25-процентный  водный  раствор  аммиака.  Тачигарен  обнаруживается в  виде

сине-фиолетовых  пятен  на  белом  фоне с величиной  R    0,72   +/-  0,01.

                                                      f

Минимально открываемое количество на хроматограммах 1 мкг.

    Для  повышения  надежности идентификации тачигарена хроматографирование

может быть также проведено в системе растворителей бензол-ацетон (3:1). Для

обнаружения  тачигарена  пластинку  обрабатывают проявляющим реагентом N 2.

Тачигарен  обнаруживается  в  виде  светло-желтых  пятен  на  синем  фоне с

величиной   R    0,88   +/-  0,01.  Минимально  открываемое  количество  на

             f

хроматограммах   2   -   3  мкг.  Для  определения  тачигарена  может  быть

использовано  также  двукратное  хроматографирование в хлороформе и затем в

системе растворителей бензол-уксусная кислота (4:1).

Обработка результатов анализа. Оценку содержания тачигарена в пробе проводят путем сравнения размера и интенсивности окраски пятен стандартов с пятнами пробы. Для определения содержания тачигарена в почве (X, мг/кг) используют формулу:

                                     100A

                                 X = ----,

                                       P

где:

A - количество тачигарена в пробе, найденное сравнением со стандартом, мкг;

P - масса пробы, г.

Требования безопасности. Соблюдаются общие требования безопасности, рекомендуемые при работе с пестицидами и химическими реактивами.