Утверждены

Минздравом СССР

12 мая 1983 г. N 2810-83

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ГЛИФТОРА В ОРГАНАХ И ТКАНЯХ ЖИВОТНЫХ

ФОТОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ <*>

--------------------------------

<*> Разработаны В.В. Ермаковым, К.С. Измухановым (ВНИИВС).

Краткая характеристика препарата. Глифтор - смесь 1,3-дифторпропанол-2 (70 - 74%) и 1-фтор-3-хлорпропанол-2 (26 - 30%). Бесцветная прозрачная жидкость с т. кип. 120 - 132 °C. С водой смешивается в любых соотношениях. Умеренно растворима в хлороформе и диэтиловом эфире, устойчива в нейтральной и слабокислой среде. Выпускается в виде жидкости, окрашенной в синий или черный цвет. Применяют в качестве зооцида для борьбы с сусликами и мышевидными грызунами в зерновых приманках, содержащих 0,3 - 0,6% глифтора.

Принцип метода. Метод основан на дистилляции глифтора из нейтральной среды с парами воды, гидролизе слабым раствором гидроксида натрия, очистке на колонке катионита и фотометрическом определении по реакции фторид-иона с лантан-ализаринкомплексоном в водно-ацетоновой среде. Количественное определение проводят на фотоэлектроколориметре с красным светофильтром или на спектрофотометре при длине волны 615 нм.

Метрологическая характеристика метода. Минимально определяемое количество 2 мкг. Предел определения 0,1 мг/кг. Среднее значение определения: в мясе - 95,8%, в органах и тканях - 88,6%. Доверительный интервал среднего (при p = 95 и n = 5) для мяса - +/- 3,9, органов и тканей - +/- 5,6.

Избирательность метода. Определению глифтора не мешают неорганические соединения фтора и пестициды, не содержащие фтора. Фторорганические соединения, перегоняющиеся с парами воды и разлагающиеся в щелочной среде с образованием фторид-иона, реагируют с лантан-ализаринкомплексоном.

    Реактивы и растворы.  Ализаринкомплексон ч.д.а.  Ацетон особой чистоты,

х.ч. или перегнанный в присутствии перманганата калия  (на 1 л растворителя

добавляют  1  г  соли).    Бумага    индикаторная    универсальная.    Вата

гигроскопическая  медицинская.  Вода  бидистиллированная.  Катионит  КРС 8n

  +

(Н -форма),  0,25 - 0,50 мм,  ч.  Кислота  азотная  концентрированная  х.ч.

Кислота  хлороводородная  концентрированная х.ч.  Кислота  уксусная ледяная

х.ч.  Нитрат лантана ч. Гидроксид натрия х.ч. Ацетат натрия кристаллический

х.ч. Фторид натрия х.ч.

Для приготовления 0,0005 М раствора ализаринкомплексона 0,2405 г реагента растирают в 100 мл бидистиллированной воды. К полученной суспензии добавляют 0,1 н раствор гидроксида натрия до растворения осадка. Раствор переносят в мерную колбу вместимостью 1 л, добавляют 0,25 г ацетата натрия и после его растворения добавляют по капле 0,5 н хлороводородную кислоту до установления pH 4,5 - 5,0 (по универсальной индикаторной бумаге). После этого доводят объем раствора бидистиллированной водой до метки. Хранят в холодильнике не более 30 дней.

Кислота азотная, 0,01 н раствор. Кислота хлороводородная, 0,3 н раствор.

    Для  приготовления  0,0005 М  раствора  азотнокислого  лантана 0,2165 г

La(NO )  x 6H O  растворяют  в 1 л бидистиллированной воды,  добавляя 5 - 6

     3 3     2

капель 0,01 н азотной кислоты.

    Гидроксид  натрия,  0,1 н  раствор.  Гидроксид  натрия,   20-процентный

раствор.

    Для  приготовления  ацетатного  буферного раствора  (pH 4,3) растворяют

105  г    CH COONa x 3H O   и  100  мл   ледяной   уксусной    кислоты    в

            3          2

бидистиллированной  воде  в  мерной  колбе вместимостью 1 л и объем доводят

водой до метки.

Для приготовления раствора лантан-ализаринкомплексона смешивают 2 части (по объему) ацетатного буфера, 10 частей 0,0005 М нитрата лантана, 10 частей 0,0005 М раствора ализаринкомплексона и 25 частей ацетона. Полученный раствор хранят в холодильнике не более недели.

Для приготовления основного стандартного раствора фтора (100 мкг/мл) растворяют 0,2211 г фторида натрия в мерной колбе вместимостью 1 л и доводят объем бидистиллированной водой до метки. Полученный раствор хранят в полиэтиленовой бутыли в холодильнике не более 30 дней.

Для приготовления стандартного рабочего раствора фтора (5 мкг/мл) 5 мл основного раствора вносят в мерную колбу на 100 мл и объем доводят бидистиллированной водой до метки. Готовят непосредственно перед анализом и полученный раствор переносят в полиэтиленовый флакон.

Приборы и посуда. Аппарат для встряхивании АВУ-1 или аналогичный. Баня водяная электрическая. Баня песчаная электрическая с закрытой спиралью. Бюретки на 25 мл, используемые в качестве колонок. Весы аналитические лабораторные. Весы технические, разновесы. Гомогенизатор или измельчитель тканей. Колбы Эрленмейера вместимостью 200 - 250 мл. Колбы Эрленмейера или стаканы на 100 мл. Колбы мерные вместимостью 100 и 1000 мл. Пипетки мерные на 1; 5 и 10 мл. Прибор для перегонки с парами воды на шлифах, состоящий из холодильника с длиной трубки 20 - 25 см, реакционной колбы Эрленмейера вместимостью 200 - 250 мл и приемника (градуированной пробирки с притертой пробкой на 25 мл). Пробирки градуированные на 25 мл. Фотоэлектроколориметр ФЭК-М или другой. Кюветы с толщиной слоя 30 мм, красный светофильтр. Часы сигнальные.

Подготовка к определению. Подготовка посуды. Глифтор адсорбируется стеклом, поэтому использованную посуду моют следующим образом. В колбы вносят 10 мл концентрированной азотной кислоты и 1 мл этилового спирта. После бурного выделения оксидов азота колбы многократно промывают дистиллированной водой, ополаскивают бидистиллированной водой и сушат в сушильном шкафу при 120 °C. Остальную посуду обрабатывают хромовой смесью, полностью погружая ее в окислитель на сутки. Затем многократно промывают ее водопроводной, дистиллированной и бидистиллированной водой.

Подготовка колонки для ионообменной хроматографии. В бюретку на 25 мл помещают тампон из гигроскопической ваты. Открыв кран, вносят 10 мл бидистиллированной воды, и после того как вода начнет вытекать, кран перекрывают. Затем вновь открывают кран и быстро вносят 3 г катионита, суспензированного в 15 мл бидистиллированной воды. После оседания частиц катионита колонку промывают 20 мг бидистиллированной воды и столбик катионита хранят под слоем воды (5 - 10 см) до использования. Катионит готовят не менее чем за 2 ч до работы.

Отбор и подготовка проб. Учитывая летучесть глифтора, рекомендуется отбирать пробы в полиэтиленовые банки и до анализа хранить в холодильнике.

Ход анализа. Извлечение глифтора из проб. Измельченный или гомогенизированный образец массой 20 г переносят в колбу Эрленмейера на 250 мл, добавляют 50 мл бидистиллированной воды и помещают на встряхиватель на 30 мин. После встряхивания колбу присоединяют к холодильнику прибора для дистилляции и нагревают на песчаной бане, собирая 25 мл дистиллята в калиброванную пробирку на 25 мл, содержащую 0,6 мл 20-процентного раствора гидроксида натрия. В конце дистилляции содержимое пробирки перемешивают.

Для щелочного гидролиза глифтора и очистки гидролизата пробирку с дистиллятом выдерживают 20 мин. в кипящей водяной бане. Затем содержимое охлаждают под струей холодной водопроводной воды до комнатной температуры. Охлажденный гидролизат пропускают через колонку с катионитом со скоростью вытекания элюата 1 капля в секунду (при большой скорости обменная эффективность катионита уменьшается, что может привести к сдвигу pH раствора). Колонку промывают бидистиллированной водой до тех пор, пока объем элюата не станет равным 25 мл.

Для проведения реакции и измерения оптической плотности окрашенного комплекса очищенный гидролизат переносят в колбу на 100 мл, добавляют 25 мл раствора лантан-ализаринкомплексона и перемешивают. Через 20 мин. измеряют оптическую плотность раствора на ФЭК-М при длине волны 615 нм (красный светофильтр) в кювете с толщиной слоя 30 мм относительно раствора сравнения. Раствором сравнения служит дистиллят из 20 г пробы, очищенный на колонке с катионитом, но не подвергавшийся гидролизу.

Построение градуировочного графика. Для построения градуировочного графика в колбы вместимостью 100 мл вносят стандартный раствор фтора и реактивы по схеме, приведенной в таблице 58. Через 20 мин. измеряют оптическую плотность растворов относительно раствора сравнения, в который не вносили фтора (N 1).

Таблица 58

СХЕМА ДЛЯ ПОСТРОЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОГО ГРАФИКА

┌──────────────────────────────────────┬──────────────────────────────────┐

│ Компоненты градуировочных растворов  │  Номер градуировочного раствора  │

│             и их объемы              ├────┬────┬────┬────┬────┬────┬────┤

│                                      │ 1  │ 2  │ 3  │ 4  │ 5  │ 6  │ 7  │

├──────────────────────────────────────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┼────┤

│Рабочий стандартный раствор фтора, мл │0   │0,2 │0,5 │1,0 │2,0 │4,0 │6,0 │

│Вода бидистиллированная, мл           │25,0│24,8│24,5│24,0│23,0│21,0│19,0│

│Раствор лантан-ализаринкомплексона, мл│25,0│25,0│25,0│25,0│25,0│25,0│25,0│

│Количество фтора в 50 мл раствора, мкг│0   │1,0 │2,5 │5,0 │10,0│20,0│30,0│

└──────────────────────────────────────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┴────┘

Градуировочный график строят в координатах оптическая плотность - количество фтора в мкг. Закон Бугера - Ламберта - Бера соблюдается в пределах 1 - 20 мкг фтора.

Обработка результатов анализа. Содержание глифтора в анализируемой пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

                                      2,76CR

                                  X = ------,

                                        P

где:

C - количество фтора в пробе, найденное по градуировочному графику, мкг;

P - масса исследуемой пробы, г;

R - коэффициент, учитывающий полноту извлечения и определения глифтора. Для большинства материалов он равен 1,11;

2,76 - коэффициент пересчета на глифтор.

Требования безопасности. Необходимо соблюдать правила безопасности, принятые для работы с легковоспламеняющимися жидкостями и ядовитыми веществами.