"Методические указания по определению дифоса (абата) в продуктах животного происхождения методом тонкослойной хроматографии" // Технорма.RU

Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

28 декабря 1982 г. N 2648-82

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДИФОСА (АБАТА) В ПРОДУКТАХ ЖИВОТНОГО

ПРОИСХОЖДЕНИЯ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

(Дополнение к N 1350-75)

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Характеристика анализируемого пестицида

Дифос(0,0,0',0'-тетраметил 0,0',-тио-ди(парафенил)тиофосфат).

S S

│ --- --- │

(CH O) P-O-// \\-S- // \\-O-P(OCH ) .

3 2 \ ___ / \ ___ / 3 2

--- ---

Эмпирическая формула - C H O P S .

16 20 6 2 3

М.м. 466.

Синонимы: абат, абат 500 Е, абат 4Е, ОМ, S-736.

Химически чистое вещество - белые кристаллы. Технический препарат -

коричневая жидкость, содержащая 90 - 95% действующего вещества. Препарат

не растворим в воде, хорошо растворяется в органических растворителях

(ацетоне, гексане, хлороформе, эфире, ацетонитриле). Устойчив к воздействию

слабых щелочей (при рН 8 и температуре 20 °С гидролизуется в течение

нескольких недель). Выпускается в форме 30-процентного к.з. Зарубежный

аналог дифоса - абат выпускается в форме 50-процентного к.з. и

25-процентного с.п. Относится к малотоксичным соединениям. ЛД при

введении препарата в желудок белых крыс составляет 1360 - 2300 мг/кг, для

белых мышей - 460 мг/кг. Проникает через кожу. Для кроликов при накожном

нанесении ЛД - 970 - 1930 мг/кг. Раздражающее действие выражено слабо.

Коэффициент кумуляции - 5,7.

Применяется в качестве инсектицида контактно-кишечного действия. Высокоэффективен в борьбе с личинками комаров, мух, а также с вредными насекомыми домашних животных. Эффективен и для защиты сельскохозяйственных культур от вредных клопов, трипсов и других насекомых. ДОК в сахарной свекле, овощах, цитрусовых и хлопковом масле - 0,3 мг/кг, в мясе и яйце - 1 мг/кг, в молоке - не допускается.

2. Методика определения дифоса в продуктах животного

происхождения методом тонкослойной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода.

Метод основан на извлечении препарата из тканей животного ацетоном, осаждении коэкстрактивных веществ из водно-ацетонового раствора уксуснокислым свинцом на холоду, последующем переэкстрагировании дифоса в гексан, хроматографировании на пластинках "Силуфол", в двух системах растворителей: н-гексан - ацетон и диэтиловый эфир - н-гексан. Для проявления хроматограмм применяют раствор бромфенолового синего и азотнокислого серебра с последующей обработкой лимонной кислотой. Количественное определение проводят путем визуального сравнения интенсивности окраски и размера пятен препарата из анализируемых проб и стандартных растворов.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода.

- Диапазон определения концентраций - 0,2 - 25 мкг дифоса в анализируемой пробе;

- Предел обнаружения - 0,2 мкг или 0,02 - 0,05 мг/кг, мг/л;

- Размах варьирования - 70 - 90%;

- Среднее значение определения стандартных количеств дифоса - 79,8%;

- Стандартное отклонение - 4,8;

- Относительное стандартное отклонение - 0,06;

- Доверительный интервал среднего при Р = 0,95 и n = 10 - 79,8 +/- 5,7.

2.2. Реактивы и материалы

Ацетон, чда, ГОСТ 2603-79;

н-Гексан, хч, ТУ-6-09-3375-78;

Эфир диэтиловый (для наркоза);

Натрий сернокислый безводный, чда, ГОСТ 4166-76;

Натрий едкий, хч, ГОСТ 4328-66;

Уксусная кислота (ледяная), чда, ГОСТ 61-69;

Свинец уксуснокислый или свинец уксуснокислый основной, чда, ТУ 6-09-4140-76;

Лимонная кислота, чда, ГОСТ 3652-69;

Бромфеноловый синий, чда, ТУ МГ УХП 271-59;

Серебро азотнокислое, ч, ГОСТ 1277-75;

Дифос - стандартный раствор в ацетоне, содержащий 100 мкг/мл препарата.

2.3. Приборы аппаратура и посуда

Пластинки "Силуфол" производства ЧССР;

Центрифуга лабораторная стандартная ИЛС-3 или аналогичная (объем стаканов 80 - 100 мл);

Шкаф вытяжной;

Шкаф сушильный;

Аппарат для встряхивания АВУ-1 или аналогичный;

Весы технические;

Весы торсионные, тип ВТ, ТУ 64-1-900-77;;

Посуда химическая по ГОСТ 23932-79Е (колбы конические с притертыми пробками - 100 мл; воронки делительные - 200 мл; воронки конические - 5 см; пробирки мерные - 10 мл; цилиндры - 10, 50, 100 мл; пипетки, микропипетки, стаканы химические);

Чашки фарфоровые выпарительные дм 5 - 7 см;

Камеры хроматографические;

Камера для опрыскивания хроматограмм;

Опрыскиватели стеклянные.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Приготовление 20-процентного водного раствора уксуснокислого свинца:

20 г уксуснокислого свинца растворяют в 80 мл дистиллированной воды. При использовании основного уксуснокислого свинца 20 г его растворяют при легком подогревании в 80 мл 5-процентной уксусной кислоты и рН раствора доводят едким натрием до 5,4 - 5,6. Хранят в закрытой посуде.

2.4.2. Приготовление 10-процентного водного раствора уксусной кислоты.

10 мл ледяной уксусной кислоты смешивают с 90 мл дистиллированной воды.

2.4.3. Приготовление проявляющегося реактива:

Реактив 1,25 мг бромфенолового синего растворяют в 5 мл ацетона и объем доводят до 50 мл 0,25-процентным раствором азотнокислого серебра (0,125 г азотнокислого серебра растворяют в 15 мл дистиллированной воды и добавляют 35 мл ацетона). Хранят в закрытой посуде из темного стекла при температуре +4 - 6 °С в течение месяца.

Реактив 2,2-процентный раствор лимонной кислоты. 2 г лимонной кислоты растворяют в 98 мл дистиллированной воды. Хранят в закрытой посуде при температуре +4 - 6 °С в течение 5 - 6 дней.

2.4.4. Отбор проб производят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 за N 2051-79.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция и очистка экстрактов.

Навеску мяса, печени, почек, легкого, сердца по 10 г, жира 2 - 3 г

измельчают ножницами и помещают в колбу с притертой пробкой, молока берут

10 мл. Пробы заливают 10 мл ацетона, тщательно перемешивают и экстрагируют

на аппарате для встряхивания в течение 80 минут. Ацетоновый экстракт

фильтруют в чистую колбу через воронку с ватным фильтром. Пробы промывают

10 мл ацетона и пропускают через тот же фильтр. К объединенному ацетоновому

экстракту приливают 20 мл дистиллированной воды, 2 мл раствора

уксуснокислого свинца и помещают в испаритель холодильника на 1 час.

(Экстракты жира лучше оставлять в испарителе холодильника на ночь.) После

этого содержимое переносят в центрифужные стаканы и центрифугируют на

-1

протяжении 3 - 5 мин. при частоте вращения 3000 мин. Надосадочную

жидкость сливают в чистую делительную воронку. (Если на поверхности

экстракта имеются взвешенные частицы, его дополнительно фильтруют через

воронку фильтром.) В делительную воронку добавляют 10 мл 10-процентной

уксусной кислоты и 60 мл дистиллированной воды. Дифос реэкстрагируют из

этой смеси трижды н-гексаном, используя каждый раз 10 мл экстракта.

При плохом разделении слоев, в связи с образованием эмульсии, добавляют

5 мл насыщенного раствора натрия сернокислого.

Объединенные гексановые экстракты сушат над натрием сернокислым безводным в течение 10 - 15 минут. Упаривание экстракта проводят в вытяжном шкафу при комнатной температуре до объема 0,2 - 0,3 мл.

2.5.2. Хроматографирование.

Сконцентрированный гексановый экстракт наносят на пластинку "силуфол" на расстоянии 1,5 см от нижнего края и 3,5 см от правого вертикального края. Диаметр нанесенного пятна не должен превышать 0,5 см.

Для выявления дифоса используют двухмерную хроматографию. Сначала пластинку помещают в хроматографическую камеру горизонтально (на левый край), куда налита смесь ацетона с гексаном (1:5). После того, как фронт растворителей пройдет всю пластинку, ее подсушивают на воздухе и данную процедуру повторяют еще дважды.

Слева от нанесенной пробы наносят на пластинку стандартный раствор дифоса. Пластинку помещают в вертикальном положении в камеру со смесью растворителей эфир - н-гексан (1:2). Общий объем подвижных растворителей в камере подбирают таким образом, чтобы хроматографические пластинки погружались на 0,4 - 0,5 см. После того, как фронт растворителей поднимется на высоту 10 см от старта, пластинку вынимают и сушат на воздухе.

2.5.3. Проявление.

После испарения растворителей пластинку опрыскивают бромфеноловым синим с азотнокислым серебром и помещают на 5 минут в сушильный шкаф при температуре 30 °С. Затем пластинку опрыскивают раствором лимонной кислоты. Дифос проявляет в виде синих пятен на лимонно-желтом фоне. На обработку одной пластины расходуют 3 - 5 мл проявляющих реактивов. Величина Rf составляет 0,32.

2.6. Обработка результатов

Количество дифоса в анализируемом объеме определяют путем сравнения площади и интенсивности окраски пятна пробы и стандартных растворов препарата с использованием формулы:

А х 1,25 100

Х = -------- х ----, мк/кг или мг/л,

М К

где:

К - количество препарата в исследуемом материале (мк/кг; мг/л);

А - количество препарата, выявленное на пластинке (мкг);

М - масса исследуемой пробы (г, мл);

1,25 - поправка с учетом потерь пестицида в процессе анализа.

3. Требования безопасности

Соблюдаются требования безопасности, рекомендуемые при работе с химическими реактивами.