Утверждены

Минздравом СССР

22 октября 1981 г. N 2481-81

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДИФЛУБЕНЗУРОНА В ВОДЕ, ПОЧВЕ,

ЛЕСНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ, КЛУБНИКЕ, ЦИТРУСОВЫХ, КАРТОФЕЛЕ,

БАКЛАЖАНАХ И КАПУСТЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ <*>

--------------------------------

<*> Разработаны Л.В. Алеевой, В.В. Чекалем (ВНИИГИНТОКС); Г.Ф. Вылегжаниной (ВНИИБМЗР).

    Краткая  характеристика  препарата.  Дифлубензурон  (димилин, ларгон) -

инсектицид. Действующее вещество - N-(2,6-дифторобензоил)-N'-(4-хлорофенил)

мочевина.   Брутто-формула  C  H ClF N O .  Молекулярная масса 310,7. Белое

                             14 9   2 2 2

кристаллическое  вещество,  т. пл. 239 °C.  Растворимость в воде при  20 °C

0,2 мг/л,  хорошо  растворим в ацетоне,  ацетонитриле,  хлористом метилене,

плохо  растворим в неполярных  растворителях.  В водной  среде устойчив при

pH 2 - 8,  может разлагаться при высокой температуре.  В  рыбохозяйственных

водоемах ПДК 0,004 мг/л.

Принцип метода. Метод основан на извлечении препарата из анализируемых проб органическим растворителем, очистке экстракта перераспределением в системе водный ацетон-гексан. Определение соединения методом ТСХ проводят после хроматографирования на пластинках силикагеля или силуфола в системе гексан-ацетон, термического разложения, диазотирования и азосочетания с 1-нафтолом. Определение методом ГЖХ проводят в виде производного после метилирования дифлубензурона.

Метрологическая характеристика метода. При определении методом ТСХ предел определения 0,01 - 0,04 мг/кг (мг/л), среднее значение определения 70 - 84%. При определении методом ГЖХ предел определения 0,02 - 0,05 мг/кг (мг/л), среднее значение определения 65 - 75%, относительное стандартное отклонение +/- (3 - 7)%. Определению не мешают другие производные мочевины.

    Реактивы  и  растворы.  Стандартный  раствор  дифлубензурона  в ацетоне

100 мкг/мл. Реактивы  для экстракции. Ацетон ч. Гексан ч. Хлористый метилен

ч. Хлороформ  фарм.  Сульфат  натрия  безводный ч.  Хлорид  натрия  ч.д.а.,

насыщенный  раствор.  Лимонная  кислота ч., 0,004-процентный в.р. Кремневая

кислота водная, ч. Йод кристаллический ч. Реактивы для ТСХ. Силикагель КСК.

Гипс медицинский.   Пластинки   "Силуфол"   УФ   .  Нитрит  натрия   ч.д.а.

                                              254

Хлороводородная  кислота ч. 1-Нафтол ч.д.а. Гидроокись калия ч. Проявляющие

реактивы.  N  1  (к  46   мл   дистиллированной   воды   прибавляют   4  мл

хлороводородной   кислоты   и   1,5  г  нитрита  натрия);  N  2  (в  50  мл

дистиллированной воды растворяют 2,8 г гидроокиси калия и 0,3 г 1-нафтола).

Проявляющие  реактивы  применяют  свежеприготовленными.  Реактивы  для ГЖХ.

Диметилсульфоксид ч. Йодистый метил ч. Гидрид натрия ч.

Приборы и посуда. Хроматограф типа "Цвет" с ПИД. Колонка стеклянная длиной 2 м, диаметром 3 мм. Прибор для встряхивания. Ротационный испаритель. Пластинки стеклянные размерами 9 x 12 и 8 x 16 см. Камера хроматографическая. Камера для обработки пластинок. Пульверизатор стеклянный. Микрошприц на 10 мкл. Фильтры бумажные. Колбы: плоскодонные на 100; 250 и 500 мл; мерные на 100 мл. Воронки: делительные на 500 и 250 мл; химические; фильтрующие. Пипетки на 1; 5 и 10 мл. Пробирки градуированные на 10 мл.

Подготовка к определению. Стеклянные пластинки размером 9 x 12 см моют раствором соды, сушат, обезжиривают ацетоном и эфиром. Наносят на пластинку 10 г сорбционной массы (35 г силикагеля КСК + 2 г гипса + 90 мл дистиллированной воды) и равномерно распределяют по поверхности пластинки. Пластинки сушат в горизонтальном положении в течение 24 ч. Хранят в эксикаторе. На подготовленные, вымытые и высушенные пластинки насыпают слой кремневой кислоты, предварительно размолотой и просеянной через сито, фракция 0,10 мм. Стеклянной палочкой с укрепленными по обеим сторонам резиновыми кольцами, обеспечивающими толщину слоя 2 мм, равномерно распределяют сорбент. С целью уменьшения краевого эффекта с боковых краев пластинки снимают слой сорбента шириной 2 - 3 мм. Готовят пластинки непосредственно перед употреблением.

Ход анализа. Экстракция. Пробу воды 500 мл помещают в делительную воронку, приливают 10 - 20 мл насыщенного раствора хлорида натрия, экстрагируют 3 раза хлористым метиленом или хлороформом порциями по 50 мл. Объединенные экстракты сушат под безводным сульфатом натрия и отгоняют растворитель на ротационном испарителе при температуре 40 °C до объема 0,2 - 0,5 мл.

Пробу растительного материала (50 - 100 г) измельчают, почвы (100 г) предварительно (за 30 мин. до экстракции) увлажняют 30 мл дистиллированной воды. К анализируемой пробе приливают 200 мл ацетона и выдерживают 1 ч при периодическом встряхивании или встряхивают на аппарате 20 мин. Фильтруют экстракт через бумажный фильтр. Пробу также переносят на фильтр и промывают 2 раза ацетоном порциями по 20 мл. Объем экстракта измеряют и переносят в делительную воронку. Добавляют 4-кратный объем 0,004-процентного раствора лимонной кислоты. Через 5 мин. экстрагируют пестицид из этой смеси гексаном 3 раза порциями по 50 мл, фильтруют через воронку с сульфатом натрия. Экстракты объединяют и отгоняют растворителем на ротационном испарителе при температуре 50 °C до объема 0,2 - 0,5 мл, остаток растворителя выдувают током воздуха.

Пробу измельченных листьев (10 г), овощей (50 - 100 г) заливают 100 - 200 мл хлористого метилена и извлекают пестицид при выстаивании в течение 16 - 18 ч или при встряхивании в течение 2 ч, фильтруют экстракт на воронке Бюхнера. Пробу промывают дважды хлористым метиленом порциями по 50 мл. Объединенный экстракт сушат над сульфатом натрия. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе до 0,5 мл. Экстракт наносят на препаративную пластинку со слоем кремневой кислоты. На аналогичную пластинку наносят раствор дифлубензурона для установления расположения соединения. Пластины размещают на станке для восходящей хроматографии и погружают в хроматографическую камеру с хлороформом. Дают подняться фронту растворителя до верхнего края пластин, вынимают их из хроматографической камеры вместе со станком и проветривают на воздухе в вытяжном шкафу. Пластинку со стандартом помещают в камеру с парами йода для проявления. Отмечают иглой расположение дифлубензурона.

    Соскребают  количественно  сорбент  из  полосы,  на  которой  находится

пестицид в анализируемой пробе,  в сухую  чистую колбу на 50 мл.  Добавляют

10  мл   свежеперегнанного   ацетона,   подсоединяют   колбу   к  обратному

холодильнику  и  нагревают  на  водяной  бане  при температуре 50 - 55 °C в

течение   3 - 5 мин.   Экстракт  фильтруют  через  фильтрующую   воронку  в

круглодонную колбу на 50 мл, используя водоструйный насос. Дважды сорбент и

колбу  ополаскивают  порциями ацетона по 5 мл и присоединяют  к  фильтрату.

Растворитель  отгоняют  на водяной  бане  до  0,5  мл  и остаток наносят на

пластинку "Силуфол" УФ   . Рядом наносят  стандартный  раствор,  содержащий

                      254

2 - 5 мкг  дифлубензурона.  Проявляют  хроматограмму  и системе  хлороформ-

ацетон (4:1),  R  0,64 +/- 0,02 или в системе хлористый  метилен-этилацетат

                f

(9:1), R  0,24 +/- 0,02. Проветривают и просматривают пластинку в УФ-свете.

        f

Отмечают  расположение  пятна  дифлубензурона.   Выскребают  ланцетом  слой

сорбента  с  пятном,  захватывая  площадь  на  2 - 3 мм  шире,  в  колбу на

10 - 25  мл.   Экстрагируют  дифлубензурон  ацетоном,   как  описано  выше,

и  переносят  ацетоновый  экстракт  в  градуированную  пробирку.  Упаривают

растворитель  на  водяной бане до 0,2 - 0,3 мл. Остаток удаляют током азота

при комнатной температуре.

    Определение  дифлубензурона методом ТСХ. Сухой остаток растворяют в 0,2

мл  ацетона и наносят на пластинку. Операцию повторяют еще 2 раза. На ту же

пластинку  наносят  стандартный раствор, содержащий 1; 2 и 5 мкг пестицида.

Пластинки  хроматографируют  в  системе  гексан-ацетон (2:1). После подъема

фронта  растворителя  на  высоту  10  см  пластинку  вынимают  из  камеры и

оставляют  на 5 - 10 мин. в вытяжном шкафу для удаления растворителя. Затем

пластинки  помещают  в  сушильный  шкаф с температурой 160 - 170 °C на 1 ч.

После  охлаждения  пластинки опрыскивают проявляющими растворами N 1 и N 2.

Пестицид  проявляется  в  виде красных пятен на бледно-желтом фоне, R  0,50

                                                                     f

+/- 0,5 - пластинки "Силуфол", R  0,55 +/- 0,05 - пластинки силикагеля КСК.

                                f

Определение дифлубензурона методом ГЖХ. Получение производного. К сухому остатку добавляют 0,5 мл свежеперегнанного сухого диметилсульфоксида и растворяют содержимое пробирки. Добавляют 0,3 мл йодистого метила и 20 мг гидрида натрия. Энергично встряхивают и оставляют на 20 мин. Затем добавляют в пробирку 3 мл гексана и медленно, по каплям, 10 мл дистиллированной воды. Пробирку закрывают притертой пробкой и энергично встряхивают 30 с. Открывают ее и оставляют на несколько секунд для разделения слоев. Гексановый слой отделяют пипеткой в сухую чистую мерную пробирку. К водной фазе добавляют 1 мл гексана и вновь интенсивно встряхивают. Присоединяют гексановый слой к первому экстракту, добавляют 0,5 - 0,7 г безводного сульфата натрия. Гексановый раствор фильтруют в чистую мерную пробирку. Растворитель упаривают до нужного объема, используя водяную баню. Вводят в хроматограф 1 - 2 мкл.

    Условия  хроматографирования.  Хроматограф "Цвет-106" с ПИД. Стеклянная

колонка  размером  2 м x 3 мм, заполнена хроматоном  N-AW-DMCS (0,16 - 0,20

мм) с 5% SE-30. Температура испарителя 230 °C, колонки 220 °C. Расход азота

40 мл/мин., водорода - 30 мл/мин., воздуха - 300 мл/мин. Шкала электрометра

      -11

2 x 10    А. Время удерживания 9,5 мин. для метилированного дифлубензурона.

    Обработка  результатов анализа.  Тонкослойная хроматография. Содержание

пестицида в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

                                     A

                                 X = -,

                                     P

где:

A - количество препарата, найденное путем сравнения со стандартами, мкг;

P - масса анализируемой пробы, г.

Газожидкостная хроматография. Содержание пестицида в анализируемой пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

                                    AHV

                               X = -----,

                                   H V P

                                    1 1

    где:

    A  -  количество пестицида в стандартном растворе дифлубензурона в виде

метильного производного, введенном в хроматограф, нг;

    H  -  высота  пика стандартного раствора метилированного  производного,

     1

введенного в хроматограф, мм;

    H  - высота пика на хроматограмме анализируемой пробы, мм;

     2

    V  - объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл;

     1

    V  - общий объем экстракта, мл;

     2

    P - масса анализируемой пробы, г.

Требования безопасности. Выполняются все необходимые требования при работе с пестицидами.