"Методические указания по определению синтетических пиретроидов (амбуш, децис, рипкорд, сумицидин) в растениях, почве, воде водоемов методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии" // Технорма.RU

Утверждены

Минздравом СССР

22 октября 1981 г. N 2473-81

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СИНТЕТИЧЕСКИХ ПИРЕТРОИДОВ (АМБУШ,

ДЕЦИС, РИПКОРД, СУМИЦИДИН) В РАСТЕНИЯХ, ПОЧВЕ, ВОДЕ

ВОДОЕМОВ МЕТОДАМИ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ

ХРОМАТОГРАФИИ <*>

--------------------------------

<*> Разработаны: Д.Б. Гиренко, М.А. Клисенко (ВНИИГИНТОКС); Т.М. Петровой, Е.Г. Красниковой (ВИЗР); А.Ф. Скурьят, Е.М. Бунякиной (БелНИИЗР).

Краткая характеристика препаратов приведена в таблице 70.

Таблица 70

ХАРАКТЕРИСТИКА ПИРЕТРОИДОВ

┌─────────────┬────────────┬─────────────────────┬────────┬──────────┬─────┬──────┐

│Общепринятое │ Брутто- │ Химическое название │Моле- │ Давление │ДСД, │МДУ в │

│ название │ формула │ │кулярная│паров, Па │мг/кг│карто-│

│ (торговое │ │ │масса │ │ │феле, │

│ название) │ │ │ │ │ │мг/кг │

├─────────────┼────────────┼─────────────────────┼────────┼──────────┼─────┼──────┤

│ │ │ │ │ -5│ │ │

│Перметрин │C H O Cl │+/-Цис,транс-3-(2,2- │391,28 │4,5 x 10 │0,035│0,05 │

│(амбуш) │ 21 20 3 2 │дихлорвинил)-2,2- │ │(25 °C) │ │ │

│ │ │диметилциклопропан- │ │ │ │ │

│ │ │карбоновой кислоты │ │ │ │ │

│ │ │3-феноксибензиловый │ │ │ │ │

│ │ │эфир │ │ │ │ │

│ │ │ │ │ -6│ │ │

│Циперметрин │C H O Cl │(1RS)-Цис,транс-3- │416 │5,1 x 10 │0,003│0,01 │

│(рипкорд, │ 22 19 3 2 │(дихлорвинил)-2,2- │ │(70 °C) │ │ │

│цимбуш) │ │диметилциклопропан- │ │ │ │ │

│ │ │карбоновой-1 кислоты │ │ │ │ │

│ │ │(RS)-3-фенокси- │ │ │ │ │

│ │ │альфа-цианобензиловый│ │ │ │ │

│ │ │эфир │ │ │ │ │

│ │ │ │ │ -5│ │ │

│Фенвалерат │C H O NCl │(RS)-2-Метил-(4- │405 │3,1 x 10 │0,034│0,01 │

│(сумицидин) │ 25 22 3 │хлорфенил)бутановой │ │ │ │ │

│ │ │кислоты (RS)-альфа- │ │ │ │ │

│ │ │циано-3-фенокси- │ │ │ │ │

│ │ │бензиловый эфир │ │ │ │ │

│ │ │ │ │ -8│ │ │

│Декаметрин │C H Br NO │(1R)-Цис-3-(2,2- │505,2 │1,5 x 10 │0,003│0,01 │

│(децис, │ 22 19 2 3│дибромовинил)-2,2- │ │(25 °С) │ │ │

│дельтаметрин)│ │диметилциклопропан- │ │ │ │ │

│ │ │карбоновой кислоты │ │ │ │ │

│ │ │(S)-3-фенокси-альфа- │ │ │ │ │

│ │ │цианобензиловый эфир │ │ │ │ │

└─────────────┴────────────┴─────────────────────┴────────┴──────────┴─────┴──────┘

Препараты нерастворимы в воде. Хорошо растворяются в ацетоне, спиртах, хлороформе. ПДК в воде водоемов составляет: рипкорда - 0,07 мг/л, сумицидина - 0,05 мг/л.

Принцип метода. Метод основан на определении синтетических пиретроидов методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии после извлечения препаратов из анализируемой пробы органическими растворителями (хлороформ, смесь гексана и ацетона, 50-процентный водный раствор ацетона) с последующей очисткой экстрактов перераспределением между двумя несмешивающимися жидкостями и (или) на колонках с адсорбентами.

Метрологическая характеристика метода. Диапазон определяемых концентраций 0,01 - 0,04 мг/кг (мг/л). Остальные параметры приведены в таблице 71.

Таблица 71

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

СИНТЕТИЧЕСКИХ ПИРЕТРОИДОВ

┌─────────┬─────────┬───────────────────────┬─────────────┬───────────────┐

│Препарат │Анализи- │ Среднее значение │Относительное│ Доверительный │

│ │руемый │ определения, % │ стандартное │ интервал │

│ │объект │ │ отклонение │ среднего │

│ │ │ │ │ при n = 5, │

│ │ │ │ │ p = 0,95, % │

│ │ ├──────────┬────────────┼──────┬──────┼───────┬───────┤

│ │ │ ТСХ │ ГЖХ │ ТСХ │ ГЖХ │ ТСХ │ ГЖХ │

├─────────┼─────────┼──────────┼────────────┼──────┼──────┼───────┼───────┤

│Амбуш │Вода │75 +/- 1,7│78 +/- 4,4 │2,3 │5,7 │+/- 5,2│+/- 6,5│

│ │Почва │66 +/- 2,2│67 +/- 3,6 │3,6 │5,2 │+/- 9,3│+/- 6,0│

│ │Картофель│70 +/- 2,3│70 +/- 3,9 │3,2 │5,7 │+/- 8,1│+/- 6,5│

│Рипкорд │Вода │80 +/- 2,0│82 +/- 3,5 │2,5 │4,3 │+/- 6,9│+/- 5,0│

│ │Почва │71 +/- 2,2│72 +/- 3,8 │3,1 │5,3 │+/- 7,0│+/- 6,1│

│ │Картофель│75 +/- 2,4│77 +/- 3,3 │3,2 │4,3 │+/- 8,2│+/- 5,0│

│Сумицидин│Вода │72 +/- 2,4│80 +/- 1,7 │3,1 │1,7 │+/- 8,0│+/- 2,0│

│ │Почва │68 +/- 2,1│70 +/- 2,1 │3,2 │3,0 │+/- 8,7│+/- 3,5│

│ │Картофель│70 +/- 2,6│75 +/- 1,7 │3,7 │2,2 │+/- 9,5│+/- 3,0│

│Децис │Вода │80 +/- 1,8│85,6 +/- 2,7│2,2 │3,2 │+/- 5,0│+/- 8,2│

│ │Почва │72 +/- 2,5│79,0 +/- 2,9│3,4 │3,7 │+/- 8,1│+/- 9,5│

│ │Картофель│75 +/- 2,7│82,3 +/- 2,3│3,6 │2,8 │+/- 9,0│+/- 7,2│

└─────────┴─────────┴──────────┴────────────┴──────┴──────┴───────┴───────┘

Избирательность метода. Хлорсодержащие пестициды определению не мешают.

Реактивы и растворы. Для экстракции и очистки экстрактов. Ацетон ч. Диэтиловый эфир х.ч. н-Гексан ч., х.ч. Сульфат натрия безводный свежепрокаленный. Хлороформ ч. Ацетонитрил ч. Бензол ч.д.а. Хлорид кальция х.ч., 0,05-процентный раствор. Оксид алюминия для хроматографии II степени активности. Хлорид натрия ч.

Для метода ТСХ. Пластинки "Силуфол" УФ . Аммиак ч., 25-процентный

254

водный раствор. Нитрат серебра. Фосфорно-молибденовая кислота ч.д.а. Спирт

этиловый 96-процентный.

Проявляющие реагенты: N 1 - 0,5 г нитрата серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 7 мл 25-процентного раствора аммиака и доводят объем раствора до 100 мл ацетоном; N 2 - 10-процентная фосфорно-молибденовая кислота в этиловом спирте.

Для метода ГЖХ. Неподвижные фазы: 5% SE-30 на хроматоне N-AW-HDMC (0,16 - 0,20 мм); 3% OV-1 на хроматоне N-AW-HDMS (0,125 - 0,160 мм); 5% ПМС-100 на хроматоне N-AW (0,100 - 0,125 мм). Азот особой чистоты.

Стандартные растворы: N 1 - основной стандартный раствор пиретроидов в гексане (500 мкг/мл). Хранят в холодильнике в течение 6 мес.; N 2 - стандартный раствор пиретроидов в гексане или бензоле (10 мкг/мл). Хранят в холодильнике в течение 2 недель.

Приборы и посуда. Колбы: конические на 50 и 250 мл; круглодонные со шлифами для отгонки растворителей; мерные. Делительные воронки на 50; 100 и 250 мл. Воронки. Колонки для адсорбционной хроматографии длиной 30 см с диаметром 15 мм. Аппарат для встряхивания колб. Прибор для отгонки растворителей (ротационный вакуумный испаритель). Камера хроматографическая. Микропипетки на 0,1 - 0,2 мл. Хроматоскоп (хемоскоп). Пульверизатор стеклянный. Микрошприцы на 10 мкл. Газовый хроматограф "Цвет", "Газохром" с ДЭЗ (ДПР).

Подготовка к анализу. Приготовление хроматографической колонки. В колонку помещают ватный тампон, последовательно 3 - 4 г сульфата натрия, 5 г оксида алюминия, 2 г безводного сульфата натрия.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Пробу воды (500 мл) помещают в делительную воронку, добавляют 10 г хлорида натрия, хорошо перемешивают и трижды экстрагируют хлороформом порциями по 50 мл. Пропускают экстракт через слой сульфата натрия и упаривают до объема 0,3 - 0,5 мл при температуре бани не выше 50 °C, а затем досуха на воздухе. Остаток в колбе растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют (ТСХ и ГЖХ).

Измельченную пробу растительного материала (овощи, фрукты, зеленая масса) массой 25 г помещают в коническую колбу, заливают 50 мл 50-процентного водного ацетона, встряхивают в течение 1 ч. Экстракцию повторяют трижды. Экстракты фильтруют через бумажный фильтр, объединяют и помещают на 1 ч в холодильник. При выпадении осадка пробу следует отфильтровать вторично. Объединенный фильтрат переносят в делительную воронку и экстрагируют пиретроиды 30 мл гексана. Встряхивают 5 - 10 мин., отделяют гексан, а водный раствор встряхивают еще дважды с 30 мл гексана. Объединяют гексановую фракцию, сушат безводным сульфатом натрия и концентрируют до объема 0,3 - 0,5 мл на ротационном испарителе при температуре бани не выше 50 °C, затем на воздухе досуха. Остаток в колбе растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют (ГЖХ и ТСХ). Если конечные экстракты получились недостаточно чистые, их дополнительно очищают с помощью ацетонитрила или методом колоночной хроматографии. В первом случае к сухому остатку в колбу добавляют 3 - 5 мл ацетонитрила, встряхивают 1 - 2 мин. Переносят ацетонитрил количественно (смывая колбу 1 - 2 мл свежего ацетонитрила) в делительную воронку и приливают 50 мл 2-процентного раствора хлорида натрия. Пиретроиды дважды экстрагируют гексаном порциями по 30 мл, встряхивая по 1 - 2 мин. Пиретроиды переходят в гексан, коэкстрактивные вещества остаются в водном растворе. Объединенный гексановый экстракт сушат безводным сульфатом натрия, упаривают досуха. Остаток растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют.

Для очистки экстракта подготовленную колонку промывают 30 - 40 мл хлороформа или бензола, элюат отбрасывают. Вносят в колонку остаток пробы после упаривания (если растворитель был удален досуха, остаток растворяют в 1 - 2 мл гексана) порциями по 1 - 2 мл гексана, дают раствору впитаться и элюируют пиретроиды 50 мл бензола. Элюат концентрируют досуха. Остаток растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют.

Пробу почвы (20 г) помещают в коническую колбу, заливают 50 мл смеси ацетона и хлорида кальция (1:1), встряхивают в течение 1 ч. Экстракцию повторяют трижды. Экстракты фильтруют, объединяют, переносят в делительную воронку и экстрагируют пиретроиды 30 мл гексана. Встряхивают 5 - 10 мин., отделяют гексан, а водный раствор встряхивают еще дважды с 30 мл гексана. Объединяют гексановую фракцию, сушат безводным сульфатом натрия и концентрируют досуха. Остаток в колбе растворяют в 1 мл гексана и хроматографируют. Если конечные экстракты получились недостаточно чистыми, их дополнительно очищают с помощью ацетонитрила или методом колоночной хроматографии (так же, как при анализе растительного материала).

Условия хроматографирования (метод ГЖХ). В хроматограф последовательно

вводят по 5 мкл стандартного раствора N 2 и пробы. Носитель -

-12

хроматон N-AW-HDMC (0,16 - 0,20 мм). Шкала электрометра 20 x 10 А.

Линейный диапазон детектирования 3 - 15 нг. Нижний предел определения (нг):

амбуш - 10, рипкорд - 3, сумицидин - 5, децис - 5. Время удерживания

пиретроидов приведено в таблице 72.

Таблица 72

ВРЕМЯ УДЕРЖИВАНИЯ ПИРЕТРОИДОВ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ

УСЛОВИЯХ ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЯ

┌────────────────────┬───────────────────────────────────────────┐

│ Препарат │ Неподвижная фаза │

│ ├─────────────────────┬─────────────────────┤

│ │ 5% SE-30 <*> │ 3% OV-1 <**> │

├────────────────────┼─────────────────────┼─────────────────────┤

│Амбуш │1 мин. 24 с │1 мин. 57 с │

│Рипкорд │2 мин. 30 с │2 мин. 20 с │

│Сумицидин │3 мин. 06 с │- │

│Децис │3 мин. 36 с │3 мин. 30 с │

└────────────────────┴─────────────────────┴─────────────────────┘

--------------------------------

<*> Длина колонки 0,5 м. Температура (°C): испарителя - 240, колонки - 220, детектора - 250. Скорость потока азота 60 мл/мин.

<**> Длина колонки 1 м. Температура (°C): испарителя - 270, детектора - 280. Скорость потока азота 30 мл/мин.

Для идентификации амбуша (перметрина) может быть использована колонка длиной 1 м с 5% ПМС-100 на хроматоне N-AW. Температура испарителя и детектора 270 °C, колонки - 240 °C. Скорость азота 60 мл/мин. Время удерживания амбуша 7 мин. 30 с.

Тонкослойная хроматография. Экстракт после определения методом ГЖХ упаривают до 0,2 - 0,3 мл и количественно наносят на хроматографическую пластинку "Силуфол". Помещают пластинку в камеру, содержащую смесь растворителей гексан-ацетон (4:1). После развития хроматограмм и высушивания на воздухе пластинку обрабатывают одним из проявляющих реагентов.

При обработке раствором нитрата серебра после облучения УФ-светом в течение 5 мин. пиретроиды проявляются в виде серо-черных пятен. Нижний предел определения рипкорда 3 мкг, амбуша, дециса, сумицидина - 5 мкг.

При обработке 10-процентным раствором фосфорно-молибденовой кислоты в этиловом спирте нижний предел определения составляет 3 - 10 мкг.

Хроматограммы на пластинках "Силуфол" УФ до опрыскивания

254

проявляющими реагентами можно просматривать в хроматоскопе. В УФ-свете

(лямбда = 254 нм) пиретроиды обнаруживаются в виде темных пятен на

флуоресцирующем фоне. Предел обнаружения - 3 мкг. Величины R пиретроидов

на пластинках "Силуфол" при использовании в качестве подвижного

растворителя смеси гексана с ацетоном (4:1) равны: для амбуша - 0,61,

рипкорда - 0,44, сумицидина - 0,34, дециса - 0,45.

Обработка результатов анализа. При использовании метода ГЖХ количественное определение проводят путем сравнения пиков пробы и стандарта (при условии, что пики близки по величине и определение ведется в диапазоне линейности детектора). Количественную оценку пиков хроматограммы проводят по площади пика, рассчитывая ее как произведение высоты пика на ширину, измеренную на половине высоты.

Количество препарата в пробе (X, мг/кг или мг/л) рассчитывают по формуле:

C V S

ст 2

X = ------,

S V P

ст 1

где:

C - количество препарата во введенном в хроматограф стандартном

ст

растворе, нг;

S - площадь пика стандартного раствора пиретроида, введенного в

ст

хроматограф, кв. мм;

S - площадь пика исследуемого раствора, кв. мм;

V - объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл;

V - объем анализируемого экстракта после упаривания, мл;

P - навеска или объем анализируемой пробы, г или мл.

При использовании метода ТСХ содержание препарата в пробе (X, мг/кг или

мг/л) рассчитывают по формуле:

X = -,

где:

A - количество препарата, найденное путем сравнения размера или интенсивности пятен пробы и стандартного раствора, мкг;

P - навеска анализируемой пробы, г или мл.

Требования безопасности. Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.