"Временные методические указания по определению розалина в растительных объектах, воде и почве хромато-спектрофотометрическим методом" // Технорма.RU

Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

22 октября 1981 г. N 2471-81

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РОЗАЛИНА В РАСТИТЕЛЬНЫХ ОБЪЕКТАХ, ВОДЕ

И ПОЧВЕ ХРОМАТО-СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия Временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Краткая характеристика препарата

\ // \ ___NH C H N Cl

│ ││ │ 8 7 2

\\ / \ //\

N C-CH М.м. 166,5.

5-хлор-2-метил-бензимидазола - порошок белого цвета с кремоватым оттенком с температурой плавления 204 - 206 °С. Хорошо растворяется в этиловом, метиловом спиртах, этилацетате, ацетоне, хлороформе, растворим в горячей воде, нерастворим в бензоле.

Розалин - гербицид избирательного действия против однолетних сорняков

на посевах хлопчатника. ЛД для крыс составляет 600 мг/кг.

2. Методика определения розалина в растительных

объектах, в воде и почве

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на хроматографировании розалина в тонком слое силикагеля в системе: бензол - ацетон (2:3) с проявлением зоны локализации препарата на пластинке 0,05-процентным раствором азотнокислого серебра. Количественное определение проводят измерением оптической плотности этанольного элюата на спектрофотометре СФ-16 при длине волны 246 нм в кюветах толщиной слоя 1 см. Чувствительность определения 1 мкг в анализируемой пробе.

2.1.2. Метрологическая характеристика

Диапазон определяемых концентраций:

растительный объект - 0,05 - 1,0 мг/кг;

вода - 0,01 - 1,0 мг/л;

почва - 0,02 - 1,0 мг/кг.

Предел обнаружения:

растительный объект - 0,05 мг/кг;

вода - 0,01 мг/л;

почва - 0,02 мг/кг.

Число параллельных определений:

растительный объект - 5;

вода - 5;

почва - 5.

Среднее значение определений:

растительный объект - 92,3%;

вода - 91,8%;

почва - 91,6%.

Стандартное отклонение:

растительный объект - 0,011;

вода - 0,0204;

почва - 0,013.

Относительное стандартное отклонение:

растительный объект - 0,327;

вода - 0,0394;

почва - 0,072.

Доверительный интервал среднего при Р = 0,95 и n = 5, в %:

растительный объект - 2,5 - 3,10;

вода - 2,5 - 3,80;

почва - 1,8 - 4,12.

2.1.3. Избирательность метода

Определению не мешают - ГХЦГ, ДДЕ, ДДД, ДДТ, рогор, антио, базудин.

2.2. Реактивы и растворы

Стандартные растворы розалина, х.ч., содержащие 100 мкг/мл хлороформа и спирта. 10 мг розалина растворяют в хлороформе в мерной колбе на 100 мл и доводят до метки. Раствор устойчив и течение 3-х месяцев при хранении на холоду. Точно так же готовят стандартный раствор розалина в спирте.

Ацетон, х.ч., ГОСТ 2603-79.

Бензол, х.ч., ГОСТ 5955-75.

Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-73.

Натрий сернокислый, х.ч., ГОСТ 4166-76.

Окись алюминия, ч.д.а., МРТУ 6-09-2046-64.

Йод кристаллический, ч.д.а., ГОСТ 4139-79.

Хлороформ, х.ч., ТУ 6-09-4263-76.

Этиловый спирт ректификат, ТУ 6-09-4512-77.

Серебро азотнокислое, х.ч., ГОСТ 1277-75, 0,5-процентный водно-ацетоновый раствор (1 ч. воды и 3 ч. ацетона).

Бромфеноловый синий, ч.д.а., ТУ 6-09-1058-76, 0,05 гр. растворяют в 10 мл ацетона (последний разбавляют раствором азотнокислого серебра до объема 100 мл).

Лимонная кислота, х.ч., ГОСТ 3652-69, 2-процентный водный раствор.

Вата обезжиренная.

Эфир диэтиловый, ГОСТ 6266-52.

2.3. Приборы и посуда

Спектрофотометр СФ-4А или СФ-16.

Пластинки хроматографические марки "Silufol Uv-254".

Делительные воронки на 500 и 250 мл.

Мерные колбы на 100 и 25 мл, ГОСТ 1770-74.

Пипетки, ГОСТ 20292-74.

Камера для хроматографирования.

Колонка хроматографическая стеклянная.

Пульверизаторы стеклянные.

Прибор для отгонки растворителя.

Баня водяная.

Эксикатор для йодной камеры.

Шприцы комбинированные, ТУ 64-1-378-73.

2.4. Отбор, хранение и доставка проб

2.4.1. Отбор проб проводится в соответствии с Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденных заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.79 за N 2051-79.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Условия экстракции и очистки

Вода. 100 мл воды помещают в делительную воронку, заливают 30 мл хлороформа и экстрагируют 10 мин. Экстракцию повторяют с 30 и 20 мл хлороформа. Объединенные экстракты сушат безводным сернокислым натрием (10 гр.) в течение 5 мин., далее экстракт переносят в колбу для отгонки растворителя. Растворитель упаривают почти досуха (остаток в колбе 0,2 - 0,3 мл, испаряют при обычной температуре).

Почва. К 50 гр. увлажненной навески приливают 40 мл хлороформа, перемешивают 30 мин. на аппарате для встряхивания. Экстракцию повторяют с 30 мл хлороформа дважды. Объединенные экстракты фильтруют через бумажный фильтр. Сушат безводным сернокислым натрием (10 гр.) 5 мин. Экстракт количественно переносят в колбу для отгонки растворителя и упаривают почти досуха.

Растительный материал. 20 гр. воздушно-сухого измельченного растительного материала (листья, стебли хлопчатника, надземная часть люцерны) помещают в колбу на 500 мл, заливают 200 мл дистиллированной воды и кипятят в течение 30 мин. Гомогенат фильтруют в горячем виде, остаток на фильтре промывают несколькими порциями горячей дистиллированной воды. Фильтраты объединяют, количественно переносят в делительную воронку емкостью 500 мл и экстрагируют хлороформом по 30 мл трижды. Экстракты объединяют и очищают от коэкстрактивных веществ, пропуская его через хроматографическую колонку, заполненную обезжиренной ватой (2 см), окисью алюминия (5 - 6 см) и безводным сернокислым натрием (5 - 6 см). Колонку перед тем, как пропустить пробу, промывают хлороформом. Растворитель упаривают почти досуха.

2.5.2. Хроматографирование

Сухой остаток в колбе после упаривания растворяют в 0,3 - 0,5 мл

хлороформа. Пробу при помощи туберкулинового шприца количественно наносят

на середину хроматографической пластинки так, чтобы диаметр пятна не

превышал 1 см. Колбу дважды промывают небольшими порциями (0,4 мл)

хлороформа, которые также наносят в ту же точку. На соседние полосы наносят

стандартный раствор розалина, содержащий 2 и 5 мкг препарата. Пластинку с

нанесенными пробами и стандартами помещают в камеру для

хроматографирования, предварительно насыщенную в течение 30 мин. бензол -

ацетоном в соотношении 2:3. Край пластинки погружают в растворитель не

более чем на 0,5 см. После поднятия фронта растворителя на высоту 10 см,

пластинку вынимают из камеры и оставляют на воздухе до полного испарения

растворителей. Затем пластинку опрыскивают проявляющей смесью

0,05-процентного бромфенолового синего в ацетоне и 0,5-процентного

азотнокислого серебра. После того, как пластинка подсохнет, ее орошают

лимонной кислотой для закрепления окраски пятна. На темном фоне пластинки

проявляются синие пятна розалина с R = 0,56 +/- 0,05.

2.5.3. Альтернативные условия хроматографирования

Содержимое колбы после отгонки растворителя при определении розалина в

воде, почве и растительном материале растворяют в 0,2 мл хлороформа.

Пластинку делят по длине на три параллельные полосы. На первую и вторую

полосу наносят в виде сплошной линии раствор экстрактов. Стенки колбы

ополаскивают небольшими порциями хлороформа и наносят на те же полосы. На

третью полосу наносят стандартный раствор розалина, содержащий 10 мкг

препарата. Пластинку помещают в камеру, куда за 20 - 30 мин. до

хроматографирования наливают смесь растворителей: спирт - гексан в

соотношении 1:1. Как только фронт растворителя достигнет высоты 10 см,

пластинку вынимают из камеры и после удаления запаха растворителей первую и

вторую полосу закрывают стеклом и пластинку помещают в йодную камеру на 5 -

10 мин. Розалин обнаруживают на третьей полосе по темно-коричневому пятну

на желтом фоне R = 0,60 +/- 0,07. По проявленной зоне отмечают участки

силикагеля на первой и второй полосах и переносят зоны розалина в колбу

емкостью 100 мл. Элюируют 10 мл этилового спирта встряхиванием в течение 30

мин. Соответственно элюируют и зону чистого силикагеля и измеряют

оптическую плотность элюатов при 246 нм.

Количество розалина определяют по калибровочному графику или сравнением оптических плотностей стандартного и испытуемого растворов. Для построения калибровочного графика в мерных колбах готовят стандартные растворы 5-хлор-2-метил-бензимидазола с концентрацией 1, 2, 5, 10, 15, 20 мкг/мл. Измеряют оптические плотности растворов при 246 нм и строят калибровочный график Д = f(c), где c - концентрация розалина.

2.5.4. Обработка результатов анализа

Количественное определение розалина в анализируемой пробе проводится визуально по интенсивности окрашивания пятен на хроматограмме и по площади пятен стандартных растворов и проб.

Концентрацию розалина (Х) в воде, почве и растительном материале вычисляют по формуле:

А х S

Х = ------,

В х S

где:

Х - содержание препарата в пробе, мг/кг или мг/л;

А - количество препарата, найденное путем визуального сравнения

размера и интенсивности пятен пробы и стандартных растворов, мкг;

В - содержание препарата в стандартном растворе, мкг;

S - площадь пятна пробы, кв. мм;

S - площадь пятен стандартного раствора, кв. мм.

При спектрофотометрическом определении содержание розалина в пробе вычисляют по формуле:

А х В

Х = -----,

С х Р

где:

Х - содержание розалина в анализируемой пробе, мг/кг или мг/л;

А - количество розалина, найденное по калибровочному графику, мкг;

В - общий объем экстракта, мл;

С - объем раствора, нанесенный на хроматограмму, мл;

Р - масса анализируемой пробы, г.

3. Требования безопасности

Соблюдать общие правила по технике безопасности, необходимые при работе с химическими реактивами и пестицидами.

4. Разработчики

Методические рекомендации подготовлены сотрудниками УзНИИСТПз и Института химии растительных веществ АН УзССР.

Приложение

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ

РОЗАЛИНА В РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ, ВОДЕ И ПОЧВЕ

┌─────────────┬─────────────┬───────────────┬──────┬──────┬──────┬────────┐

│ Объект │Используемая │ Точность │ С │ S │ S │ДЕЛЬТА S│

│ │концентрация │определения в %│ │ │ 2 │ │

├─────────────┼─────────────┼───────────────┼──────┼──────┼──────┼────────┤

│Растительный │0,95 │95 │0,0475│0,0025│0,053 │0,0032 │

│материал │0,015 │96 │0,0144│0,011 │0,821 │0,0148 │

│ │0,24 │86 │0,206 │0,022 │0,1092│0,028 │

│Вода │0,15 │95,5 │0,143 │0,0046│0,032 │0,0058 │

│ │0,4 │92 │0,368 │0,0274│0,074 │0,348 │

│ │0,3 │88 │0,264 │0,029 │0,112 │0,037 │

│Почва │0,10 │92 │0,092 │0,0061│0,0665│0,0076 │

│ │0,24 │96 │0,228 │0,0093│0,041 │0,0117 │

│ │0,3 │88 │0,264 │0,0296│0,112 │0,0371 │

└─────────────┴─────────────┴───────────────┴──────┴──────┴──────┴────────┘