"Временные методические указания по определению паарлана методом газожидкостной хроматографии в почве, табаке и в табачном дыме" // Технорма.RU

Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

22 октября 1981 г. N 2458-81

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПААРЛАНА МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ

ХРОМАТОГРАФИИ В ПОЧВЕ, ТАБАКЕ И В ТАБАЧНОМ ДЫМЕ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Краткая характеристика пестицида

Паарлан (изопропалин, BSA, WSSA, EL 2 179) - NN-ди-(н-пропил)-2,6-динитро-4-изопропиланилин - маслянистая жидкость красно-оранжевого цвета является производным 2,6-динитроанилина.

Структурная формула:

│ 2

---

(CH ) CH_// \\_N[CH(CH )]

3 2 \ ___ / 3 2

---

│

Эмпирическая формула: C H O N . М.м. 309,37.

15 23 4 3

Температура кипения 128 °С при 1 мм рт. ст.

-5

Давление паров 1,45 х 10 мм рт. ст. при 30 °С.

При комнатной температуре хорошо растворим в большинстве органических растворителей (ацетоне, бензоле, спирте, хлороформе и др.). Растворимость в воде при 25 °С менее 0,5 мг/л.

По существующим в СССР методам оценки токсичности химических

препаратов паарлан относится к малотоксичным препаратам ЛД - 7500 мг/кг.

Препарат выпускается в виде концентрата эмульсии, содержащей 68,8% действующего вещества.

Как селективный почвенный гербицид рекомендован для борьбы с сорной растительностью на табаке и других растениях вида Solanecca.

2. Методика определения паарлана методом

газожидкостной хроматографии

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на газохроматографическом определении паарлана с детектором по захвату электронов на неподвижной фазе SE-30 после экстракции этиловым спиртом, жидкостного перераспределения в системе этиловый спирт - вода - гексан и очистки на колонке с силикагелем.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Минимально детектируемое количество паарлана - 0,3 нг.

Диапазон определяемых концентраций: почва - 0,04 - 1,3 мг/кг; зеленая масса - 0,07 - 2,3 мг/кг; высушенный табачный лист - 0,05 - 1,3 мг/кг; табачный дым - 0,05 - 1,3 мг/кг.

Предел обнаружения: в почве - 0,04 мг/кг; зеленом табаке - 0,07 мг/кг; в сухом табаке и табачном дыме - 0,05 мг/кг.

Результаты определения заданных количеств паарлана в почве, табаке и табачном дыме приведены в таблице 1.

Таблица 1

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПААРЛАНА В ПОЧВЕ, ТАБАКЕ

И В ТАБАЧНОМ ДЫМЕ МЕТОДОМ ГЖХ

┌───────────┬──────────┬─────────────┬───────┬────────────┬───────────┬───────────┬───────┬─────────────┐

│Исследуемый│ К-во │ К-во │Процент│ Число │Стандартное│ Относит. │Среднее│Доверительный│

│ материал │паарлана, │ паарлана, │опреде-│параллельных│отклонение,│стандартное│откло- │ интервал │

│ │внесенного│обнаруженного│ления, │определений │ S │отклонение,│нение, │ среднего │

│ │ в пробу, │ в пробе, │% │ (n) │ │ S , % │_ │при Р = 0,95,│

│ │ мг/кг │ мг/кг │ │ │ │ r │d │ n = 5 │

├───────────┼──────────┼─────────────┼───────┼────────────┼───────────┼───────────┼───────┼─────────────┤

│ 1 │ 2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7 │ 8 │ 9 │

│почва │0,08 │0,071 │89 │5 │0,0022 │3,1 │0,0016 │0,003 │

│почва │0,4 │0,37 │92,5 │5 │0,014 │3,78 │0,012 │0,02 │

│почва │1,3 │1,17 │90,3 │5 │0,02 │1,71 │0,016 │0,025 │

│зеленый │0,14 │0,098 │70 │5 │0,0022 │2,25 │0,0022 │0,003 │

│лист │ │ │ │ │ │ │ │ │

│зеленый │0,4 │0,286 │71,5 │5 │0,0014 │0,5 │0,0012 │0,002 │

│лист │ │ │ │ │ │ │ │ │

│зеленый │1,3 │0,92 │70,8 │5 │0,026 │2,83 │0,02 │0,033 │

│лист │ │ │ │ │ │ │ │ │

│сухой лист │0,1 │0,081 │81 │5 │0,00224 │2,76 │0,0016 │0,003 │

│сухой лист │0,4 │0,348 │87 │5 │0,0045 │1,29 │0,004 │0,006 │

│сухой лист │1,3 │1,125 │86,5 │5 │0,0062 │0,55 │0,0048 │0,008 │

│табачный │0,1 │0,086 │86 │5 │0,0029 │3,4 │0,0024 │0,004 │

│дым │ │ │ │ │ │ │ │ │

│табачный │0,4 │0,361 │90,2 │5 │0,0024 │0,6 │0,0018 │0,003 │

│дым │ │ │ │ │ │ │ │ │

│табачный │1,3 │1,170 │90,5 │5 │0,039 │3,3 │0,0033 │0,048 │

│дым │ │ │ │ │ │ │ │ │

└───────────┴──────────┴─────────────┴───────┴────────────┴───────────┴───────────┴───────┴─────────────┘

2.2. Реактивы и материалы

Этиловый спирт, осч, ТУ 1911-3969

н-Гексан, хч, МРТУ 6-09-2937-66

Натрий сернокислый безводный, хч, ГОСТ 4166-76

Натрий хлористый, хч, ГОСТ 4233-77

Силикагель Л 0,1/0,2 мм (ЧССР) с 20% H O

Стандартный раствор паарлана в гексане конц. 0,004 мг/мл

5-процентный водный раствор хлористого натрия.

2.3. Приборы и посуда

Микрошприц на 10 мкл, МШ-10

Ротационный вакуум-испаритель ИР-IМ, ТУ 25-11-917-74

Гомогенизатор

Курительная машина фирмы "Боргвальд" (ФРГ)

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-2451-78

Весы аналитические ВЛР-200, ТУ 25-06-1131-75

Колбы конические со шлифом на 250 мл, ГОСТ 10394-72, тип ПКШ

Колба Бунзена, ГОСТ 6514-75

Воронка Бюхнера, ГОСТ 9147-73

Хроматографические колонки диам. 20 мм с пористой стеклянной пластинкой

Цилиндры мерные на 50 и 100 мл, ГОСТ 1770-74

Воронки делительные на 500 мл, ГОСТ 8613-75

Колбы конические на 250 мл, ГОСТ 10394-72, тип II

Колбы круглодонные на 100 мл, ГОСТ 10394-72, тип КККШ

Воронки химические разные, ГОСТ 8613-75, тип 1а

Пипетки разные, ГОСТ 20292-74

Фильтры бумажные, ТУ 6-09-1678-77

Вата обезжиренная.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Установление линейного динамического диапазона

Готовят эталонный раствор паарлана в гексане, содержащий 0,03 мг паарлана в 1 мл раствора. В 10 колб емкостью по 100 мл вносят пипеткой 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10 мл эталонного раствора, доводят до метки гексаном, перемешивают. Полученные растворы с концентрацией 0,0003, 0,0006, 0,0009, 0,0012, 0,0015, 0,0018, 0,0024, 0,0027 и 0,003 мг/мл поочередно вводят в хроматограф по 5 мкл.

2.4.2. Приготовление силикагеля для колоночной хроматографии

Силикагель марки Л 0,1/0,2 мм (ЧССР) перед употреблением высушивают в течение 4 часов при температуре 140 °С и переносят в склянку с притертой пробкой. К остывшему силикагелю осторожно при перемешивании приливают небольшими порциями дистиллированную воду из расчета 20 мл на 80 г силикагеля, тщательно перемешивают встряхиванием до исчезновения комочков и оставляют на 24 часа для равномерного распределения воды. Проверяют активность каждой вновь приготовленной порции силикагеля.

2.4.3. Отбор, хранение и доставка проб

Отбор и хранение проб почвы и табака производят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб...", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР А.И. Заиченко за N 2051-79 от 21 августа 1979 г.

Для анализа табачного дыма используют сигареты, отобранные по весу, сопротивлению затяжке и кондиционированные по влажности.

Для кондиционирования по влажности сигареты без упаковки оставляют на 3 - 5 суток в эксикаторе при 22 +/- 2 °С над 38-процентной серной кислотой (весов. %), создающей относительную влажность воздуха 60,8%.

После предварительного кондиционирования определяют среднюю массу сигарет, а затем отбирают их по массе и сопротивлению затяжке.

Для определения среднего веса сигарет определяют общий вес 200 - 300 сигарет и вычисляют среднюю массу сигареты. Сигареты с явными дефектами (замасленные, рваные, со слабой и неравномерной плотностью набивки, с наличием осыпки табака и др.) отбрасывают.

При отборе сигарет взвешивают на аналитических весах каждую сигарету и отбирают только те, масса которых не отклоняется более чем на +/- 20 мг от средней массы сигареты.

В отобранных по массе сигаретах определяют сопротивление затяжке в 30 сигаретах и вычисляют среднее.

Измеряют сопротивление затяжке всех отобранных по массе сигарет и отбирают только те, которые по сопротивлению затяжке не отклоняются более чем на +/- 5 мм водяного столба от среднего сопротивления затяжке.

Стандартная длина окурка для сигарет без фильтра 7 мм. Метку на сигарете делают мягким графитовым карандашом.

До прокуривания на курительной машине сигареты, отобранные по весу и сопротивлению затяжке, хранят в эксикаторе при условиях, указанных выше.

Перед машинным курением сигарет определяют влажность табака.

Прокуривание сигарет проводят при стандартных условиях курения: объем затяжки 35 мл; продолжительность затяжки 2 сек.; пауза 58 сек.

Определяют общую массу 10 сигарет, вставляют их в гнезда курительной машины и проводят прокуривание при указанных выше условиях. Конденсат дыма 10 сигарет собирают в электростатическую ловушку (под воздействием высокого напряжения происходит электростатическое осаждение дыма в ловушке). По окончании прокуривания определяют массу окурков.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция и очистка экстракта

Почва.

Измельченный почвенный образец (20 - 50 г) помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, заливают 80 мл этилового спирта и экстрагируют встряхиванием 30 мин. Экстракт фильтруют в колбу Бунзена с воронкой Бюхнера под вакуумом. Остаток на фильтре промывают 20 мл спирта и переносят в делительную воронку. К экстракту добавляют 150 мл 5-процентного водного раствора поваренной соли и извлекают паарлан трехкратным встряхиванием с 20 мл гексана. Объединенные гексановые экстракты сушат безводным сульфатом натрия, упаривают до 2 - 5 мл и количественно переносят в градуированную пробирку на 5 - 10 мл. При необходимости упаренный гексановый экстракт очищают на колонке с силикагелем.

Табак.

Навеску образца зеленых листьев табака (50 г) гомогенизируют 5 мин. при 8000 об./мин. со 150 мл 80% этанола. Гомогенат фильтруют под вакуумом через воронку Бюхнера и остаток на фильтре промывают 30 мл 80% этанола. Спиртовой экстракт переносят в делительную воронку на 500 мл, приливают 100 мл 5-процентного водного раствора хлористого натрия и экстрагируют 3 х 20 мл гексана. Объединенные гексановые экстракты упаривают до 5 мл.

Готовят хроматографическую колонку с 12 г силикагеля, промывают ее 40 мл гексана и вносят упаренный табачный экстракт. Колбу промывают 3 х 5 мл гексана и каждый новый объем вносят в колонку после того, как мениск предыдущего объема раствора достигнет поверхности силикагеля. Паарлан элюируют гексаном. Скорость прохождения растворителя через колонку устанавливают 2 капли в секунду. Первые 100 мл гексана, прошедшие через колонку, отбрасывают, а последующие 150 мл собирают, упаривают до 1 - 2 мл, переносят гексаном в градуированную пробирку и аликвоты по 4 - 6 мкл вводят в хроматограф.

При анализе образцов высушенного табака извлечение паарлана проводится гомогенизированием 20 г табака с 80 мл этилового спирта. Дальнейшее определение проводится так же, как и в зеленом табаке.

Табачный дым.

Конденсат табачного дыма, собранный в электростатической ловушке, смывают 50 мл этанола в делительную воронку, добавляют 100 мл 5-процентного раствора хлорида натрия и экстрагируют 3 х 20 мл гексана в течение 2 мин. Объединенные гексановые экстракты обезвоживают сернокислым натрием, упаривают до 5 мл и очищают на колонке с силикагелем, как указано при анализе табака. Собранный элюат упаривают до 2 мл, переносят в градуированную пробирку на 5 - 10 мл и аликвоты по 4 - 6 мкл вводят в хроматограф.

2.5.2. Условия хроматографирования

Газовый хроматограф с детектором по захвату электронов.

Колонка хроматографическая стеклянная, размером 1800 х 3 мм.

Набивка - Хезасорб (0,25 - 0,30 мм) силанизированный ГМДС, покрытый метилсилоксаном SE-30 (5%).

Температурный режим колонки - 210 °С, детектора - 278 °С, испарителя - 250 °С.

Скорость газа-носителя (азот) - 65 мл/мин., продувочного (азот) - 120 мл/мин.

-10

Рабочая шкала электрометра 2,5 х 10 А. Напряжение ионизации 120 В.

Скорость протяжки ленты самописца - 1,5 см/мин.

Время удерживания паарлана при этих условиях - 8,5 мин. В испаритель вводят 6 мкл рабочего раствора в гексане.

2.6. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят путем сравнения высот пиков стандартного и исследуемого растворов.

Линейность детектирования соблюдается в пределах 0,3 - 10 нг.

Содержание остаточных количеств паарлана в анализируемой пробе вычисляют как среднее из трех параллельных определений.

Расчет производится по формуле:

а х H х V х V х 100

х ст о

Х = ------------------------,

H х V х G х (100 - W)

ст х

где:

Х - количество паарлана в анализируемой пробе (мг/кг);

а - концентрация стандартного раствора паарлана (мг/мл);

H - высота хроматографического пика исследуемого раствора (мм);

H - высота хроматографического пика стандартного раствора (мм);

ст

V - объем пробы, введенный в хроматограф (мкл);

V - объем стандартного раствора (мкл);

ст

V - общий объем исследуемого раствора (мл);

G - навеска образца (кг);

W - влажность анализируемой пробы (%).

При анализе табачного дыма G определяется как разность между массой сигарет до и после прокуривания и величина Х выражается в мг/кг сгоревшего абсолютно сухого табака.

2.7. Требования безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсическими веществами.

3. Методические указания разработаны

Всесоюзный научно-исследовательский институт табака и махорки им. А.И. Микояна (НПО "Табак").