Утверждены

Минздравом СССР

6 августа 1981 г. N 2423-81

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТРИФОРИНА В РАСТИТЕЛЬНОЙ ПРОДУКЦИИ

(ЯБЛОКИ, ОГУРЦЫ), ПОЧВЕ, ВОДЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ

ХРОМАТОГРАФИИ

    Краткая   характеристика   препарата.   Трифорин  -   N,N-бис-

(1-формиламино-2,2,2-трихлорэтил)пиперазин.         Брутто-формула

C  H  Cl N O .  Молекулярная  масса 434,96.  Торговое  название  -

 10 14  6 4 2

сапрол,  фунгинекс,  трифорин 20. Трифорин - белое кристаллическое

вещество  без  запаха.  Т.  пл.  156  -  158  °C  (с разложением).

Растворимость  при  комнатной  температуре  в  воде  27 - 29 мг/л.

Хорошо   растворяется   в   диметилформамиде,  диметилсульфоксиде,

тетрагидрофуране.  Растворяется  в  бензоле,  хлороформе. Давление

                -5

пара  2,67  x 10   Па  при  20  °C.  Летучесть  0,0047  мг/куб. м.

Выпускается    в   виде   эмульсионного   концентрата   трифорина.

Предназначен  для  борьбы  с  мучнистой  росой, паршой, ржавчиной,

монилиозами,  болезнями  листьев  злаковых,  плодовых,  овощных  и

декоративных культур. Можно применять на яблоне (парша и мучнистая

роса),   на  винограде  (сидиум  и  серная  гниль)  и  на  огурцах

(мучнистая  роса).  ДСД  0,002 мг/кг. МДУ 0,1 мг/кг (огурцы); 0,01

мг/кг (яблоки).

Принцип метода. Метод основан на экстракции пестицида из анализируемой пробы хлороформом, очистке экстракта колоночной и двумерной хроматографией и хроматографировании на пластинках "Силуфол" или в тонком слое силикагеля.

Метрологическая характеристика метода дана в таблице 159.

Таблица 159

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

┌──────────────┬──────────────┬──────────────┬─────────────┬──────────────┐

│Анализируемый │    Предел    │   Среднее    │ Стандартное │Доверительный,│

│    объект    │  определения │   значение   │отклонение, %│ интервал при │

│              │  трифорина,  │определения, %│             │   p = 0,05,  │

│              │мг/кг или мг/л│              │             │   n = 5, %   │

├──────────────┼──────────────┼──────────────┼─────────────┼──────────────┤

│Яблоки        │0,1           │86            │+/- 6,2      │+/- 6,6       │

│Огурцы        │0,025         │85            │+/- 6,7      │+/- 7,8       │

│Почва         │0,016         │91            │+/- 11,0     │+/- 12,9      │

│Вода          │0,004         │90            │+/- 5,5      │+/- 6,2       │

└──────────────┴──────────────┴──────────────┴─────────────┴──────────────┘

Предел обнаружения трифорина в растительной продукции, почве и воде показан в таблице 160.

Таблица 160

ПРЕДЕЛ ОБНАРУЖЕНИЯ ТРИФОРИНА В РАСТИТЕЛЬНОЙ ПРОДУКЦИИ,

ПОЧВЕ, ВОДЕ НА РАЗЛИЧНЫХ СОРБЕНТАХ

┌───────────────┬────────────────────────────┬────────────────────────────┐

│    Предел     │         "Силуфол"          │         Силикагель         │

│  обнаружения  ├────────────────────────────┼────────────────────────────┤

│  трифорина в  │     проявляющий реагент    │    проявляющий реагент     │

│ анализируемом ├──────┬────────┬────────────┼──────┬────────┬────────────┤

│  объеме, мкг  │AgNO  │дифенил-│фосфорно-   │AgNO  │дифенил-│фосфорно-   │

│               │    3 │амин    │молибденовая│    3 │амин    │молибденовая│

│               │      │        │кислота     │      │        │кислота     │

├───────────────┼──────┼────────┼────────────┼──────┼────────┼────────────┤

│Яблоки, огурцы │0,5   │2,0     │2,0         │1,0   │5,0     │-           │

│Почва          │0,4   │2,0     │2,0         │1,0   │4,0     │-           │

│Вода           │0,4   │3,0     │3,0 - 4,0   │1,0   │4,0     │5,0 - 6,0   │

└───────────────┴──────┴────────┴────────────┴──────┴────────┴────────────┘

Избирательность метода. Определению не мешают пестициды кельтан, хлорофос, оксихлорид меди, которые применяют для обработки тех же культур.

Реактивы и материалы. Нитрат серебра х.ч. Активированный уголь АГ-3. Аммиак 25-процентный. Ацетон ч.д.а. Хлороформ х.ч. Четыреххлористый углерод. Этилацетат. Бензол х.ч. Дифениламин 2-процентный раствор в ацетоне. н-Гексан х.ч. н-Гептан ч. Сульфат натрия безводный ч.д.а. Пластинки "Силуфол". Силикагель ЛС 5/40. Смеси растворителей: N 1 - четыреххлористый углерод и этилацетат (2:1); N 2 - бензол и этилацетат (6:1); N 3 - н-гексан и ацетон (10:7); N 4 - н-гептан и ацетон (1:2). Оксид алюминия II степени активности. Этиловый спирт-ректиф. Стандартный раствор трифорина (растворяют 0,025 г х.ч. препарата в 50 мл этилового спирта, концентрация раствора 5000 мкг/мл). Фильтры обеззоленные "синяя лента".

Проявляющие реагенты: N 1 - раствор нитрата серебра и аммиака в ацетоне; N 2 - 2-процентный раствор дифениламина в ацетоне; N 3 - 5-процентный раствор фосфорномолибденовой кислоты.

Приборы, аппаратура, посуда. Аспирационное устройство. Аппарат для встряхивания. Вакуумный водоструйный стеклянный насос. Водяная баня. Воронки химические. Камера для опрыскивания пластин. Камера для хроматографирования. Колбы: конические вместимостью 100, 150 мл; грушевидные для отгонки растворителя. Лампа ультрафиолетовая марки ОКН-11. Микропипетки для нанесения проб. Микрошприцы на 1, 10 мкл. Пластинки стеклянные размером 90 x 120 мм со слоем силикагеля. Поглотительные приборы с пористой пластинкой N 1. Пульверизатор стеклянный. Ротационный испаритель. Колонка стеклянная (длина 25 см, диаметр 1 см). Шкаф сушильный. Цилиндры мерные на 50, 100 мл. Эксикатор.

Приготовление пластинок. Стеклянные пластинки размером 90 x 120 мм тщательно моют раствором хромовой смеси, промывают проточной водой, затем дистиллированной и сушат. Взвешивают 14 г силикагеля и 1 г гипса, в фарфоровой ступке растирают с 40 мл дистиллированной воды. Наносят на пластинки одинаковые количества массы и оставляют сохнуть до следующего дня на воздухе. Хранят в эксикаторах над хлористым кальцием.

Ход анализа. Экстракция. Пробу измельченных яблок (40 г) заливают 40 мл хлороформа и встряхивают на аппарате 1 ч. Отфильтровывают пробу, промывают ее хлороформом. Растворитель упаривают досуха в ротационном испарителе. К сухому остатку прибавляют охлажденную смесь ацетона и воды (2:1) и выдерживают 30 мин. в холодильнике. Воски отфильтровывают через бумажный фильтр, который промывают охлажденной смесью ацетона и воды (2:1). Трифорин из водно-ацетонового раствора реэкстрагируют хлороформом. Растворитель упаривают до 3 - 4 мл.

Пробу измельченных огурцов (20 г) заливают 40 мл хлороформа и встряхивают на аппарате 1 ч. Отфильтровывают, промывают остаток на фильтре хлороформом. Объединяют экстракты и упаривают до объема 3 - 4 мл.

К 20 г анализируемой почвы прибавляют 50 мл хлороформа и встряхивают на аппарате 15 мин. Отфильтровывают, промывают почву хлороформом 2 раза по 20 мл. Упаривают растворитель до объема 3 - 4 мл.

К 100 мл анализируемой воды в делительной воронке прибавляют 50 мл хлороформа и встряхивают 5 мин. Экстракцию хлороформом повторяют. Хлороформенный слой 2 раза профильтровывают через воронку, заполненную 4 - 5 г безводного сульфата натрия. Фильтрат упаривают до объема 0,05 - 0,1 мл и хроматографируют.

Из фильтра "синяя лента" трифорин извлекают хлороформом 2 раза по 15 мл в течение 30 мин. при периодическом встряхивании, объединяют его с хлороформом из поглотителей, упаривают до объема 0,05 - 0,1 мл и хроматографируют.

Очистка экстрактов из яблок, огурцов, почвы. Колонку, заполненную оксидом алюминия (высота слоя 8 см) и активированным углем (высота слоя 5 см), промывают 30 мл хлороформа. На колонку переносят сконцентрированный экстракт и элюируют трифорин 75 мл хлороформа. Элюат отгоняют до объема 0,05 - 0,1 мл и хроматографируют.

Условия хроматографирования. Сконцентрированный экстракт с помощью капилляра количественно наносят на правую сторону пластинки для хроматографирования. Колбу промывают по 0,1 мл хлороформа и наносят на пластинку. На левой стороне пластинки наносят стандартные растворы. Повернув на 90°, пластинку правой стороной опускают в камеру для хроматографирования в подвижную фазу N 1 или 2. Хроматографирование в одной из этих фаз проводят дважды для дополнительной очистки экстрактов. После улетучивания растворителей пластинку поворачивают на 90° в направлении движения первой подвижной фазы, затем хроматографируют в смеси растворителей N 3 или 4.

Для экстрактов из воды двумерное хроматографирование не проводят и пластинки после нанесения исследуемого экстракта и стандартных растворов помещают в смесь растворителей N 3 или 4.

    Обнаружение  зон  локализации трифорина в тонком слое сорбента

может   быть   проведено   тремя   способами.   При  использовании

проявляющего реагента  N  1  с последующим  УФ-облучением трифорин

проявляется в виде черных пятен  на  белом  фоне;  реагента  N 2 с

последующим УФ-облучением  -  в  виде темных пятен; реагента N 3 с

последующим нагреванием при 80 - 90 °C и УФ-облучением в течение 5

мин. - в виде  желтых пятен на синем фоне.  Величина  R  трифорина

                                                       f

0,38 - 0,39 (подвижная фаза  н-гексан и ацетон в соотношении 10:7)

или 0,69 - 0,71 (подвижная фаза  н-гептан и ацетон  в  соотношении

1:2).

Обработка результатов анализа. Количественное определение проводят путем сравнения площади и интенсивности пятен рабочей пробы и серии стандартов. Пропорциональная зависимость между площадью пятна и концентрацией пестицида наблюдается в пределах от 0,5 до 10,0 мкг. При большем содержании трифорина в пробе на пластинку наносят аликвотную часть раствора.

Содержание пестицида в анализируемой пробе яблок, огурцов, почвы и воды (X, мг/кг или мг/л) вычисляют по формуле:

                               AS

                                 2

                           X = ---,

                               PS

                                 1

    где:

    A - количество стандартного раствора, мкг;

    S , S  - площади пятен соответственно стандартного раствора  и

     1   2

пробы, кв. мм;

    P - количество пробы, взятой для анализа, г или мл.