"Методические указания по определению ровраля в воде, почве, томатах, картофеле, винограде, виноградном соке и вине методом тонкослойной хроматографии" // Технорма.RU

Утверждены

Минздравом СССР

6 августа 1981 г. N 2422-81

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РОВРАЛЯ В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ТОМАТАХ,

КАРТОФЕЛЕ, ВИНОГРАДЕ, ВИНОГРАДНОМ СОКЕ И ВИНЕ МЕТОДОМ

ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

--------------------------------

<*> Разработаны Филиалом ВНИИГИНТОКС, Республиканской станцией защиты растений, г. Алма-Ата.

Краткая характеристика препарата. Ровраль -

1-изопропил-карбамоил-3-(3,5-дихлорфенил)-3-гидантион. Брутто - формула

C H O N C . Молекулярная масса 330,17. Общепринятое название - ипродион.

13 13 3 3 12

ДСД 0,3 мг/кг. В винограде МДУ 0,4 мг/кг, содержание остатков ровраля в

землянике, картофеле, огурцах, томатах не допускается. В воде ПДК 0,03

мг/л. Химически чистый препарат - белое кристаллическое вещество без

запаха, т. пл. 136 °С, растворим в этаноле, ацетонитриле, толуоле, бензоле,

ацетоне, метилене хлористом и практически нерастворим в воде. Упругость

-5

паров незначительна: при 20 °С - 2,7 х 10 Па. Ровраль - фунгицид,

применяемый в борьбе с серой гнилью на винограде и овощных культурах.

Принцип метода. Метод основан на извлечении препарата из анализируемых проб органическим растворителем ацетонитрилом или ацетоном, очистке экстрактов путем перераспределения между двумя несмешивающимися растворителями и последующем определении методом ТСХ. При необходимости экстракт дополнительно очищают на колонке с силикагелем.

Метрологическая характеристика метода. Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 131.

Таблица 131

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

┌─────────────────────────┬───────────────────────────────────────────────────────────────┐

│ Параметры │ Анализируемый объект │

│ ├────────┬────────┬────────┬────────┬────────┬─────────┬────────┤

│ │ Вода │ Почва │ Томаты │Карто- │Виноград│Виноград-│ Вино │

│ │ │ │ │фель │ │ный сок │ │

├─────────────────────────┼────────┼────────┼────────┼────────┼────────┼─────────┼────────┤

│Предел обнаружения, мкг │2,0 │2,5 │5,0 │2,5 │5,0 │5,0 │5,0 │

│Предел определения, │0,02 │0,05 │0,1 │0,05 │0,2 │0,1 │0,1 │

│мг/л или мг/кг │ │ │ │ │ │ │ │

│Среднее значение │93,5 │87,6 │83,0 │90,8 │84,0 │86,0 │76,0 │

│определения, % │ │ │ │ │ │ │ │

│Стандартное отклонение, %│+/- 4,52│+/- 3,29│+/- 5,70│+/- 3,62│+/- 5,50│+/- 5,90 │+/- 5,50│

│Доверительный интервал │+/- 5,61│+/- 4,08│+/- 7,07│+/- 4,49│+/- 6,80│+/- 7,30 │+/- 6,80│

│(n = 5, p = 0,95), % │ │ │ │ │ │ │ │

└─────────────────────────┴────────┴────────┴────────┴────────┴────────┴─────────┴────────┘

Избирательность метода. Определению ровраля не мешают препараты дерозал, бенлат, зупарен, применяемые, как и ровраль, при борьбе с серой гнилью.

Реактивы и материалы. Ацетонитрил, ч. Бензол, х.ч. н-Гексан, ч. Толуол,

ч.д.а. Сульфат натрия безводный, ч.д.а. Хлористый метилен,

свежеперегнанный. Ацетон, ч.д.а. Гептан, х.ч. Этиловый эфир (медицинский).

Едкий натр, х.ч., 1 М водный раствор. Едкое кали особой чистоты,

15-процентный. Этиловый спирт, х.ч. Хлороформ, х.ч. Хлороводородная

кислота, х.ч., 0,1 М и 5 М. Нитрит натрия, х.ч. Хлорид аммония 5-процентный

раствор в 0,1 М хлороводородной кислоте или аммоний сульфаниловокислый,

5-процентный раствор в 0,1 М хлороводородной кислоте. Этилацетат, х.ч.

Силикагель для хроматографии Л 100/160 мю. N-(1-нафтил)этилендиамин

дигидрохлорид, ч. 1-Нафтол, ч.д.а. Дифениламин, ч.д.а. Хлорид цинка, ч.д.а.

Пластинки хроматографические "Силуфол" УФ . Диазореактив: к 10 г нитрита

254

натрия приливают 20 мл концентрированной хлороводородной кислоты и доводят

объем жидкости до 50 мл дистиллированной водой (раствор используется

свежеприготовленным). Проявляющие реагенты: N 1 - 5 г N-(1-нафтил)

этилендиамина растворяют в 100 мл 1 М хлороводородной кислоты; N 2 -

1-процентный раствор 1-нафтола в этиловом спирте; N 3 - 2,8 г едкого кали

растворяют в 50 мл дистиллированной воды и добавляют 0,1 г 1-нафтола.

Раствор устойчив в течение 7 дней при хранении в холодильнике; N 4 - 0,5 г

дифениламина растворяют в 100 мл ацетона и добавляют 0,5 г хлористого

цинка. Раствор используется свежеприготовленным. Стандартный раствор

ровраля с содержанием 100 мкг д.в. препарата в 1 мл хлороформа, ацетона или

этилового спирта. Готовят из х.ч. или технического препарата с учетом

процентного содержания действующего вещества. Раствор устойчив в течение 10

- 15 дней.

Приборы, аппаратура и посуда. Прибор для отгонки растворителей. Камера для хроматографирования. Камера для опрыскивания хроматографических пластинок. Воронки: делительные на 0,5 и 1 л; химические; Бюхнера. Колбы: конические на 0,25 и 1 л; мерные на 100 и 1000 мл; стеклянные размером 300 х 15 мм для колоночной хроматографии, круглодонные со шлифом 29 на 250 мл; Бунзена. Пипетки на 1; 2 и 5 мл.

Микропипетки. Пульверизаторы стеклянные. Шкаф сушильный. Вентилятор или фен. Водоструйный насос. Стекловата.

Подготовка к определению хроматографической колонки. В стеклянную колонку (300 х 15 мм) помещают небольшой стекловатный тампон, затем селикагель на высоту 10 см. Перед употреблением колонку промывают 50 мл гексана.

Ход анализа. Экстракция и очистка. Пробу воды (100 мл) помещают в делительную воронку и трижды экстрагируют хлористым метиленом порциями по 50; 30 и 30 мл. Объединенный экстракт высушивают безводным сернокислым натрием и отгоняют растворитель на ротационном испарителе при температуре 60 - 70 °С. Остаток количественно переносят ацетоном на хроматографическую пластинку.

Пробу измельченного растительного материала (томаты, картофель) или почвы (50 г) экстрагируют трижды 75 мл ацетонитрила, экстракты фильтруют в делительную воронку и очищают гексаном 3 раза по 30 мл, гексановый экстракт промывают 30 мл ацетонитрила и сливают с начальным ацетонитрильным экстрактом, а гексановый экстракт отбрасывают. Объединенный ацетонитрильный экстракт упаривают на ротационном испарителе до 20 - 30 мл. К остатку ацетонитрила добавляют смесь воды с хлористым метиленом (80:50) и встряхивают 5 мин. Отделяют хлористый метилен и пропускают через безводный сернокислый натрий в круглодонную колбу, водный раствор экстрагируют метиленом хлористым еще дважды по 30 мл, пропускают через безводный сернокислый натрий и собирают в круглодонную колбу ротационного испарителя. Растворитель выпаривают досуха. Если экстракты очистились недостаточно, очистку проводят на хроматографической колонке.

Измельченные ягоды винограда (25 г) гомогенизируют с 150 мл ацетона 5 - 10 мин. Массу фильтруют на воронке Бюхнера, осадок промывают двумя порциями ацетона по 50 мл. Из объединенного фильтрата растворитель удаляют на ротационном испарителе при температуре не более 65 °С, а оставшуюся жидкость переносят количественно в делительную воронку и добавляют 50 мл бензола, встряхивают 3 - 5 мин. При образовании эмульсии добавляют 1 мл этилового спирта. Бензольный экстракт фильтруют в колбу через слой безводного сернокислого натрия и отгоняют до 0,5 - 1 мл. Следы растворителя удаляют током воздуха. Сухой остаток растворяют в ацетоне, переносят количественно на хроматографическую пластинку.

Сок или вино (50 мл) помещают в коническую колбу на 1 л и встряхивают с 250 мл ацетона 1 - 2 мин. Затем оставляют в покое на 10 мин. Из смеси растворитель удаляют на ротационном испарителе при температуре 65 °С. Дальше поступают, как описано для винограда.

Очистка на колонке. Пробу вносят в колонку с помощью 25 мл гексана (5 х 5 мл). Коэкстрактивные вещества вымывают из колонки 50 мл гексана, препарат элюируют 25 мл хлористого метилена, затем 5-процентным раствором этилацетата в хлористом метилене (100 мл). Элюат упаривают.

Хроматографирование. Хроматографирование проводят нисходящим способом. Хроматографические пластинки "Силуфол" сгибают от верхнего края на 2 см. Пробы с помощью ацетона и стандартные растворы наносят на пластинку на расстоянии 2 см от линии сгиба. Гнутый конец пластинки помещают в лодочку, в которую налит подвижный растворитель - смесь гептан - этиловый эфир (1:4) или смесь толуол - этанол (93:7). Лодочка помещена в камеру для хроматографирования. После окончания хроматографирования пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут на воздухе (под вытяжкой) для удаления следов растворителей.

Условия проявления хроматограмм (в зависимости от проявляющего реактива): А. Хроматограмму опрыскивают смесью 1 М раствора едкого натра и этилового спирта (50:50). Выдерживают пластинку в сушильном шкафу при 120 °С в течение 10 мин., затем опрыскивают последовательно 5 М хлороводородной кислотой, диазореактивом, 5-процентным раствором хлорида аммония и сульфаминокислого аммония в 0,1 М хлороводородной кислоте. После высушивания пластинок в токе воздуха хроматограмму обрабатывают проявляющим реагентом N 1 или N 2;

Б. Пластинки опрыскивают 15-процентным спиртовым раствором едкого кали и термостатируют при 150 °С в течение 20 мин., затем пластинки последовательно обрабатывают диазореактивом и проявляющим реагентом N 3 или N 4.

При наличии ровраля в пробе на хроматограммах проявляются

розово-фиолетовые пятна в случае применения проявляющего реагента N 1,

оранжевые пятна - в случае применения реагента N 2, 3 или малиновые - в

случае применения реагента N 4. Величина R пятен 0,35 (гептан - диэтиловый

эфир, 1:4) и 0,50 - 0,55 (толуол - этанол, 93:7).

Обработка результатов анализа. Количественная оценка хроматограмм проводится путем сравнения площадей пятен и их интенсивности, проб и стандартных растворов. Содержание препарата в исследуемой пробе (Х, мг/кг или мг/л) вычисляют по формуле:

Х = -,

где:

А - количество препарата в анализируемой пробе, мкг;

Р - количество или объем анализируемой пробы, г или мл.

Требования безопасности. При проведении исследований необходимо соблюдать правила предосторожности, требуемые при работе с ядовитыми, взрыво- и легковоспламеняющимися веществами.