Утверждены

Минздравом СССР

30 марта 1981 г. N 2368-81

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПЛИКТРАНА В РАСТЕНИЯХ И ПОЧВЕ МЕТОДОМ

ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

--------------------------------

<*> Разработаны В.Н. Кавецким, В.А. Лесовой (УкрНИИЗР).

Краткая характеристика препарата приведена в Методических указаниях N 2803-83. ДСД - 0,008 мг/кг. Содержание пликтрана в яблоках не допускается.

Принцип метода. Метод основан на экстракции пестицида из исследуемой пробы органическим растворителем (гексаном) с последующим хроматографированием в тонком слое сорбента, состоящего из смеси силикагеля КСК и оксида алюминия для хроматографирования (1:1), содержащей 10% гипса. Подвижной фазой при этом является система растворителей: четыреххлористый углерод-этиловый спирт (5:2) или гексан-этиловый спирт (5:3).

Пликтран на пластинке проявляют 0,001-процентным раствором дитизона в четыреххлористом углероде или хлороформе с последующей обработкой 0,02-процентным раствором хлороводородного анилина.

Метрологическая характеристика метода. Нижний предел обнаружения 1 мкг в анализируемой пробе, предел определения 0,01 мг/кг. Среднее значение определения из 5 параллельных определений 87%. Доверительный интервал (при p = 0,95) 87 +/- 6,8%.

Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. н-Гексан х.ч. Хлороформ х.ч. Оксид алюминия для хроматографии, нейтральный, II степени активности. Силикагель для хроматографирования. Товарный силикагель измельчают, просеивают через сито 100 меш. Хранят без доступа влаги. Гипс медицинский. Натрия сульфат безводный. Четыреххлористый углерод. Спирт этиловый ректификат. Дитизон. Стандартный раствор пликтрана (1 мг/мл) ацетоновый N 1. Хранить в темном месте в течение 1 мес. Стандартный раствор пликтрана (0,1 мг/мл) N 2 готовят разбавлением раствора N 1 ацетоном в 10 раз.

Проявляющие реагенты.

N 1. 0,01-процентный раствор дитизона в хлороформе (хранят в темном и прохладном месте в течение недели).

N 2. Из исходного раствора дитизона (N 1) готовят 0,01-процентный рабочий раствор (хранят в темном и прохладном месте не дольше двух дней).

N 3. 0,02-процентный водный раствор хлороводородного анилина.

Подвижный растворитель: смесь четыреххлористого углерода с этиловым спиртом (5:2) или гексан с этиловым спиртом (5:3).

Приборы и посуда. Аппарат для встряхивания. Баня водяная. Камера для хроматографирования (эксикатор). Камера для опрыскивания. Колбы конические и круглодонные. Капиллярные пипетки для нанесения проб. Ротационный испаритель. Мерные цилиндры на 10; 25 и 100 мл. Микропипетка на 0,1 мл с ценой деления 0,001 для нанесения стандартных растворов. Воронки химические. Фильтры бумажные. Пульверизаторы стеклянные. Стеклянные пластинки размером 9 х 12 см.

Подготовка к определению. Приготовление пластинок. Стеклянную пластинку тщательно моют содой, хромовой смесью и дистиллированной водой. Высушенную пластинку покрывают сорбционной массой (15 г силикагеля, 15 г оксида алюминия с 3 г гипса, прибавляют 50 мл дистиллированной воды и растирают смесь в течение 10 - 15 мин. до однородной массы), сушат на воздухе 30 мин., а затем 1 ч в сушильном шкафу при температуре 100 °C или 18 - 20 ч при комнатной температуре.

Ход анализа. Экстракция, очистка экстракта. Измельченные листья яблонь (20 г), 100 г почвы, 100 г измельченных яблок помещают в коническую колбу, заливают гексаном до полного покрытия пробы и экстрагируют 30 мин. на аппарате для встряхивания. Экстракты фильтруют через слой безводного сульфата натрия, пробу трижды промывают гексаном порциями по 20 мл и отгоняют на водяной бане до объема 0,1 - 0,5 мл.

Хроматографирование и проявление пластинок. Остаток экстракта наносят на пластинку с тонким слоем адсорбента в одну точку на расстоянии 1,5 см от нижнего края пластинки. Диаметр пятна при нанесении не должен превышать 1 см. На ту же пластинку наносят стандартный раствор пликтрана в диапазоне ожидаемых концентраций.

Пластинку с нанесенными стандартными растворами и пробой помещают в хроматографическую камеру под углом 60° к основанию. В качестве камеры используют эксикатор, на дне которого находится подвижная фаза - смесь четыреххлористого углерода с этиловым спиртом (5:2) или гексана с этиловым спиртом (5:3).

    Хроматографирование проводят при комнатной температуре до тех пор, пока

подвижная  фаза  не  поднимется  на высоту 10 см. Затем пластинку вынимают,

сушат до полного испарения растворителя и опрыскивают проявляющим реагентом

N  2 с последующей обработкой проявляющим реагентом N 3. При взаимодействии

раствора  дитизона  с трициклогексилом олова пятно пликтрана окрашивается в

желтый  цвет. В результате последующей обработки раствором хлороводородного

анилина  образуется  четко  выраженное желтое пятно на бледно-розовом фоне.

Величина  R   хроматографического  пятна препарата в рекомендуемых системах

           f

подвижных растворителей составляет соответственно 0,7 и 0,3.

Обработка результатов анализа. Количественное определение пликтрана проводят путем сравнения интенсивности окраски и площадей пятен проб и стандартных растворов. Содержание пликтрана (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

                                      A

                                  X = -,

                                      P

где:

A - количество препарата, найденное по площади хроматографических пятен, мкг;

P - масса исследуемой пробы, г.

Требования безопасности. При работе с пликтраном и его метаболитами следует беречь глаза, руки, а также соблюдать все правила безопасности, необходимые при работе с кислотами, ядовитыми и взрывоопасными веществами.