Утверждены

Минздравом СССР

30 марта 1981 г. N 2367-81

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДИКВАТА В СЕМЕНАХ ПОДСОЛНЕЧНИКА

МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

    Краткая  характеристика препарата. Действующее начало - дикват

(1,1'-этилен-2,2'-дипиридиний       дибромид).      Брутто-формула

C  H  Br N .  Молекулярная  масса  360,05.  В чистом виде дикват -

 12 12  2 2

белое   кристаллическое  вещество  с  т. пл. 335 - 340 °C.  Дикват

хорошо растворяется в воде, хуже - в спирте и  не  растворяется  в

не смешивающихся с  водой  органических  растворителях. В кислой и

нейтральной  средах  стабилен, под действием щелочей разлагается и

образует  окрашенный  продукт.  При  облучении  УФ-лучами препарат

полностью  разлагается  в  течение  192  ч. ДСД 0,008 мг/кг, МДУ в

семенах подсолнечника 0,05 <*> мг/кг.

--------------------------------

<*> Временный норматив.

Принцип метода. Метод основан на извлечении диквата из проб семян 1 н раствором серной кислоты, очистке экстракта на колонке с катионитом КУ-2 и хроматографировании в тонком слое силикагеля. Хроматографирование проводят дважды в различных подвижных фазах. Первой подвижной фазой служит этиловый спирт, второй - смесь муравьиной кислоты с водой в соотношении 10:1. При сильно загрязненных экстрактах хроматографирование в этиловом спирте проводят дважды.

Для обнаружения диквата пластинку вначале обрабатывают 3-процентным водным раствором сульфита натрия, а затем, после высушивания, - 0,1-процентным раствором бромтимолового синего.

Метрологическая характеристика метода. Диапазон определяемых концентраций 1 - 20 мкг. Предел определения 0,05 мг/кг. Среднее значение определения при n = 5 равно 82%. Доверительный интервал среднего при p = 0,95 равен +/- 8,6%.

Реактивы и растворы. Серная кислота х.ч., 1 н. Хлороводородная кислота 1 н и 4 н водные растворы. Азотная кислота 2 н раствор. Гидроксид натрия 10 н водный раствор. Динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты ч.д.а., 5-процентный раствор. Катионообменная смола КУ-2 в H-форме (фракция 0,25 - 0,5 мм). Сульфит натрия, 3-процентный водный раствор. Универсальная индикаторная бумага. Бромтимоловый синий, 0,1-процентный раствор в 50-процентном этаноле. Спирт этиловый ректиф., 96-процентный. Муравьиная кислота ч.д.а. 85-процентная. Стандартный 0,1-процентный спиртовой раствор диквата (0,1 г х.ч. 100-процентного препарата диквата растворяют в 100 г этилового спирта).

    Приборы   и  посуда.  Хроматографическая  колонка  (стеклянная

бюретка  на  25  мл  длиной  50  см,  диаметром 9 - 10 мм). Колбы:

круглодонная;  Бунзена; мерные. Электроплитка. pH-Метр. Стеклянный

обратный  холодильник  со шлифом. Воронка Бюхнера. Стаканы на 0,1;

0,5 л. Хроматографическая камера (эксикатор). Фарфоровые чашки для

выпаривания.  Стеклянные  пипетки  с  оттянутым  концом. Пластинки

"Силуфол" УФ   .

            254

Подготовка колонки. В хроматографическую колонку диаметром 1 см помещают комок стекловаты и заполняют катионитом КУ-2 в H-форме на высоту до 5 м. Колонку с катионитом промывают водой до нейтральной реакции. Катионит КУ-2 в H-форме готовят по известным методикам.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстракта. Пробу семян (50 г) помещают в круглодонную колбу, заливают 250 мл 1 н раствора серной кислоты, присоединяют к колбе обратный холодильник и кипятят на электроплитке 3 ч. Экстракт охлаждают и фильтруют через воронку Бюхнера. Остаток на фильтре промывают 3 порциями воды по 25 мл. Объем экстракта доводят дистиллированной водой до 250 мл. Аликвотную часть (50 мл) фильтрата переносят в стакан, приливают 12 - 15 мл 10 н гидроксида натрия и, добавляя гидроксид натрия по каплям, доводят pH до 8 - 9. Контроль за изменением pH растворов проводят при помощи pH-метра. Затем, в этот же стакан приливая 5-процентный раствор динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты, доводят pH фильтрата до 6 - 7.

    Нейтрализованный  фильтрат пропускают через хроматографическую

колонку со скоростью 8 - 10 мл/мин. Колонку промывают 25 - 30 мл 2

н   раствором  азотной кислоты со скоростью 4 - 5 мл/мин., а затем

дистиллированной  водой  до  нейтральной  реакции по универсальной

индикаторной   бумаге.  Элюируют  дикват  50  мл  4  н   раствором

хлороводородной  кислоты  со скоростью 1 - 2 мл/мин. Колонку можно

промывать  и  1 н  раствором хлороводородной кислоты, однако элюат

при упаривании более загрязнен. Элюат собирают в стакан, переносят

его  в  фарфоровую  чашку  и  выпаривают досуха на электроплитке с

закрытым  элементом  при  температуре  до 200 °C в вытяжном шкафу.

Остаток   растворяют   в  2  мл  этилового  спирта  и  наносят  на

хроматографическую  пластинку "Силуфол" УФ   . Диаметр нанесенного

                                          254

пятна  не более 0,5 см. Фарфоровую чашку трижды промывают этиловым

спиртом.

Хроматографирование. Для отделения диквата от примесей пластинку помещают в хроматографическую камеру с подвижной фазой - этиловым спиртом. При этом примеси поднимаются на пластинке с фронтом растворителя, в то время как дикват остается в точке нанесения. В случае если пластинка перегружена примесями, хроматографирование в камере с этиловым спиртом повторяют. Затем пластинку сушат и хроматографируют в камере с подвижной фазой муравьиная кислота - вода (10:1). После того как растворитель поднимается на 7 - 8 см, пластинку вынимают, сушат до полного удаления запаха муравьиной кислоты.

    Проявляют  пластинку,  обрабатывая  ее  3-процентным раствором

сульфита натрия. При наличии диквата  на хроматограммах появляются

пятна  желтого  цвета.  Далее  высушенную  пластинку   опрыскивают

0,1-процентным  раствором  бромтимолового  синего  в 50-процентном

этаноле.  Чувствительность  этой  реакции  0,1 мкг. Пятна при этом

окрашиваются в синий цвет. R  диквата 0,6.

                            f

Обработка результатов анализа. Количественное определение препарата проводят сравнением размеров площади пятен исследуемого вещества и стандартного раствора и по калибровочному графику зависимости площади пятен от логарифма концентрации. Количество диквата (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

                                 AV

                             X = ---,

                                 PV

                                   1

    где:

    A - количество диквата в пробе, мкг;

    P - масса исследуемой пробы, г;

    V - объем экстракта, мл;

    V  - объем аликвотной части анализируемого экстракта, мл.

     1

Требования безопасности. Соблюдаются требования безопасности, обычно рекомендуемые для работы с химическими реактивами.