Утверждены

Минздравом СССР

30 марта 1981 г. N 2366-81

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ФАДЕМОРФА В ВИШНЕ, ОГУРЦАХ, СМОРОДИНЕ,

ЯБЛОКАХ, ВОДЕ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ

    Краткая характеристика препарата. Фадеморф - N-(1-формиламино-

2,2,2-трихлорэтил)морфолин.       Брутто-формула      C H O N Cl .

                                                       7 6 2 2  3

Молекулярная  масса 214,5.  Общепринятое  название  - триморфамид.

Химически чистый  препарат  - белое кристаллическое вещество  с т.

пл.  116 - 117 °C.  Растворимость,  г/л:  вода  -  3  (при 10 °C);

толуол  -  100  (при  13 °C); этанол - 1200 (при 23 °C);  ацетон -

600 (при 15 °C).

ДСД 0,05 <*> мг/кг. МДУ 0,2 <*> (яблоки), 0,1 <*> (виноград), 0,2 <*> мг/кг (огурцы).

--------------------------------

<*> Временный норматив.

Принцип метода. Метод основан на извлечении триморфамида из анализируемой пробы органическим растворителем, очистке экстракта в системе жидкость - жидкость и последующем определении хроматографическими методами.

Метрологическая характеристика метода дана в таблице 161.

Таблица 161

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

┌────────────────┬─────────────────┬────────────────┬─────────────────────┐

│     Объект     │Среднее значение │ Относительное  │    Доверительный    │

│  исследования  │ определения, %  │  стандартное   │интервал среднего при│

│                │                 │ отклонение, %  │ p = 0,95, n = 3, %  │

├────────────────┼─────────────────┼────────────────┼─────────────────────┤

│Вода            │87               │+/- 2,3         │+/- 3,0              │

│Вишня           │74               │+/- 3,1         │+/- 4,7              │

│Яблоки          │72               │+/- 3,8         │+/- 5,1              │

└────────────────┴─────────────────┴────────────────┴─────────────────────┘

Примечание. Предел определения: для воды - 0,005 мг/л; растений - 0,02 мг/кг.

Реактивы и растворы. Для экстракции. Ацетон х.ч. Хлороформ ч. Хлороводородная кислота, 10-процентный раствор. Сульфат натрия безводный ч.

Для метода ТСХ. Силикагель для хроматографии КСК. Сульфат кальция ч.д.а. Марганцовокислый калий, 3-процентный раствор. Хлорирующий раствор - смесь равных объемов 2-процентного раствора марганцовокислого калия и 10-процентного раствора хлороводородной кислоты. Готовить под тягой. Проявляющий реагент: 0,1 г о-толидина растворяют в 0,5 мл уксусной кислоты; 0,4 г KI растворяют в 5 мл дистиллированной воды. Растворы объединяют и разбавляют водой до 100 мл.

Для ГЖХ. Неподвижная фаза 5% SE-30 на хроматоне N-AW или любая аналогичная неполярная фаза. Основной стандартный раствор триморфамида 200 мкг/мл в ацетоне. Хранят в холодильнике в течение 2 мес. Стандартные растворы триморфамида - 1 и 5 мкг/мл в ацетоне. Хранят в холодильнике в течение 2 недель.

Приборы и посуда. Ротационный вакуумный испаритель. Колбы конические на 250 мл. Воронки: химические; делительные. Пипетки. Цилиндр с делениями. Пластинки стеклянные размером 9 x 12 см. Микропипетки. Пульверизатор стеклянный. Камера для хроматографирования. Микрошприцы на 10 мкл. Хроматограф с ДЭЗ или ДПР. Колонка стеклянная, диаметр 3 мм, длина 1 м. Азот газообразный особой чистоты.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. Среднюю пробу овощей и фруктов 25 г (вишня, огурец, смородина и др.) размалывают и помещают в коническую колбу. Пробу заливают 50 мл смеси ацетон - вода (1:1), встряхивают в течение 30 мин. Экстракцию повторяют дважды. Фильтруют раствор в делительную воронку, прибавляют 100 мл дистиллированной воды, подкисляют водный раствор хлороводородной кислотой до pH 3 - 3,5 и из водного раствора реэкстрагируют фадеморф хлороформом дважды порциями по 30 мл. Органический растворитель (хлороформ) отделяют, сушат безводным сульфатом натрия, упаривают до объема 0,2 - 0,3 мл, досуха доупаривают на воздухе. Остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют (методы ГЖХ и ТСХ).

Пробу воды (200 мл) помещают в делительную воронку, подкисляют хлороводородной кислотой до pH 3 - 3,5 и экстрагируют фадеморф дважды хлороформом порциями по 20 мл. Экстракт объединяют, сушат безводным сульфатом натрия, упаривают до объема 0,2 - 0,3 мл досуха на воздухе. Остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют (методы ГЖХ и ТСХ).

    Метод  ГЖХ.  Носитель  -  хроматон   N-AW  (0,16  -  0,20  мм)

силанизированный.  Неподвижная  фаза  -  5%  SE-30 (основная). Для

дополнительной  идентификации  хроматографирование можно проводить

на  колонке  длиной  1  м с неподвижной фазой 15% карбовакса 20 М.

                                                           -12

Скорость  азота  70  мл/мин.  Шкала   электрометра  20 x 10     А.

Линейный  диапазон  детектирования  0,1  -  4 нг. Температура, °C:

колонки - 170; испарителя - 200; детектора - 200.

При указанных температурных условиях время удерживания фадеморфа составляет: на фазе SE-30 - 3,3 мин.; на фазе карбовакс 20 М - 6,1 мин. Вводимый объем 2 - 5 мин.

Обработка результатов анализа при ГЖХ. Количественное определение проводят путем сравнения рассчитываемого пика с пиком, полученным при введении известного количества стандартного раствора, при условии, что пики близки по величине и определение ведется в диапазоне линейности детектора.

Количественную оценку хроматограммы проводят по площади пика, рассчитывая ее как произведение высоты пика на ширину, измеренную на половине высоты.

Количество препарата в пробе (X, мг/кг или мг/л) определяют по формуле:

                              C  V S

                               ст 2

                          X = ------,

                              S  V P

                               ст 1

    где:

    C   -  количество  препарата  во   введенном   в   хроматограф

     ст

стандартном растворе, нг;

    S, S   - площади пиков  соответственно  стандартного  раствора

        ст

фадеморфа, введенного  в  хроматограф,  и  исследуемого  раствора,

кв. мм;

    V  - объем экстракта, введенный в хроматограф, мкл;

     1

    V  - общий объем экстракта после упаривания, мл;

     2

    P - масса или объем анализируемой пробы, г или мл.

Метод ТСХ. Пробу, сконцентрированную до 0,3 мл, с помощью микропипетки количественно переносят на хроматографическую пластинку, смывая колбу эфиром. На эту же пластинку наносят 3 и 6 мкг фадеморфа. Помещают пластинку в камеру, в которую за 30 мин. до хроматографирования налита смесь гексан - ацетон (1:1). После поднятия фронта растворителя на 10 см пластинку вынимают, дают испариться растворителю.

    Помещают  пластинку  в эксикатор на  3  -  5 мин.,  содержащий

хлорирующую  смесь,  затем  высушивают 10  - 15 мин. (для удаления

хлора)   при   комнатной   температуре.   После   высушивания   ее

обрабатывают   раствором   о-толидина.   Фадеморф  проявляется  на

хроматограмме  в виде ярко-синего пятна. Нижний предел обнаружения

1 мкг. Величина R  0,75 +/- 0,05.

                 f

    Содержание препарата в пробе (X, мг/кг или мл/л) определяют по

формуле:

                                  A

                              X = -,

                                  P

где:

A - количество препарата, найденное путем сравнения размера и интенсивности пятен пробы и стандартного раствора, мкг;

P - масса или объем анализируемой пробы, г или мл.

Требования безопасности. Необходимо соблюдать правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.