Утверждены

Минздравом СССР

30 марта 1981 г. N 2362-81

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПЛОНДРЕЛА В ПОЧВЕ, ВОДЕ, ОГУРЦАХ

И ЯБЛОКАХ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Краткая характеристика препарата приведена в Унифицированной методике. ДСД - 0,01 мг; МДУ в огурцах - 0,1 мг/кг, яблоках - 0,5 мг/кг.

Принцип метода. Метод основан на извлечении препарата из исследуемой пробы одним из органических растворителей, очистке и последующем хроматографировании на пластинках "Силуфол" или силикагелевых пластинках в системах гексан - ацетон (9:1), изооктан - ацетон (6,5:3,5), бензол - этилацетат (9,8:0,2). Плондрел проявляется смесью ацетонового раствора бромфенолового синего с водным раствором нитрата серебра (1:1).

Метрологическая характеристика метода. Диапазон определяемых концентраций - 0,5 - 20 мкг в пробе. Предел определения для воды - 0,025 мг/л; почвы - 0,2 мг/кг; яблок и огурцов - 0,1 мг/кг. Среднее значение определения стандартного количества пестицида в воде - 84%; в почве - 80; в огурцах - 74; в яблоках - 70%. Стандартное отклонение: вода - 2,7%, почва - 4,5, огурцы - 4,06, яблоки - 4,7%.

    Избирательность     метода.     Определению    могут    мешать

фосфорорганические пестициды, имеющие близкие значения R .

                                                        f

Реактивы и растворы. Ацетон ч.д.а. Ацетонитрил ч. н-Гексан ч. Бензол ч.д.а. Изооктан ч. Сульфат кальция ч.д.а. (в течение 1 - 2 сут. прокаливают при температуре 180 °C и просеивают через сито 100 меш). Кислота хлороводородная 0,1 М, х.ч. Кислота лимонная ч.д.а. Оксид алюминия для хроматографии II степени активности. Подвижные растворители: 1) гексан - ацетон (90:10); 2) бензол - этилацетат (98:2); 3) изооктан - ацетон (65:35).

Проявляющие реагенты: N 1 - 0,05-процентный ацетоновый раствор бромфенолового синего с 1-процентным водным раствором нитрата серебра; N 2 - 2-процентный водный раствор лимонной кислоты (можно 5-процентной уксусной) для осветления фона пластинки.

Натрия сульфат безводный ч. Спирт этиловый 96-процентный. Стандартный раствор плондрела в ацетоне (200 мкг/мл). Силикагель марки КСК. Уксусная кислота х.ч. Хлорид натрия ч.д.а. Хлороформ ч.д.а. Уголь активированный порошкообразный любой марки. Этилацетат х.ч.

Приборы и посуда. Аппарат для встряхивания проб АВУ-1. Баня водяная. Воронки химические. Воронки делительные на 150 или 250 мл. Испаритель ротационный вакуумный. Камера для хроматографирования (любой сосуд с притертой крышкой). Капиллярные пипетки для нанесения проб. Конические колбы на 150 - 200 мл. Колбы Эрленмейера на 500 мл. Колбы мерные на 100 мл. Микропипетки для нанесения стандартов. Пластинки стеклянные размером 9 x 12 см. Пластинки для хроматографии "Силуфол" размером 15 x 15 см. Пульверизаторы стеклянные. Сито капроновое (100 меш). Эксикатор.

Подготовка к определению. Получение чистого препарата. Насыщенный раствор плондрела в этиловом спирте помещают в теплую водяную баню (30 - 40 °C) до относительно полного растворения. Полученный раствор отфильтровывают, фильтрат упаривают и досушивают на часовом стекле. Поскольку после первой очистки получаются желтые кристаллы, следует таким же способом провести вторую очистку. Критерием степени чистоты препарата служит хроматографическая индивидуальность, при определении которой стандартные растворы, будучи нанесенными на пластинку в количестве 5 и 10 мкг, не содержат посторонних пятен после хроматографирования.

Приготовление пластинок. Взвешивают 30 г силикагеля, 5 г гипса (кальция сульфата) и тщательно растирают в ступке. Переносят в коническую колбу на 250 мл, добавляют 100 мл воды и на 15 - 20 мин. ставят на аппарат для встряхивания. Полученную сорбционную массу наносят на чистые пластинки. Этого количества хватает на 12 - 15 пластинок (9 x 12 см). Пластинки сушат в горизонтальном положении и затем активируют при 100 °C в течение 1 ч. До употребления пластинки хранят в эксикаторе над хлористым кальцием.

Ход анализа. Экстракция. Препарат из 200 мл воды экстрагируют хлороформом трижды порциями по 20 - 25 мл, встряхивая пробу каждый раз 15 - 20 мин. на аппарате для встряхивания. Экстракты объединяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия в колбу для отгонки растворителя, выпаривают до объема 0,1 - 0,3 мл и наносят на пластинку.

Воздушно-сухую почву (100 г), просеянную через сито с отверстиями 0,5 мм, помещают в колбу на 500 мл, заливают ацетоном до покрытия пробы и ставят на 2 ч на аппарат для встряхивания. Экстракт отфильтровывают через бумажный фильтр со слоем безводного сульфата натрия, а почву трижды промывают несколькими порциями (50 мл) растворителя. К объединенному экстракту на 3 - 5 мин. добавляют 5 - 10 г активированного угля, затем фильтруют через безводный сульфат натрия и фильтрат упаривают на ротационном испарителе. Остаток смывают ацетоном (трижды порциями 0,1 - 0,3 мл) и переносят на хроматографическую пластинку.

Измельченную растительную массу огурцов (50 г) помещают в ступку, заливают ацетоном и, слегка растирая, декантируют экстракт в коническую колбу. Эту манипуляцию повторяют 2 - 3 раза. К общему ацетоновому экстракту добавляют в равных объемах (10 - 20 мл) ацетонитрил и насыщенный раствор хлорида натрия. Сюда же добавляют хлороформ в таком же объеме, как названные растворители, и встряхивают на аппарате 40 - 60 мин. Отделенный хлороформ в делительной воронке промывают подкисленной водой (на 100 мл воды 4 - 5 капель уксусной кислоты) и высушивают через безводный сульфат натрия. Для обесцвечивания хлороформного экстракта добавляют оксид алюминия (на 100 мл растворителя 50 - 70 г оксида алюминия) и ставят на 1 ч на аппарат для встряхивания, можно оставить на ночь. Экстракт отфильтровывают и отгоняют досуха. Сухой остаток растворяют в охлажденном хлороформе (по 0,2 мл три раза) и наносят на пластинку.

Из 15 - 20 яблок вырезают треугольники, измельчают, берут 60 г и заливают хлороформом. Экстракцию проводят на аппарате для встряхивания в течение 1 ч. Экстракт отфильтровывают от мезги, пропускают через безводный сульфат натрия и концентрируют на ротационном испарителе. Сухой остаток растворяют в 15 мл этилового спирта на водяной бане при температуре 45° C в течение 45 мин. и при этой же температуре добавляют 75 мл 0,1 М хлороводородной кислоты. В результате осаждаются воски. Выпавший осадок восков отфильтровывают через бумажный фильтр. Фильтр промывают дважды порциями по 5 мл 0,1 М хлороводородной кислоты. Фильтрат переносят в делительную воронку, туда же приливают 30 мл хлороформа и встряхивают в течение 3 мин. Экстракцию повторяют трижды. Хлороформные слои объединяют, сушат безводным сульфатом натрия и концентрируют на ротационном испарителе. Сухой остаток растворяют в хлороформе (по 0,1 мл трижды) и наносят на хроматографическую пластинку.

    Хроматографирование.  Подготовленные  экстракты  количественно

наносят  на  хроматографические пластинки так, чтобы диаметр пятна

не  превышал 1 - 1,5 см. Колбочки с препаратом 2 - 3 раза обмывают

небольшими  порциями растворителей и также наносят на пятно. Рядом

наносят   стандартные  растворы,  содержащие  5;  10  или  20  мкг

препарата.  Пластинки  помещают  в  хроматографическую  камеру,  в

которую   залита  одна  из  рекомендуемых  смесей.  Время  подъема

растворителя  10  - 15 мин. Когда фронт растворителя поднимется на

10  см,  пластинку  вынимают  и  оставляют  на  несколько минут на

воздухе   для   испарения   подвижного   растворителя.   Пластинку

обрабатывают  проявляющим  реагентом.  Зоны  локализации препарата

обнаруживаются  в  виде синих пятен на серо-желтом фоне пластинки.

R   плондрела на пластинке  "Силуфол"  в смесях: гексан - ацетон -

 f

0,37, изооктан - ацетон - 0,48, бензол - этилацетат - 0,57.

    Незначительно   окрашенные   экстракты  не  мешают  проявлению

препарата (R  плондрела и пигментов не совпадают).

            f

Обработка результатов анализа. Количественное определение проводят путем визуального сравнения интенсивности окраски, размера пятен проб и стандартных растворов.

Содержание препарата в пробе (X, мг/кг, мг/л) рассчитывают по формуле:

                                  A

                              X = -,

                                  P

где:

A - количество препарата, найденное путем визуального сравнения со стандартным раствором, мкг;

P - навеска анализируемой пробы, г (мл).

Требования безопасности. Соблюдают правила безопасности, рекомендуемые при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.