Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

28 января 1980 г. N 2141-80

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПОЛИХЛОРИРОВАННЫХ БИФЕНИЛОВ В ПРИСУТСТВИИ

ХЛОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ В ПТИЦЕПРОДУКТАХ

МЕТОДОМ ГАЗОВОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Физико-химические свойства полихлорированных бифенилов изложены в сборнике "Методические указания по определению микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде", часть IX, с. 1 - 2.

2. Методика определения полихлорированных бифенилов в птицепродуктах газохроматографическим методом

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на экстракции полихлорированных бифенилов (ПХБ) и хлорорганических пестицидов (ХОП) из пробы органическими растворителями с последующей сернокислотной очисткой, щелочном дегидрохлорировании и количественном определении методом газожидкостной хроматографии на хроматографе с детектором по захвату электронов.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Пределы обнаружения ПХБ и ХОП при их совместном присутствии в желтках яиц - 0,600 и 0,005 - 0,060 мг/кг соответственно, в курином жире - 0,500 и 0,004 - 0,050 мг/кг соответственно.

Среднее значение определения стандартных количеств ПХБ из 5 параллельных определений: в яичном желтке - 77 +/- 8, в курином жире - 70 +/- 5.

2.2. Реактивы и растворы

Гексан, х.ч.

Петролейный эфир (температура кипения 40 - 70 °С).

Ацетон, х.ч.

Указанные растворители должны быть хроматографически чистыми. Для проверки чистоты реактивов необходимо проводить бланковые опыты.

Кислота серная, х.ч., уд. вес 1,84 (непосредственно перед употреблением экстрагированная гексаном).

Сернокислый натрий безводный, х.ч., экстрагированный гексаном и просушенный при температуре 150 °С в течение 5 ч.

Едкое кали плавленое (в таблетках), предварительно экстрагированное гексаном.

Этиловый спирт, 96,4-процентный.

Дистиллированная вода.

Стандартные растворы ПХБ в гексане: основной раствор, содержащий в 1 мл 1 мг ПХБ; рабочий раствор, содержащий в 1 мл 3 мкг ПХБ.

Стандартные растворы смеси ХОП в гексане: основной раствор, содержащий в 1 мл 100 мкг ДДТ, ДДЭ и ДДД и 20 мкг гамма-ГХЦГ; рабочий раствор, содержащий в 1 мл 0,1 мкг ДДТ, ДДЭ и ДДД и 0,02 мкг гамма-ГХЦГ.

Носитель - хроматон N-AW-ДМСS.

Неподвижная фаза - метилсиликон SE-30 (5%).

Вата обезжиренная, промытая эфиром и гексаном.

2.3. Приборы и посуда

Газовый хроматограф "Цвет-104" с детектором по захвату электронов.

Микрошприц с микрометром на 20 мкл.

Колонка стеклянная: длина 2 м, диаметр 3 мм.

Роторный испаритель.

Микроизмельчитель тканей рТ-2.

Бани водяные.

Аппарат для встряхивания жидкостей.

Градуированные пробирки на 10 мл.

Колбы конические плоскодонные с притертыми пробками на 10 и 250 мл.

Делительные воронки на 100 и 250 мл.

Колбы мерные на 50 и 100 мл.

Мерные цилиндры на 10 и 50 мл.

Колбы круглодонные на 150 и 500 мл.

Обратный водяной холодильник Либиха на шлифах.

Пипетки на 2 и 5 мл.

Воронки химические диаметром 3 и 10 см.

Стаканы химические на 150 мл.

2.4. Подготовка к определению

Жир средней пробы (200 - 250 г) вытапливают и отделяют от стромы. Среднюю пробу желтка яиц готовят из 10 штук яиц, смешивая на микроизмельчителе тканей до образования гомогенной массы.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Желтки яиц

От средней пробы берут 10 г желтка и помещают в коническую колбу на 250 мл. В колбу добавляют 100 мл ацетона и встряхивают в течение 1 ч на аппарате для встряхивания. Затем экстракт фильтруют в круглодонную колбу на 500 мл через воронку с обезжиренной ватой. Остаток в колбе промывают небольшими порциями ацетона (2 х 15 мл) и сливают через воронку в ту же колбу. Из объединенных экстрактов отгоняют ацетон в роторном испарителе при температуре бани 20 - 25 °С. Из оставшейся в колбе жидкой фазы ПХБ и ХОП экстрагируют двумя порциями гексана по 20 мл, встряхивая каждый раз колбу в течение 5 мин. и разделяя слои с помощью делительной воронки. Объединенный гексановый экстракт переносят в делительную воронку и прибавляют осторожно 20 мл серной кислоты, затем сернокислотный слой отбрасывают и в делительную воронку приливают новую порцию серной кислоты. Операцию очистки повторяют до тех пор, пока серная кислота не станет бесцветной, причем на последующих стадиях необходимо перемешивание в делительной воронке слоев гексанового экстракта и серной кислоты. Очищенный гексановый экстракт промывают дистиллированной водой до нейтральной реакции промывных вод и переносят в химический стакан для сушки безводным сульфатом натрия. Подсушенный экстракт переносят в круглодонную колбу, сульфат натрия промывают гексаном (2 х 10 мл) и смывы объединяют в круглодонной колбе. Гексан упаривают на роторном испарителе до 2 - 3 мл, количественно с помощью пипетки переносят в градуированную пробирку и доводят до метки 4 мл (экстракт N 1). Затем проводят обработку спиртовой щелочью. Для этого 2 мл экстракта N 1 помещают в коническую колбу емкостью 10 мл, снабженную обратным водяным холодильником, добавляют 0,4 - 0,5 г (четыре лепешки) едкого кали, 2 мл этилового спирта и смесь нагревают в течение 30 мин. с момента растворения едкого кали при температуре 55 - 58 °С и перемешивании на магнитной мешалке. После охлаждения смесь количественно переносят в делительную воронку и добавляют 4 мл воды для разделения слоев. Водно-спиртовой слой отбрасывают, а гексановый промывают 2 мл 1-процентной серной кислоты, водой до нейтральной реакции промывных вод, сушат, фильтруя в градуированную пробирку через воронку с 3 г предварительно смоченного гексаном сульфата натрия. После фильтрации сульфат натрия промывают 2 мл гексана и отжимают стеклянной пробкой. Гексановый экстракт упаривают до 2 мл (экстракт N 2).

2.5.2. Куриный жир

10 г топленого куриного жира растворяют в 40 мл гексана, помещают раствор в делительную воронку, проводят очистку концентрированной серной кислотой и все последующие стадии так, как описано выше для яичного желтка.

2.5.3. Хроматографирование

Аликвотные части экстрактов N 1 и N 2 последовательно вводят в хроматограф при идентичных условиях хроматографирования.

Рабочие параметры: температура колонки 180 °С, температура испарителя 250 °С, температура детектора 250 °С. Расход газа на колонку 75 - 80 мл/мин., расход газа на детектор 110 - 115 мл/мин.

    Для    проведения    количественного   анализа   необходимо   построить

                                                           0   0   0

калибровочные графики для смеси ПХБ (по сумме высот пиков Б , С , Д ) и для

каждого пестицида. Для этого в хроматограф инжектируется 0,25; 0,50; 1,00 и

т.д.  мкл  стандартных растворов ПХБ и ХОП. Затем строят график зависимости

величин  высот  пиков (для  ПХБ, гамма-ГХЦГ и ДДЭ) и величин площадей пиков

(для  ДДТ  и ДДД) от суммарного количества введенного в хроматограф ПХБ или

                                               2   2    2

каждого пестицида. Затем по сумме высот пиков Б , С  и Д  (рис. 1 - здесь и

далее  рисунки  не  приводятся)  с  помощью  калибровочного графика находят

соответствующее этой сумме количество ПХБ.

2.6. Обработка результатов анализа

Содержание ПХБ в анализируемом образце находят по формуле:

                                А х V

                                     2

                            Х = ------, мг/кг,

                                V  х g

                                 1

    где:

    А - количество вещества, найденного по графику, нг;

    V  - объем пробы, инжектируемой в хроматограф, мкл;

     1

    g - вес анализируемой пробы, г;

    V  - объем экстракта N 1, мл.

     2

По этой же формуле находят содержание ХОП. В состав смеси ПХБ не входят вещества, мешающие определению гамма-ГХЦГ. По хроматограмме экстракта N 1 находят высоту пика гамма-ГХЦГ, а затем по калибровочному графику - соответствующую величину А.

    Пики  ДДД  и  ДДТ  накладываются на пики ПХБ, при этом получаем широкие

                1    1                                                    1

суммарные пики Б  и Д . Для расчета содержания ДДТ (ДДД) из площади пика Д

  1                                         2   2

(Б )  (см.  рис.  1) вычитаем площадь пика Д  (Б ), по разности площадей по

графику находим величину А.

    Содержание   ДДЭ   находят   следующим   образом:  определяют  значение

                    0  0

соотношения  пиков А /С  на  хроматограмме  стандартного раствора ПХБ (рис.

2),  используя  это  значение,  находят  вклад  высоты  пика ПХБ в пик ДДЭ,

                                    0  0                 2

умножая величину соотношения пиков А /С  на высоту пика С  (см.  рис. 1)  и

                                             1

вычитая полученное значение из высоты пика  А ,  получаем  значение  высоты

пика  исходного  ДДЭ,  по  которому  на   калибровочном   графике   находят

соответствующее значение содержания ДДЭ (нг).

3. Требования безопасности

Необходимо соблюдать правила безопасности, принятые для работы с ЛВЖ и ядовитыми веществами.

4. Настоящие Методические указания разработаны Перетолчиным Н.В. и Фоминовой О.С. (ВНИИ птицеперерабатывающей промышленности НПО "Комплекс").