Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

28 января 1980 г. N 2133-80

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МЕТИЛНИТРОФОСА, ФЕНИТРООКСОНА

И П-НИТРОКРЕЗОЛА В ЗЕРНЕ И ПРОДУКТАХ ПЕРЕРАБОТКИ ЗЕРНА

МЕТОДОМ ХРОМАТОГРАФИИ В ТОНКОМ СЛОЕ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Краткая характеристика действующих веществ

Метилнитрофос - O,O-диметил-O-(3-метил-4-нитрофенил)-тиофосфат.

           S      --- CH

           ||   //   \\ 3                          C H  O NPS

    (CH O) P -O-\ ___ /NO                           9 12 5

       3  2       ---    2                         Относ. мол. масса 277,2.

Синонимы: метатион, сумитион, фенитротион, фолитион, польвадофос, вататион, динатион, новотион, препарат 56600, Байер 41813, агратион-20.

    Химически  чистый  продукт  -  светлая  жидкость  со  слабым неприятным

запахом.  Т      95  °С  при  0,1  мм рт. ст.; плотность 1,308; коэффициент

           кип.

                                                             -6

преломления  -  1,5505;  давление  паров  при  20 °С - 6 х 10   мм рт. ст.;

летучесть  -  0,82  мг/куб.  м  при  20  °С; 2,33 мг/куб. м при 30 °С; 6,11

мг/куб.   м  при  40  °С;  растворимость  в  воде  около  30  мг/л,  хорошо

растворяется в большинстве органических растворителей.

Препарат гидролизуется в щелочной среде (в 0,1 н NaOH при 30 °С период полураспада 12 мин.). При нагревании выше 100 °С изомеризуется и может разлагаться со взрывом. Хранить препарат необходимо в эмалированной или стеклянной таре, железо способствует разложению препарата. Выпускается в форме 30-процентного к.э. и 50-процентного к.э.

ПДК в воздухе рабочей зоны 0,1 мг/куб. м. ДОК в полевых культурах утверждены 0,1 мг/кг. В настоящее время рекомендованы ДОК в зерне 1 мг/кг, муке 0,3 мг/кг, хлебе 0,1 мг/кг.

Применяется в качестве контактного инсектицида и акарицида для борьбы с вредителями овощных, технических, плодовых культур, обработки незагруженных зернохранилищ, рекомендован для обработки зерна.

Фенитрооксон - O,O-диметил-O-(3-метил-4-нитрофенил)-фосфат - токсический метаболит метилнитрофоса.

                       CH

           O      --- /  3

           ||   //   \\                            C H  O NP

    (CH O) P -O-\ ___ /-NO                          9 12 6

       3  2       ---     2                        Относ. мол. масса 261,1.

В чистом виде - светлая жидкость со слабым неприятным запахом.

П-нитрокрезол - 3-метил-4-нитрофенол.

              CH

         --- /  3

       //   \\                                              C H NO

    HO-\ ___ /-NO                                            7 7  3

         ---     2                                          Мол. масса 153.

    В чистом виде - кристаллическое вещество светло-желтого цвета, Т    129

                                                                    пл.

°С. Трудно растворим в воде, хорошо - в эфире, этаноле.

2. Методика определения метилнитрофоса и его метаболитов

(фенитрооксона, п-нитрокрезола) в зерне, муке, хлебе,

отрубях методом хроматографии в тонком слое

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

    Метод   основан  на  извлечении  метилнитрофоса  и  его  метаболитов  -

фенитрооксона  и  п-нитрокрезола  из  зерна,  муки,  хлеба,  отрубей смесью

органических растворителей (н-гексан  -  диэтиловый  эфир  7:3),  спиртовой

очистке  с  вымораживанием  и определении их методом хроматографии в тонком

слое   с   проявлением   по   нитрогруппе.   Чувствительность   определения

метилнитрофоса  и  фенитрооксона  2 мкг (0,1 мг/кг), п-нитрокрезола 0,1 мкг

(0,005 мг/кг). Величина R  метилнитрофоса, фенитрооксона, п-нитрокрезола  -

                         f

0,43  +/-  0,02;  0,24  +/- 0,03; 0,15 +/- 0,02 соответственно. Определению

метилнитрофоса  мешает  присутствие метафоса (R  = 0,42). Для идентификации

                                               f

этих соединений используется метод ГЖХ.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода:

Диапазон определяемых концентраций 2 - 50 мкг метилнитрофоса, фенитрооксона, 0,1 - 20 мкг п-нитрокрезола в анализируемой пробе.

Предел обнаружения метилнитрофоса и фенитрооксона 2 мкг (0,1 мг/кг), п-нитрокрезола 0,1 мкг (0,005 мг/кг).

Размах варьирования для метилнитрофоса 65 - 90% в пределах концентрации 0,2 - 1 мг/кг (для хлеба 50 - 75% при концентрации 0,1 мг/кг); фенитрооксона - 69 - 85% в пределах концентраций 0,2 - 1 мг/кг; п-нитрокрезола - 79 - 87% в пределах концентраций 0,05 - 0,5 мг/кг.

Среднее значение определения стандартных количеств метилнитрофоса 72% (в хлебе 61%), фенитрооксона 75%, п-нитрокрезола 83%.

Стандартное отклонение для метилнитрофоса 9,6; фенитрооксона - 8,2; п-нитрокрезола - 6,8.

Относительное стандартное отклонение для метилнитрофоса 0,13; фенитрооксона - 0,11; п-нитрокрезола - 0,08.

Доверительный интервал среднего при р = 0,95 и n = 5 для метилнитрофоса 72 +/- 11,4%; фенитрооксона 75 +/- 9,9%; п-нитрокрезола 83 +/- 8,2%.

    2.1.3. Определению метилнитрофоса может мешать метафос, имеющий близкое

значение  R   =  0,40  +/- 0,02. Для идентификации в этом случае может быть

           f

рекомендован метод ГЖХ.

2.2. Реактивы и материалы

н-гексан, х.ч.

Диэтиловый эфир медицинский.

Ацетон, х.ч.

Этиловый спирт ректификат.

Натрий сернокислый безводный, х.ч.

Фильтры бумажные (красная лента).

Силикагель КСК, раздробленный и просеянный через сито 100 меш.

    Кальций сернокислый (CaSO  х 2H O), прокаленный 6 часов при 160 °С.

                             4     2

Цинковая пыль.

П-диметиламинобензальдегид, х.ч.

Уксусная кислота ледяная.

Проявляющий реактив: 0,25-процентный раствор п-диметиламинобензальдегида в этаноле. Хранят в темной склянке. Раствор перед обработкой пластинок смешивают в соотношении 10:1 с ледяной уксусной кислотой.

Стандартный раствор: готовят основные стандартные растворы а) метилнитрофоса 500 мкг/мл (50 мг МНФ растворяют в ацетоне в мерной колбе емкостью 100 мл); б) фенитрооксона 500 мкг/мл (50 мг - в ацетоне в 100 мл мерной колбе); в) п-нитрокрезола 100 мкг/мл (10 мг - в ацетоне в 100 мл мерной колбе). Из основных стандартных растворов готовят рабочий раствор, содержащий по 100 мкг/мл метилнитрофоса и фенитрооксона и 10 мкг/мл п-нитрокрезола (20 мл раствора "а" + 20 мл раствора "б" + 10 мл раствора "в" вносят в мерную колбу емкостью 100 мл и доводят до метки ацетоном).

2.3. Приборы, посуда, аппаратура

2.3.1. Для экстракции

Колбы конические плоскодонные с пробками емкостью 250, 100 мл.

Воронки фильтровальные диаметром 5 см.

Ротационный испаритель с набором колб емкостью 50 и 100 мл.

Колбы мерные емкостью 100 мл.

Пробирки мерные на шлифах емкостью 5 мл.

2.3.2. Для аналитического определения

Пластинки стеклянные размером 9 х 12 см.

Камера для хроматографирования.

Пульверизатор стеклянный.

Камера для опрыскивания.

Компрессор или баллон с азотом или сжатым воздухом для равномерного мелкодисперсного опрыскивания пластинок.

Пипетки на 1 мл, 5 мл, 10 мл, 20 мл.

Микропипетки для нанесения стандартных растворов на 0,1 - 0,2 мл.

Капилляры для нанесения проб.

Термостат СШ-35.

2.4. Подготовка к определению

Для приготовления 5 пластинок берут 14 г силикагеля, 1,5 г сернокислого кальция, подготовленного как описано выше, 1 г цинковой пыли и 40 мл воды. Силикагель с гипсом смешивают в фарфоровой ступке, прибавляют цинковую пыль и воду и хорошо размешивают до образования однородной массы. 10 г суспензии наносят на пластинку и равномерно распределяют по поверхности. Сушат пластинки строго в горизонтальном положении в течение 13 - 20 часов при комнатной температуре, хранят в эксикаторе.

2.5. Описание определения метилнитрофоса, фенитрооксона и п-нитрокрезола в зерне, муке, отрубях, хлебе

2.5.1. Экстракция

Для проведения исследований отбирается средняя проба зерна муки, хлеба, отрубей весом 1 кг. Из каждой пробы (хлеб измельчают) для анализа методом квартования отбирается три навески по 20 г (зерно по 50 г).

Пробу заливают 50 мл смеси н-гексан - диэтиловый эфир 7:3 и оставляют на час, периодически встряхивая. Сливают растворитель через фильтр, пробу заливают новой порцией экстрагента и экстрагируют еще час. Объединяют обе порции экстракта, сушат безводным сернокислым натрием в течение 15 мин. и переносят в прибор для отгонки растворителей. Упаривают растворитель до объема ~ 1 мл под вакуумом на ротационном испарителе при температуре бани не более 45 °С, т.к. летучесть метилнитрофоса резко увеличивается с повышением температуры. Остатку растворителя дают испариться на воздухе при комнатной температуре. Сухой остаток растворяют в 5 мл этанола и вымораживают при 0 °С в течение 30 мин. Выпавшие хлопья отфильтровывают через бумажный фильтр, раствор переносят в пробирку со шлифом емкостью 5 мл, упаривают под вакуумом на ротационном испарителе до ~ 0,3 мл и проводят определение методом хроматографии в тонком слое.

2.5.2. Хроматография в тонком слое

    Остаток  из  пробирки  количественно  переносят  на  хроматографическую

пластинку,  ополаскивая колбу эфиром. На эту же пластинку наносят три пятна

рабочего  стандартного  раствора  в пределах 0,04 - 0,2 мл, т.е. 4 - 20 мкг

МНФ  и  фенитрооксона  и  0,4  - 2 мкг п-нитрокрезола. Помещают пластинку в

камеру, в которую за 30 мин. до хроматографирования налита смесь н-гексан -

ацетон  4:1.  После  того  как  фронт  растворителя  поднимется  на  10 см,

пластинку  вынимают  из  камеры, дают растворителю испариться и опрыскивают

пластинку  проявляющим реактивом. Термостатируют пластинку при 100 - 120 °С

в   течение   5  -  7  мин.  Метилнитрофос,  фенитрооксон  и  п-нитрокрезол

проявляются  в  виде  желтых  пятен  на  белом  фоне  с R  0,43; 0,24; 0,15

                                                         f

соответственно. Чувствительность определения метилнитрофоса и фенитрооксона

2 мкг, п-нитрокрезола 0,1 мкг.

Количественное определение проводят путем сравнения окраски и измерения площади пятна пробы с окраской и площадью стандартов. Площадь пятен измеряемся с помощью промасленной миллиметровой бумаги. Прямо пропорциональная зависимость площади пятна от концентрации соединений соблюдается до 20 мкг. При большем содержании пестицидов берут аликвотную часть пробы.

2.6. Обработка результатов

Содержание каждого вещества в пробе рассчитывают по формуле:

                                    а х S

                                         2

                                Х = ------,

                                    S  х р

                                     1

    где:

    а - содержание препарата в стандарте, мкг;

    S  - площадь пятна стандарта, кв. мм;

     1

    S  - площадь пятна пробы, кв. мм;

     2

    р - масса пробы, взятая для анализа.

2.7. Настоящие Методические указания разработаны М.В. Письменной, ВНИИ гигиены и токсикологии пестицидов, полимерных и пластических масс, г. Киев.

3. Требования безопасности

Соблюдаются требования безопасности, обычно рекомендуемые для работы с химическими реактивами.

4. Литература

Н.Н. Мельников Химия и технология пестицидов. Изд. "Химия", М., 1974, с. 518.

М.А. Клисенко, Т.А. Лебедева, З.Ф. Юркова Химический анализ микроколичеств ядохимикатов. Изд. "Медицина", М., 1972, с. 67.