Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

28 января 1980 г. N 2127-80

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТЕРБАЦИЛА В ЭФИРНЫХ МАСЛАХ И ЭФИРОМАСЛИЧНОМ

СЫРЬЕ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Характеристика анализируемого гербицида

Химическое название: 5-хлор-3-трет-бутил-6-метил урацил.

Структурная формула:

              O

              ││

              C

             / \

    (CH ) C-N   C-Cl

       3 3  │  ││

            C   C-CH

           //\ /    3

          O   NH

    Эмпирическая формула: C H  O N Cl                    Мол. масса 216,67.

                           9 13 2 2

    Физико-химические  свойства: белый кристаллический порошок, без цвета и

запаха,  температура плавления 184 °С, растворимость в воде - 7 мг/л при 25

°С,   хорошо   растворим   в   диметилсульфоксиде,  ацетонитриле,  ксилоле,

циклогексаноне, хлороформе, этилацетате.  Малолетуч,  давление  насыщенного

                           -7

пара при 29,5 °С - 4,8 х 10   мм рт. ст. Способен к таутомерии, со щелочами

образует соли, производные энольной формы. ЛД   - 5 - 7,5 г/кг живого веса.

                                             50

Смачивающий порошок тербацила с содержанием 80% д.в. под торговым названием синбар (фирма Дюпон и Немур, США) применяется для борьбы с сорняками на плантациях мяты перечной до появления всходов и по вегетирующим растениям.

2. Методика определения тербацила в эфирных маслах

и эфиромасличном сырье методом газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на извлечении тербацила из гексанового раствора эфирного масла 1% NaOH, а из растительного сырья - хлороформом или ацетоном, очистке перераспределением между ацетонитрилом и гексаном или между гексаном и 1% NaOH, дополнительной очистке на колонке с окисью алюминия. Идентификация и количественная оценка проводится на газовом хроматографе с детектором постоянной скорости рекомбинации.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Предел обнаружения - 1 нг.

Предел обнаружения в эфирном масле - 0,1 мг/кг, в эфиромасличном сырье 0,05 мг/кг.

Процент определения тербацила в мятном масле - 74,2%.

Стандартное отклонение при n = 9 - 2,5%.

Процент определения тербацила в эфиромасличном сырье:

вариант "а" - 85,2%

вариант "б" - 77,4%.

Стандартное отклонение при n = 9

вариант "а" - 1,5%

вариант "б" - 2,4%.

2.1.3. Избирательность метода

Прочие рекомендованные на мяте перечной пестициды: хлорофос, прометрин и трефлан определению не мешают.

2.2. Реактивы и растворы

Стандартный раствор тербацила в этилацетате - 1 - 10 мкг/мл, хранить на холоде не более 30 дней.

Ацетон, х.ч.

н-Гексан, х.ч.

Хлороформ, х.ч.

Этилацетат, х.ч.

1-процентный водный раствор едкого натра.

Кислота соляная конц., х.ч.

Сульфат натрия безводный, х.ч.

Газ-носитель, азот особой чистоты.

Вата гигроскопическая.

Окись алюминия: прокалить окись алюминия (0,1 - 0,2 мм) при 130 °С в течение 5 часов, смочить 5 мл 0,1 н соляной кислоты стенки колбы емкостью 1000 мл и добавить в колбу 100 г прокаленной окиси алюминия, встряхивать 30 - 40 мин.

Кислота соляная 0,1 н.

5% силикона SE-30, нанесенного на Хроматон N-AW, силанизированного ДМСS (0,16 - 0,20 мм).

5% Stap, нанесенного на Хроматон N-AW, силанизированного ДМСS (0,16 - 0,20 мм).

2.3. Приборы, аппаратура и посуда

Газовый хроматограф "Цвет-106" с детектором постоянной скорости рекомбинации.

Ротационный вакуумный испаритель PVO-64, ИР-1М или эквивалентный.

Встряхиватель АВУ-1 или эквивалентный.

Микрошприц МШ-10.

Колонка хроматографическая: стеклянную колонку 300 х 20 мм промывают последовательно содой, хромовой смесью, дистиллированной водой и высушивают. Нижний конец колонки закрывают тампоном из гигроскопической ваты, обезжиренной гексаном. Колонка заполняется приготовленной окисью алюминия при непрерывном постукивании по стенке резиновой трубкой. Высота слоя окиси алюминия - 50 мм, над окисью алюминия помещают слой безводного сульфата натрия - 20 мм.

Используется стандартная химическая посуда из стекла (колбы Бунзена и Эрленмейера, воронки Бюхнера, химические и делительные, пипетки и др.), выпускаемая отечественной промышленностью.

2.4. Подготовка к определению

Органические растворители перед началом работы необходимо очистить и перегнать, сульфат натрия прокалить при температуре 300 - 400° и употреблять нагретым до 45 °С (хранить при этой температуре в термошкафу). Хроматографическая колонка и детектор кондиционируются в режимных условиях в течение 1 - 2 часов.

2.5. Ход анализа

2.5.1. Отбор образцов

Отбор проб на анализ производится в соответствии с "Правилами отбора проб на анализ пестицидов". Отбирают 50 г свежесобранной зеленой массы и 10 г эфирного масла (мятного, лавандового, шалфейного).

2.5.2. Проведение определения

2.5.2.1. Эфирные масла

Навеску эфирного масла растворяют в 50 мл н-гексана. Гексановый раствор переносят на делительную воронку емкостью 250 мл, прибавляют 50 мл 1-процентного едкого натра и встряхивают две минуты, отделяют нижний слой. Операцию повторяют еще два раза. Щелочные экстракты объединяют, подкисляют 1,5 - 2 мл конц. соляной кислоты до рН = 3 - 4, переносят в делительную воронку емкостью 250 мл и экстрагируют тербацил этилацетатом - 3 х 30 мл, экстракты объединяют, пропускают через безводный сульфат натрия и упаривают до 5 мл на ротационном испарителе при температуре бани не выше 55 °С. Остаток в колбе переносят на колонку с окисью алюминия, промытую этилацетатом. После того как остаток полностью впитывается в слой адсорбента, колбу снова смывают 5 мл этилацетата и переносят на колонку. Операцию повторяют 3 - 5 раз. Тербацил элюируют 60 мл этилацетата. Элюат упаривают на ротационном испарителе при температуре бани 55 °С досуха. Колбу смывают 1 мл этилацетата и 2 - 5 мкл вводят в испаритель хроматографа.

2.5.2.2. Эфиромасличные растения

Вариант "а". Навеску измельчают в гомогенизаторе со 150 мл хлороформа (6000 - 8000 об./мин.), встряхивают в течение 30 - 40 мин. и фильтруют под вакуумом. Стакан гомогенизатора промывают хлороформом и присоединяют смыв к основному фильтрату. Прибавляют в фильтрат 10 мл воды и упаривают хлороформ на ротационном испарителе. Остаток (около 5 мл) количественно - 50 мл ацетонитрила, переносят в делительную воронку, прибавляют 25 мл н-гексана и встряхивают 1 мин. Отбрасывают гексановую фазу, операцию проделывают еще два раза. Ацетонитрил количественно переносят в отгонную колбу емкостью 100 мл и упаривают досуха. Остаток растворяют в 50 мл 0,1 н едкого натра и количественно переносят в делительную воронку емкостью 250 мл, прибавляют 50 мл этилацетата и встряхивают 2 мин., органический слой отделяют и пропускают через воронку с нагретым до 45 °С безводным сульфатом натрия. Операцию повторяют три раза. Экстракты объединяют и упаривают до 5 мл на ротационном испарителе. Остаток переносят на предварительно подготовленную колонку с окисью алюминия. Дальнейший ход анализа аналогичен вышеописанному для масел.

Вариант "б". Навеску свежего сырья крупно измельчают и гомогенизируют со 150 мл ацетона, встряхивают в течение 30 - 40 мин. и оставляют на ночь. Затем содержимое колбы фильтруют под вакуумом, колбу промывают 30 мл ацетона и присоединяют смыв к основному фильтрату, ацетоновый экстракт количественно переносят в отгонную колбу емкостью 250 мл и упаривают ацетон на ротационном испарителе. Остаток в колбе растворяют в 50 мл н-гексана, количественно переносят на делительную воронку емкостью 250 мл, прибавляют 50 мл 1-процентного едкого натра и встряхивают в течение двух минут, отделяют щелочной слой, операцию повторяют еще два раза. Щелочные экстракты объединяют, отфильтровывают. Фильтрат количественно переносят на делительную воронку емкостью 250 мл, подкисляют 1,5 - 2 мл конц. соляной кислоты до рН = 3 - 4, прибавляют 30 мл этилацетата и встряхивают в течение одной минуты. Отделяют органический слой, операцию повторяют три раза. Экстракты объединяют, пропускают через безводный сульфат натрия и переносят в отгонную колбу емкостью 250 мл, упаривают до 5 мл и переносят остаток на предварительно подготовленную колонку с окисью алюминия. Дальнейший ход анализа аналогичен вышеописанному для масел.

2.5.2.3. Условия хроматографического разделения

┌────────────────────────────────────────┬───────────┬───────────┐

│                                        │ 5% SE-30  │  5% Stap  │

├────────────────────────────────────────┼───────────┼───────────┤

│Размеры колонки                         │1000 х 3 мм│1000 х 3 мм│

│Материал колонки                        │стеклянная │стеклянная │

│Форма колонки                           │спиральная │спиральная │

│Расход газа носителя, мл/мин.           │           │           │

│       через колонку                    │60         │60         │

│       на поддув детектора              │150        │150        │

│Температура: испарителя                 │230        │230        │

│             термостата колонок         │190        │190        │

│             термостата детекторов      │220        │220        │

│Хроматографируемый объем, мкл           │2          │2          │

│Время удерживания, мин.                 │4,1        │12,5       │

│Число теоретических тарелок             │356        │812        │

│ВЭТТ                                    │2,8        │1,23       │

│Линейный динамический диапазон, мкг     │1 - 60                 │

└────────────────────────────────────────┴───────────────────────┘

2.6. Обработка результатов анализа

Количественный расчет препарата в анализируемой навеске проводят по следующей формуле:

                                       Н х V

                                            1

                                 Х = ----------,

                                     К х V  х А

                                          2

    где:

    Х - количество препарата в пробе, мг/кг;

    Н - высота пика препарата в анализируемой пробе, мм;

    V  - объем анализируемой пробы, мл;

     1

    V  - объем инъектируемой пробы, мкл;

     2

    А - навеска, г;

    К - калибровочный коэффициент.

Для расчета калибровочного коэффициента проводят хроматографирование ряда стандартных растворов. К рассчитывают по формуле:

                            Н      Н            Н

                        1    1      2            n

                    К = - [---- + ---- + ... + ----],

                        n  С V    С V          С V

                              1      2            n

    где:

    n - число введенных стандартных проб;

    Н - высота пика стандартного раствора, мм;

    С - концентрации стандартного раствора, мкг/мл;

    V    - объем, вводимый в хроматограф, мкл.

     1-n

Содержание микроколичеств тербацила в пробах вычисляют как среднее из трех параллельных определений.

2.7. Авторы

Методика разработана во ВНИИ эфиромасличных культур старшим научным сотрудником лаборатории гербицидов Барановым Ю.С. под руководством доктора биологических наук Клисенко М.А. и кандидата сельскохозяйственных наук Хилик Л.А.