Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

28 января 1980 г. N 2125-80

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ НИТРОХЛОРА И ПРЕФОРАНА В ЭФИРНЫХ МАСЛАХ

И ЭФИРОМАСЛИЧНОМ СЫРЬЕ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Характеристика анализируемых гербицидов

Нитрохлор - отечественный гербицид, рекомендованный для борьбы с сорняками на шалфее мускатном.

Химическое название: 2',4'-дихлорфенил-4-нитрофениловый эфир.

Структурная формула:

        ___ Cl    ___

        ---       ---

    Cl/     \-O-/     \NO                                 Мол. масса 284,1.

      \\   //   \\   //  3                                C  H Cl NO .

        ---       ---                                      12 7  2  3

    Эмпирическая формула: C  H O Cl N.

                           12 7 3  2

    Физико-химические  свойства:  светло-желтое  кристаллическое  вещество,

температура плавления 70 - 71°.  Растворимость в воде при 25 °C - 0,8 мг/л.

Хорошо  растворим  в ацетоне, бензоле, диоксане, четыреххлористом углероде,

хуже в спиртах. ЛД   для крыс - 3050 мг/кг.

                  50

Концентрат эмульсии с содержанием д.в. нитрохлора 25% используется при внесении по вегетирующим растениям.

Префоран - гербицид фирмы Сиба-Гейги, рекомендованный для борьбы с сорняками на шалфее мускатном.

Химическое название: 2,4'-динитро-4-трифторметил-дифениловый эфир.

Структурная формула:

            NO

         ___  2    ___

         ---       ---

    F C/     \-O-/     \NO                               Мол. масса 328,21.

     3 \\   //   \\   //  2

         ---       ---

    Эмпирическая формула: C  H O N F .

                           13 7 5 2 3

    Физико-химические  свойства:  светло-желтое  кристаллическое  вещество,

температура плавления  91,6  -  92,2 °C. Трудно растворяется в воде, хорошо

растворим  в  ацетоне, бензоле, ксилоле, диметилформамиде, спирте. ЛД   для

                                                                     50

крыс - 10000 мг/кг.

Концентрат эмульсии с содержанием д.в. префорана 30% используется при внесении по вегетирующим растениям.

2. Методика определения нитрохлора и префорана

в эфирном масле и эфиромасличном сырье

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении нитрохлора и префорана из растительного образца ацетоном с последующим перераспределением из ацетоно-водной среды в н-гексан, очистке гексановых экстрактов растений и растворов эфирного масла концентрированной серной кислотой и определении методом ГЖХ с детектором постоянной скорости рекомбинации.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Предел обнаружения: нитрохлора - 0,1 мг, префорана - 0,2 мг.

Предел обнаружения нитрохлора в шалфейном масле - 0,01 мг/кг, в эфиромасличном сырье - 0,002 мг/кг.

Предел обнаружения префорана в шалфейном масле - 0,02 мг/кг, в эфиромасличном сырье - 0,004 мг/кг.

Процент определения нитрохлора в шалфейном масле - 80,4%. Стандартное отклонение при n = 19 - 1,88%.

Процент определения префорана в шалфейном масле - 82,1%. Стандартное отклонение при n = 19 - 1,91%.

Процент определения нитрохлора в растении шалфея мускатного - 75,7%. Стандартное отклонение при n = 19 - 1,72%.

Процент определения префорана в растении шалфея мускатного - 78,3%. Стандартное отклонение при n = 19 - 1,53%.

2.1.3. Избирательность метода

Прочие рекомендованные на шалфее пестициды - хлорофос, диурон, которан, прометрин - определению не мешают.

2.2. Реактивы и растворы

- Ацетон - х.ч.

- Гексан - х.ч.

- Серная кислота конц. - х.ч.

- Сульфат натрия безводный - х.ч.

- Азот особой чистоты (газ-носитель)

- Стандартные растворы препаратов в ацетоне - 0,5 мкг/мл

- 5% силикона SE-30, нанесенного на хроматон N-AW, силанизированный DMCS (0,16 - 0,20 мм)

- 5% силикона XE-60, нанесенного на хроматон N-AW, силанизированный DMCS (0,16 - 0,20 мм).

2.3. Приборы, аппаратура и посуда

- Хроматограф "Цвет-106" с детектором постоянной скорости рекомбинации

- Микрошприц МШ-10 - 10 мкл

- Ротационный испаритель PVO-64 или эквивалент

- Гомогенизатор - тип 302 либо эквивалент

- Аппарат для встряхивания - АВУ или эквивалент.

Используется стандартная химическая посуда из стекла (колбы Бунзена, Эрленмейера, воронки Бюхнера, химические и делительные, пипетки и др.), выпускаемая отечественной промышленностью.

2.4. Подготовка к определению

Органические растворители перед началом работы необходимо очистить и перегнать, сульфат натрия прокалить при температуре 300 - 400 °C. Хроматографическая колонка и детектор кондиционируются в режимных условиях в течение 2 - 1 часов.

2.5. Ход анализа

2.5.1. Отбор образцов

Отбор проб на анализ производится в соответствии с "Правилами отбора проб на анализ пестицидов". Отбирают 50 г свежесобранной зеленой массы и 1 г эфирного масла шалфея мускатного.

2.5.2. Проведение определения

2.5.2.1. Эфирное масло шалфея мускатного. Навеску 10 г растворяют в 50 мл н-гексана. В делительной воронке емк. 250 мл гексановый раствор промывают концентрированной серной кислотой 3 х 30 мл. Верхний гексановый слой пропускают через безводный сульфат натрия в коническую колбу емкостью 100 мл. Серную кислоту собирают в колбу емкостью 250 мл и через 1,5 - 2 часа снова отделяют гексановый слой, который присоединяют к основному раствору. Объединенный гексановый раствор упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре бани 50 °C. К сухому остатку по стенкам колбы прибавляют 1 мл н-гексана, закрывают и встряхивают колбу. В испаритель хроматографа вводят 2 мкл раствора.

2.5.2.2. Эфиромасличное сырье шалфея мускатного. Навеску 50 г гомогенизируют с 200 мл ацетона в гомогенизаторе в течение 15 - 20 мин. со скоростью 8000 об./мин., встряхивают 30 - 40 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в колбу емкостью 500 мл. Стакан гомогенизатора промывают 3 х 20 мл ацетоном и через фильтр промывкой ацетон присоединяют к основному экстракту. Упаривают ацетоновый экстракт на водяной бане при температуре 50 °C до 10 мл. Остаток количественно переносят в делительную воронку емк. 500 мл, прибавляют 200 мл дистиллированной воды и реэкстрагируют нитрохлор и префоран 3 х 30 мл н-гексаном. Объединенный гексановый экстракт сушат, пропуская через безводный сульфат натрия, и на делительной воронке промывают концентрированной серной кислотой 3 х 30 мл. Дальнейший ход анализа аналогичен вышеописанному для эфирного масла шалфея.

2.6. Обработка результатов анализа

Количественный расчет препарата в анализируемой навеске проводят по следующей формуле:

                                  Н х V

                                       1

                              Х = ------ х А,

                                  K х V

                                       2

    где:

    Х - количество препарата в пробе, мг/кг;

    Н - высота пика препарата в анализируемой пробе, мм;

    V  - объем анализируемой пробы, мл;

     1

    V  - объем инъектируемой пробы, мкл;

     2

    А - навеска, г;

    K  -  калибровочный  коэффициент,  который  определяется  по  следующей

формуле:

                          Н      Н      Н      Н

                      1    1      2      3      4

                  K = - (---- + ---- + ---- + ----),

                      4  С V    С V    С V    С V

                            1      2      3      4

    где:

    Н ; Н ; Н ; Н  - высота пиков стандартного раствора препаратов, мм;

     1   2   3   4

    V ;  V ;  V ;  V  - объемы стандартного раствора препаратов, вводимые в

     1    2    3    4

хроматограф, мкл;

    С - концентрация стандартного раствора 0,5 мг/кг.

Содержание микроколичеств нитрохлора и префорана в пробах вычисляют как среднее из трех параллельных определений.

УСЛОВИЯ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО РАЗДЕЛЕНИЯ

┌────────────────────────────────────────┬───────────┬───────────┐

│                Колонка                 │ 5% SE-30  │ 5% XE-60  │

├────────────────────────────────────────┼───────────┼───────────┤

│Размер колонки, мм                      │1000 х 3   │1000 х 3   │

│Материал колонки                        │стекло     │стекло     │

│Форма колонки                           │спираль    │спираль    │

│Расход газа-носителя, мл/мин., через    │60         │60         │

│колонку                                 │           │           │

│На поддув детектора, мл/мин.            │150        │150        │

│Температура, °C: испарителя             │200        │220        │

│                 термостата колонок     │200        │200        │

│                 термостата детекторов  │240        │240        │

│Хроматографируемый объем, мкл           │2          │2          │

│Время удерживания нитрохлора, мин.      │6,73       │11,75      │

│Время удерживания префорана, мин.       │5,33       │25,25      │

│Число теоретических тарелок для         │154        │552        │

│нитрохлора                              │           │           │

│Число теоретических тарелок для         │132        │564        │

│префорана                               │           │           │

│ВЭТТ для нитрохлора                     │6,49       │1,81       │

│ВЭТТ для префорана                      │7,58       │1,77       │

│Линейный динамический диапазон для      │0,1 - 5    │           │

│нитрохлора, нг                          │           │           │

│Линейный динамический диапазон для      │0,2 - 1,2  │           │

│префорана, нг                           │           │           │

└────────────────────────────────────────┴───────────┴───────────┘

2.7. Авторы

Методика разработана во ВНИИ эфиромасличных культур старшим научным сотрудником лаборатории гербицидов Барановым Ю.С., Брынзой Е.А. под руководством кандидата сельскохозяйственных наук Хилик Л.А.