"Методические указания по определению актеллика в растительном материале, в почве и в воде хроматографией в тонком слое и на газовом хроматографе" // Технорма.RU

Утверждаю

Заместитель Главного

государственного

санитарного врача СССР

А.И.ЗАИЧЕНКО

19 октября 1979 г. N 2085-79

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ АКТЕЛЛИКА В РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ,

В ПОЧВЕ И В ВОДЕ ХРОМАТОГРАФИЕЙ В ТОНКОМ СЛОЕ

И НА ГАЗОВОМ ХРОМАТОГРАФЕ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Краткая характеристика препарата

1.1. Актеллик

1.2. 0,0-диметил-0-(диэтиламино-6-метилпиримидил-4)тиофосфат

1.3. Структурная формула:

CH O S CH

3 \|| --- / 3

P-O-// \\N

/ \ ___ /

CH O N --- C H

3 \ / 2 5

C H Мол. масса = 305,35.

2 5

1.4. Пиримифос-метил, ПП-511, актеллик

1.5. Химически чистое вещество актеллика представляет собой жидкость

светло-желтого цвета. Хорошо растворяется в большинстве органических

растворителей, слабо растворим в воде - 5 мг/л при температуре 30°.

-4

Удельный вес - 1,157 при 30°, давление пара - 1 х 10 . Разрушается в

сильнокислых и щелочных средах.

Препарат малотоксичен для теплокровных животных - при оральном введении

ЛД для мышей составляет 1180 мг/кг. Препарат опасен для птиц (ЛД 30 -

50 50

60 мг/кг) и рыб (ЛД 0,3 - 27 мг/кг).

Выпускается в форме 25-процентного концентрата эмульсии, 25-процентного препарата для ультрамалообъемного опрыскивания.

2. Методика определения актеллика

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении актеллика из растительных проб и воды

органическими растворителями (хлороформом, 10 - 20-процентным ацетоном в

гексане или 50-процентным водным ацетоном). Из почвы экстрагируют

инсектицид смесью ацетона с 0,05 н раствором CaCl . Очистка экстрактов

способом перераспределения между двумя несмешивающимися растворителями и на

хроматографических колонках. Количественное определение проводят

хроматографическим в тонком слое методом или на газовом хроматографе с

термоионным детектором.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

ГЖХ ТСХ

Минимально детектируемое количество 10 нг 0,5 - 3 мкг

Нижний предел определения 0,002 мг/кг 0,1 мг/кг

P - размах варьирования, %

в растениях 85,0 - 91,0 86,0 - 91,5

в почве 92,5 - 97,5 92,5 - 97,6

с - среднее значение определения, %

в растениях 88,5 85,5

в почве 95,0 95,0

S - стандартное отклонение, %

в растениях 2,5 2,5

в почве 2,5 2,5

Доверительный интервал среднего при

P = 0,95 и n = 5, %

для растений 88,5 +/- 2,5

для почвы 95,0 +/- 2,5

2.1.3. Избирательность метода

Другие фосфорорганические инсектициды определению не мешают.

2.2. Реактивы и растворы

Хлороформ, х.ч., ГОСТ 3160-51, - CHCl .

Гексан, х.ч., МРТУ 6-09-2937-66, - CH (CH ) CH .

3 2 4 3

Ацетон, ч., ГОСТ 2603-63, - CH COCH .

3 3

Ацетонитрил, ч., МРТУ 6-09-6448-69, - CH CN.

Диметилформамид, ч., МРТУ 6-09-2068-65, - HCON(CH ) .

3 2

Бензол, ч.д.а., ГОСТ 5955-68, - C H .

6 6

Натрий сернокислый безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-66, - Na SO .

2 4

Уголь активированный марки КАД - молотый или ОУ-А.

Окись алюминия для хроматографии, МРТУ 6-09-5296-68-4, - Al O .

2 3

Силикагель КСК или пластинки "Силуфол UV-254".

5% SE-30 на хроматоне N-AW-ДМСS (0,16 - 0,20 мм).

Азот, осч.

Водород.

Проявляющие реагенты:

0,5-процентный раствор 2,6-дибром-N-хлорхинонимина в гексане, после опрыскивания нагревание пластинки при 110° в течение 5 мин.

0,5-процентный раствор бриллиантового зеленого в ацетоне, затем экспозиция пластинки в парах брома 20 - 30 сек.

0,05-процентный раствор бромфенолового синего в 0,5-процентном растворе азотнокислого серебра, приготовленного на ацетоне. После проветривания хроматограммы и прогревания ее в термостате при 35 - 40° вновь опрыскивают 5-процентным раствором уксусной кислоты (лимонной кислоты).

2-процентный раствор 4-(P-нитробензил)пиридина в ацетоне после нагревания хроматограммы при 110° в течение 5 мин. вновь опрыскивают 10-процентным раствором тетраэтиленпентамина в ацетоне.

Реактив Драгендорфа: раствор А - 0,85 г азотнокислого висмута растворяют в смеси 40 мл дистиллированной воды и 100 мл 40-процентной серной кислоты (серную кислоту можно заменить 10 г винной кислоты); раствор Б - 8 г йодистого калия растворяют в 20 мл воды. Растворы А и Б смешивают. Перед употреблением к 6 мл полученной смеси приливают 6 мл 20-процентной серной кислоты (или 12 г винной кислоты) и доводят объем до 25 мл водой.

Стандартный раствор актеллика в ацетоне или в гексане - 1,0 - 5,0 мкг/мл.

2.3. Приборы и посуда

Колбы конические со шлифами и пробками на 50 и 250 мл, ГОСТ 10394-72.

Колбы круглодонные со шлифами для отгонки растворителей, ГОСТ 10394-72.

Делительные воронки на 50 и 100 мл, ГОСТ 8613-75.

Воронки, ГОСТ 8613-75.

Колбы мерные, ГОСТ 1770-74.

Колонки для адсорбционной хроматографии (300 х 15 мм), МРТУ 42-2590-66.

Аппарат для встряхивания колб.

Ротационный вакуумный испаритель, МРТУ 42-2589-66.

Холодильник бытовой.

Термостат.

Хроматографическая камера, ГОСТ 10565-63.

Микропипетки 0,1 - 0,2 мл, ГОСТ 20292-74.

Хроматоскоп (хемоскоп).

Камера для опрыскивания, ГОСТ 10565-63.

Опрыскиватель, ГОСТ 19391-68.

Микрошприцы на 10 мкл.

Газовый хроматограф с термоионным детектором (ДТИ).

2.4. Подготовка к определению

Растительную пробу (овощи, фрукты, зеленую массу) измельчают ножом на кусочки 0,5 х 0,5 х 0,5 куб. см и отбирают среднюю пробу 25 г.

Почву в естественном состоянии или воздушно-сухую просеивают через сито и для анализа отбирают 10 г.

Проба воды - 100 мл.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Экстракция и очистка экстрактов

Анализируемые навески помещают в конические колбы емкостью 250 мл, пробы воды - в делительные воронки, куда добавляют по 10 г хлористого натрия.

Из растений актеллик экстрагируют трижды по 50 мл 20-процентного ацетона в гексане либо 50-процентным водным ацетоном, либо 50 мл хлороформа; из почвы - 50 мл смеси ацетона с 0,05 н водным раствором хлористого кальция (1:1); из воды - хлороформом порциями: 120, 100, 75 мл. Экстрагируют при встряхивании в течение 1 часа. Экстракты отфильтровывают через бумажный фильтр. Объединенные экстракты помещают на 1 час в холодильник. При выпадении осадка пробы следует отфильтровать вторично. Экстракты подвергаются очистке:

а) очистка после экстракции 20-процентным ацетоном в гексане. Экстракт помещают в делительную воронку и отделяют водно-ацетоновую фракцию от гексановой. Водно-ацетоновую фракцию промывают гексаном еще два раза. Объединенные гексановые экстракты фильтруют через слой безводного сернокислого натрия, концентрируют под вакуумом при 40 - 50° до 5 мл. После охлаждения добавляют к ним 5 мл холодного ацетонитрила. Ацетонитрил можно заменить диметилформамидом, однако с первым растворителем очистка происходит значительно лучше. Пробу встряхивают 1 - 2 мин. Гексановый слой отделяют в делительной воронке и вторично дважды чистят пробу ацетонитрилом (диметилформамидом), если это необходимо. Ацетонитрильные (диметилформамидные) экстракты объединяют, переносят в делительную воронку, добавляют к ним 30 мл воды и 20 мл гексана, встряхивают 1 - 2 мин. и после разделения слоев гексановый отделяют, а водно-ацетонитрильный еще раз промывают гексаном и отбрасывают. Объединенные гексановые экстракты сушат безводным сернокислым натрием путем фильтрования и концентрируют под вакуумом до 5 мл. Если проба очищена недостаточно, то ее следует пропустить через колонку (30 см х 1,5 см), заполненную слоем сернокислого натрия (2 - 3 см), окиси алюминия для хроматографии (3 см), активированного угля КАД - молотый или ОУ-А (3 см) и безводного сернокислого натрия (1 см). Предварительно через колонку пропускают 40 - 50 мл хлороформа для уменьшения сорбционной емкости угля. Из колонки актеллик элюируют 120 мл хлороформа при отсасывании с помощью водоструйного насоса. Хлороформ концентрируют до объема 0,3 - 0,5 мл и количество инсектицида определяют хроматографическими методами;

б) очистка после экстракции хлороформом. Полученный экстракт фильтруют

через слой безводного сернокислого натрия и концентрируют под вакуумом до

0,5 - 1,0 мл. Остаток растворителя испаряют на воздухе. К сухому остатку

приливают 30 мл смеси ацетона с 0,05 н CaCl (соотношение компонентов 1:1),

пробу переносят в делительную воронку, фильтруя через бумажный фильтр,

колбу споласкивают еще 20 мл смеси ацетона с CaCl . В воронку добавляют 30

мл гексана для извлечения токсиканта. Гексановую фракцию отделяют,

водосолеацетоновую промывают еще два раза гексаном по 20 мл. Объединенный

гексановый экстракт фильтруют через безводный сернокислый натрий и

концентрируют до 0,3 - 1,0 мл. Если проба очищена недостаточно, то ее

дополнительно чистят на колонке, как указано выше;

в) очистка после экстракции водным ацетоном. Объединенные экстракты переносят в делительную воронку, добавляют 30 мл гексана для извлечения токсиканта. Далее поступают так, как описано в способе очистки "б".

Экстракты из почвы очищают путем переэкстракции в н-гексане (смотри способ "б").

2.5.2. Хроматография в тонком слое

На расстоянии 2 см от нижнего края хроматографической пластинки с тонким слоем силикагеля, в который внесен флуоресцеин, или на "Силуфол UV-254" наносят сконцентрированные экстракты проб и стандартный раствор актеллика в виде пятен диаметром не более 0,5 см. Если в пробе содержится много инсектицида, то рекомендуется брать часть пробы или наносить экстракт в 4 - 5 точек. Стенки колб тщательно смывают несколькими каплями растворителя, который также наносят в центр пятна. Хроматографические пластинки ставят в камеру для хроматографирования и ожидают, пока фронт растворителя поднимется на высоту 10 см. Хроматографируют в системе гексан - ацетон (5:1) или гексан - этилацетат (7:3). Далее пластинку подсушивают на воздухе и проявляют одним из проявляющих реагентов. Следует указать, что наибольшей чувствительностью обладает проявитель с 2,6-дибром-N-хлорхинонимином и 4-(P-нитробензил)пиридином.

Пластинки со слоем силикагеля, в который внесен флуоресцирующий краситель, или пластинки "Силуфол UV-254" можно просматривать в хроматоскопе, не проявляя их. Инсектицид определяют по тушению флуоресценции.

R актеллика в системе гексан - ацетон (5:1) составляет 0,75, а в

системе гексан - этилацетат (7:3) - 0,51.

Содержание актеллика в исследуемом объекте вычисляют по формуле:

A х 1000

X = --------,

где:

X - содержание препарата в пробе, мг/кг;

A - количество препарата, найденное в пробе при сравнении со стандартом, мкг;

P - навеска исследуемой пробы, г.

2.5.3. Газохроматографическое определение

После отгонки растворителя к сухому остатку добавляют 1 или <...> мл гексана, колбу закрывают пробкой, тщательно обмывая ее внутреннюю поверхность. Аликвотную часть пробы (2 - 5 мкл) вводят в испаритель хроматографа.

Условия хроматографирования: хроматограф с термоионным детектором

(ДТИ), колонка стеклянная, заполненная 5% SE-30 на хроматоне N-AW-ДМСS

(0,16 - 0,20 мм). Температура колонки 190°, испарителя 230°. Скорость газа-

-11

носителя азота 60 мл/мин. Фоновый ток (1 - 4) х 10 А, рабочая шкала

-10

электрометра 2,5 х 10 А. Время удерживания актеллика в указанных

условиях 2,8 мин.

Содержание актеллика в пробе определяют методом стандартов и

рассчитывают по формуле:

H х V х C х V

2 1 1 3

X = -----------------,

H х V х P

1 2

где:

X - количество препаратов в пробе, мг/кг;

C - количество препарата в стандартном растворе, мкг/мл;

H - высота пика стандартного раствора, мм;

H - высота пика анализируемого раствора, мм;

V - объем стандартного раствора, введенного в хроматограф, мкл;

V - объем анализируемого раствора, введенного в хроматограф, мкл;

V - объем экстракта пробы для анализа, мл;

P - навеска пробы, г.

2.6. Обработка результатов анализа приведена в 2.5.2 и 2.5.3.

2.7. Авторы

Настоящая методика включает разработки авторских коллективов:

1. Петрова Т.М., Андреев Ю.Б., Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений, г. Ленинград.

2. Красных А.А., Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, пос. Рамонь Воронежской области.